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黄曲霉毒素B1的免疫检测:Ⅱ.抗体的产生及应用 总被引:9,自引:0,他引:9
将黄曲霉毒素B1肟(AFB1O)与牛血清白蛋白(BSA)的连接物,通过多点、多次免疫法注射免疫兔子。分析了抗体的产生进程、效价以及牧民性,注射抗原后的第60天开始有较明显抗休平生,第102天达到高峰,维持15天左右后开始下降;抗体的ELISA价高达1:30000;和黄曲霉毒素B1(AFB1)的结构类似物的竞争ELIS 有很好的特异性。运用该抗体,以ELISA分析检测了几种农产品及饲料中污染AFB1 相似文献
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将黄曲霉毒素B1肟(AFB1O)与牛血清白蛋白(BSA)的连接物,通过多点、多次免疫法注射免疫兔子。分析了抗体的产生进程、效价以及特异性。注射抗原后的第60天开始有较明显抗体产生,第120天达到高峰,维持15天左右后开始下降;抗体的ELISA效价高达1:30000;和黄曲霉毒素B1(AFB1)的结构类似物的竞争ELISA表明,抗体有很好的特异性。运用该抗体,以ELISA分析检测了几种农产品及饲料中污染AFB1,的含量,并和薄层层析法的分析结构进行了比较,结果表明当AFB1.的含量大于等于5ng/ml时。两者间有很好的相关性。 相似文献
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流行性出血热免疫球蛋白的研制 总被引:1,自引:0,他引:1
陈冬星 《微生物学免疫学进展》1994,22(3):1-6
本文首次报告采用纯化灭活流行性出血热(EHF)Ⅰ型疫苗免疫健康献血员,采集EHF抗体高滴度的血浆,用低温乙醇法及盐析法分离纯化三批EHF免疫球蛋白。结果表明:(1)采用0,1,3,4(月)或0,1,4,5(月)免疫程序,疫苗剂量1~2ml(0.15~0.30mg蛋白),受免献血员血清平均抗体滴度可达1∶406(ELISA)或1∶112(RPHI)。(2)通过生化检定,三批制品的电泳纯度为97.05%,96.84%,99.26%;IgG单体和二聚体含量为89.55%,91.30%和98.21%。(3)用空斑抑制中和试验及免疫印染试验证明所纯化的免疫球蛋白具有抗EHF病毒特异性。(4)三批EHF免疫球蛋白的效价测定,结果为ELISA滴度≥1∶512,RPHI滴度≥1∶1024,PRNT(中和抗体)滴度1∶40。按16%蛋白计,EHF免疫球蛋白的效价可达原料血浆的10倍以上。(5)无菌、安全、毒性及热原质试验检定结果,全部通过《中国生物制品规程》要求。 相似文献
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伤寒杆菌SOD抗体对小鼠腹腔吞噬细胞杀灭伤寒杆菌的影响 总被引:3,自引:1,他引:2
为了制备伤寒要直菌SOD抗体,研究该抗体对小鼠腹腔吞噬细胞杀灭伤寒杆菌的影响,探讨SOD与伤寒杆菌抗吞噬作用的关系。采用纯化的伤寒杆菌(Stwl)Fe-SOD免疫农兔制备兔抗Fe-SOD抗体。利用EALISA法检测抗体的效价。免疫电泳、双向琼脂扩散试验和抗体对酶活性抑制试验分析抗体的特性。用不同浓度的抗体预先处理伤寒杆菌,然后进行小鼠腹腔吞噬细胞的吞噬杀菌试验。试验结果抗体的ELIS攻疚价为1:1 相似文献
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用汉坦病毒汉滩株(76-118)重组核蛋白作为免疫印迹法(WesternBlot