甘薯叶片蔗糖酶的分离纯化及其部分性质

纯化酶经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示单一蛋白带,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示一条蛋自带,其亚基分子量为３９．８ｋＤ。用ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００凝胶过滤测得全酶的分子量为７９．４ｋＤ,该酶由两个相同亚基组成。其表观Ｋｍ为１２ｍｍｏｌ／Ｌ,Ｖｍａｘ为９９．５ｍｇ还原糖ｍｇ－１ｐｒｏｔｅｉｎｈ－１。     

柑叶片蔗糖酶的分离纯化及其部分性质的研究

柑（Ｃｉｔｒｕｓｒｅｔｉｃｕｌａｔａ Ｂｌａｎｃｏ）幼叶中存在高活性的酸性蔗糖酶。经硫酸铵盐析、ＤＥＡＥ－琼脂糖离子交换层析、ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００ 凝胶层析纯化,活性回收率６．４％ ,纯化倍数１７９．２ 倍。纯化的酶经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示单一蛋白带,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示１ 条蛋白带,其亚基分子量４０ ｋＤ。用ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００ 凝胶层析法测得分子量为８０ ｋＤ。推测该酶由两个相同亚基构成。以蔗糖为底物测定该酶的表观Ｋｍ 为１．６×１０－ ２ ｍ ｏｌ·Ｌ－ １,Ｖｍ ａｘ为１００ ｍ ｇ 还原糖·ｍ ｇ－ １蛋白质·ｈ－ １。最适ｐＨ ５．０,酸碱稳定区在ｐＨ ４．５—５．５ 之间。最适温度５５℃     

花生根瘤菌类菌体氢酶的分离提纯及特性

花生根瘤菌类菌体经超声波破碎,ＴｒｉｔｏｎＸ－１００溶解,正已烷－硫酸铵处理后,再经ＤＥＡＥ－纤维素和Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ凝胶柱层析等纯化步骤,获得凝胶电泳纯的膜结合态氢酶,比活为７１．４μｍｏｌＨ２ｍｇ－１Ｐｒｏｔｍｉｎ－１,为类菌体吸Ｈ２活性的２１１倍。纯化的氢酶分子量为１１０ｋＤ。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后,呈现两个蛋白带,分子量分利为６５ｋＤ和３５ｋＤ。纯酶的Ｎｉ含量为０．６２ｍｏｌＮｉ／ｍｏｌ氢酶。在磷酸缓冲液中其活性的最适ｐＨ为６．５。ＤＣＩＰ、亚甲蓝、铁氰化钾、细胞色素Ｃ均可作为氢酶的电子受体,其中以ＤＣＩＰ为最适。     

盐生杜氏藻生油—3—磷酸脱氢酶的分离化及其特性的研究

利用ＰＥＧ分级,ＤＥＡＥ离子交换层析,Ｂｈｕｅ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ拟亲和层析,ＭｏｎｏＱ离子交换层析等手段,分离纯化直二氏藻甘油三磷酸（Ｇ－３－Ｐ）脱氢酶（ＥＣ１．１．１．８）得到比活为１２．６ｕ／ｍｇ的电泳纯的酶,并对此酶的生化特性进行了研究。４－２０％非变性聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳测得全酶分子量约为２７０ｋＤ,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表明该酶只有一种分子量约为６５ｋＤ的亚基,据此推测该酶应为同四聚体。酶     

林生山黧豆谷氨酸脱羧酶的分离纯化及部分性质的研究

以林生山黧豆为材料,利用硫酸铵分段盐析,丙酮沉淀,ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ离子交换柱层析,ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ３００凝胶过滤柱层析及ＦＰＬ－ＭｏｎｏＱ柱层析技术,以聚酰胺薄膜层析荧光定量法为酶活力检测手段,分离纯化了谷氨酰羧酶,达到电泳银染纯,纯化后的林生山黧豆谷氨酸脱羧酶活力达３７５．０９Ｕ．ｍｇ＾－１,纯化保数３８．２倍,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定,其亚基分子量为７０ｋＤ,经工ＰＡＧＥ确定     

限制性核酸内切酶Bsp 63Ⅰ的纯化及性质研究

用Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｐｈａｅｒｉｃｕｓ６３菌为材料,经ＤＮＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ和ＣｉｂａｃｒｏｎＢｌｕｅＦ３ＧＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ两步亲和层析,将Ｂｓｐ６３Ⅰ纯化到均一程度。酶比活力达６１４００Ｕ／ｍｇ蛋白。用凝胶过滤法测得该酶分子量为１１３８００。该酶样品在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ中呈现为一条蛋白带,并测得其亚基分子量为５６８００。用ＤＮＳ－Ｃｌ法测得该酶Ｎ－末端氨基酸为丙氨酸。上述结果表明该酶分子是由两个相同亚基组成。     

胞外青霉素酰化酶的纯化及部分理化性质

巨大芽孢杆菌产胞外青霉素酰化酶发酵液经硫酸铵分级抽提及Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００、羟基磷灰石、ＤＥＡＥ－纤维素ＤＥ５２等层析步,提纯了青霉素酰化酶,得到电泳均一的酶制剂,纯酶比活力约为２５Ｕ／ｍｇ蛋白,纯化４９倍,活力回收５８％,经ＰＡＧＥ及ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测知该酶不含亚基,其分子量约为１４０ｋＤ。该酶最适ｐＨ为９．０,最适温度４７℃,用底物ＮＩＰＡＢ测活,其Ｋｍ值为６．２×１０＾－４ｍｏｌ／Ｌ     

地中海拟无枝酸杆菌甲基丙二酰CoA转羧基酶的纯化及酶学特性

经硫酸铵沉淀,ＤＥＡＥ－纤维素吸附,磷酸纤维素吸附和Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ分子筛层析四步从地中海拟无枝酸杆菌纯化得到电泳纯ＭＣＴ酶,酶比活力为３．２１Ｕ／ｍｇ,纯化倍数１７８,酶活回收１４．９％。酶反应的最适ｐＨ和温度分别为７．０和３５℃。纯化ＭＣＴ酶对底物丙酰ＣｏＡ和草酰乙酸的米氏常数分别为０．０２７ｍｍｏｌ／Ｌ０．０３５０９ｍｍｏｌ／Ｌ．经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０测定酶分子量为２０００００,ＳＤＳ－取丙烯酰胺电泳凝胶显示一条分子量６８０００的亚基蛋白带,说明该酶由三个等大小亚基组成．薄层等电聚焦测定酶等电点为ｐＩ６．０．二价金属离子Ｃｏ￣（２＋）和Ｆｅ￣（３＋）促进酶活力．采用原生质体裂解的方法发现ＭＣＴ酶是可能分布于胞浆和细胞膜上．     

猴头子实体锰型超氧物歧化酶的纯化及其性质鉴定

猴头子实体的超氧物歧化酶仅Ｍｎ－ＳＯＤ１种,有其资源和学术研究上的意义。其粗酶液经（ＮＨ４）２ＳＯ４盐析,ＤＥ５２和ＣＭ５２离子交换柱层析,纯化到电泳单斑点均一程度,其比活性为３０９６．５ｕ／ｍｇ,活性回收率为１４．８％。纯化的Ｍｎ－ＳＯＤ分子量为４７．０ＫＤ,亚基分子量为２３．３ＫＤ。金属元素分析表明每个亚基含１个Ｍｎ原子。该酶在紫外区有２个吸收峰,分别在２１８．４ｎｍ和２７６．０ｎｍ。该酶的理     

亲和层析法分离大鼠脂肪细胞膜上腺苷A1受体

本文采用腺苷亲和层析法从大鼠脂肪细胞膜上分离出了一种亚基分子量为３８ｋＤ的腺苷结合蛋白质。此蛋白在ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳上显示单一带,糖蛋白染色阳性;能与〔８－＾３Ｈ〕腺苷特异结合（Ｋｄ＝０．２６９ｎｍｏｌ／Ｌ,Ｂｍａｘ＝６．０５ｐｍｏｌ／ｍｇ．Ｐｒ）;结合抑制实验表明它与腺苷Ａ１受体激动剂Ｒ－ＰＩＡ,Ａ２受体激动剂ＮＥＣＡ和腺苷的亲和力大小顺序为：Ｒ－ＰＩＡ＞腺苷＞ＮＥＣＡ。这表明所分离出的     

贻贝（Perna viridis）超氧化物歧化酶的纯化及部分性质研究

采用５５－６０℃热处理,硫酸铵分级深沉和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ柱层析将贻贝Ｃｕ,Ｚｎ－ＳＯＤ纯化到均一程度。每１００ｇ鲜贻贝肉可得到ＳＯＤ制品,总活力３６８９ｕ,比活力７８２ｕ／ｍｇ,回收率为２１％。测得该酶分子量为３２ｋＤ,亚基分子量约为１６．４ｋＤ,最大紫外吸收波长为２６８ｎｍ,,贻贝Ｃｕ,Ｚｎ－ＳＯＤ具有一定的耐热性,较强的抗酸、抗碱及抗脲性。     

甲基单胞菌Methylomonas sp.GYJ3中甲烷单加氧酶羟基化酶组分…

从Ｍｅｔｈ ｙｌｏｍｏｎａｓ ｓｐ．ＧＹＪ３菌株中经ＤＮＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣｌ－６Ｂ阴离子交换层析和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ３００凝胶层析分离出纯化出甲烷加氧酶羟基酶组分,经ＨＰＬＣ分析,纯度大于９０％,分子量为２４０ｋＤ,纯化们数为３．９,比活为２２５ｎｍｏｌ环氧丙烷每分钟毫克蛋白,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表明,羟基化酶由三个亚基组成,亚基分子量为５６、４３、２７ｋＤ．ＩＣＰＡＥＳ测定羟基化酶的Ｆｅ     

大鼠,小鼠胰蛋白酶的分离纯化及动力学性质

采用ＳＴ１－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ亲和层析的方法,从鼠新鲜胰脏中分离得到纯的胰蛋白酶。大鼠胰蛋白酶的比活为２４６１５ＢＡＥＥＵ／ｍｇ蛋白,总活性回收率４７％;小鼠胰蛋白酶的比活为３２７６８ＢＡＥＥＵ／ｍｇ蛋白,总活性回收率５５％。经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,二者的等电点均匀呈现单一蛋白带,两者的分子量都是２４ｋＤ。用等电聚焦电泳测定。二者的等电点均为ｐＩ９．５以上,对它们的动力学性质作了研     

胞外青霉素酰化酶的纯化及部分理化性质

巨大芽孢杆菌产胞外青霉素酰化酶发酵液经硫酸铵分级抽提及ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００、羟基磷灰石、ＤＥＡＥ纤维素ＤＥ５２等层析步骤,提纯了青霉素酰化酶,得到电泳均一的酶制剂。纯酶比活力约为２５Ｕ／ｍｇ蛋白,纯化４９倍,活力回收５８％,经ＰＡＧＥ及ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测知该酶不含亚基,其分子量约为１４０ｋＤ。该酶最适ｐＨ为９．０,最适温度４７℃,用底物ＮＩＰＡＢ测活,其Ｋｍ值为６．２×１０~（－４）ｍｏｌ／Ｌ,Ｖｍ值为１．２４×１０４ｍｏｌ／Ｌ。此外还探讨了部分金属离子对该酶的影响。     

枸杞果实铁型超氧物歧化酶的纯化及性质

枸杞果实Ｆｅ－ＳＯＤ粗提液经硫酶铵盐析、离子交换柱层析及凝胶过滤,纯化到电泳单班点均一程度。纯化的Ｆｅ－ＳＯＤ分子量为４４．６ｋＤ,亚基分子量为２２．０ｋＤ。金属元素分析表明,每分子酶含１个Ｆｅ原子。该酶在紫外区最大吸收值为２７８ｎｍ。Ｈ２Ｏ２明显抑制该酶活性,ＫＣＮ对酶活性无影响。该酶氨基酸组成与高等植物和蓝绿藻的Ｆｅ－ＳＯＤ相似,但它具有较高甘氨酸,酸性氨基酸与碱性氨基酸比值高于等植物而与低等     

菜豆幼苗EPSP合成酶的分离纯化和它的部分性质

利用硫酸铵分级沉淀,Ｓｅｐｈｅｄｅｘ Ｇ－５０凝胶柱层析,ＦＰＬＣ Ｍｏｎｏ－Ｑ和磷酸纤维素离子层析法从菜豆幼苗中分离提纯了ＥＰＳＰ合成酶。该酶被纯化２９６１．６倍,比活性达到６２１９．４ｎｍｏｌｍｇ＾－１蛋白ｍｉｎ＾－１。该酶分子量经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测为５１ｋＤ,等电点为ｐＨ５．７,酶促反应最适ｐＨ７．５,最适温度４５℃。６．２μｍｏｌ／Ｌ的除草剂草甘膦能抑制ＥＰＳＰ合成酶活性的５０％。     

菠菜铁型超氧化物歧化酶的纯化及性质

用聚丙烯胺梯度凝胶电泳法检测出菠菜ＳＯＤ同工酶谱带中含３条Ｆｅ－ＳＯＤ活性带,菠菜叶Ｆｅ－ＳＯＤ粗提取液经硫酸铵分部沉淀,ＤＥＡＥ－纤维素－Ａ５２和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱层析,纯化出单一的Ｆｅ－ＳＯＤ活性带,纯化酶的分子量为４２．６ｋＤ,亚基分子量为２１ｋＤ。对金属元素的分析表明,该酶每分子含２．６个Ｆｅ原子,该酶紫外区最大吸收峰为２７８ｎｍ,等电点为４．６,氨基酸组成和其它来源的Ｆｅ－ＳＯ     

水稻氨基酰化酶的分离纯化与性质分析

氨基酰化酶是专一水解Ｎ－酰基化Ｌ－氨基酸的蛋白酶,从水稻黄化苗得到的抽提液,经过硫酸铵分级沉淀,丙酮分级沉淀和阴离子交换层析三个步骤,纯化得到了该酶,比活达到１００Ｕ／ｍｇ蛋白,在无还原剂在的ＳＤＳ－聚丙炮酰胺凝胶电泳下显单一条带,分子量为４０ｋＤ。而交层分析分析表明活性分子的分子量约９０ｋＤ,因此可推测它的活性分子由两个亚基通过非共份键作用组合而成。     

枸杞果实铁型超氧物歧化酶的纯化及性质

枸杞果实Ｆｅ－ＳＯＤ粗提液经硫酸铵盐析、离子交换柱层析及凝胶过滤,纯化到电泳单班点均一程度。纯化的Ｆｅ－ＳＯＤ分子量为４４．６ｋＤ,亚基分子量为２２．０ｋＤ。金属元素分析表明,每分子酸含１个Ｆｅ原子。该酶在紫外区最大吸收值为２７８ｕｍ。Ｈ２Ｏ２明显抑制该酶活性,ＫＣＮ对酶活性无影响。该酶氨基酸组成与高等植物和蓝绿藻的Ｆｅ－ＳＯＤ相似,但它具有较高甘氨酸,酸性氨基酸与碱性氨基酸比值高于高等植物而与低等植物及原核生物相近。     

韭菜线粒体锰超氧化物歧化酶纯化及性质研究

经硫酸铵沉淀、ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ层析和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２００凝胶过滤,将韭菜线粒体ＳＯＤ纯化到均一程度。从６０００ｇ韭菜叶片线粒体中纯化得到２．５ｍｇ酶,酶比活力达１２００Ｕ／ｍｇ蛋白。该酶对ＫＣＮ和Ｈ２Ｏ２都不敏感,热稳定性弱 外光区吸收峰在２８０ｎｍ,凝胶过滤法测得其分子量为８２００Ｄ,ＳＯＳ－ＰＡＧＥ法测定其亚基分子量的２２０００Ｄ,ＤＮＳ法测得其Ｎ－末端氨基酸为缬氨酸。上述结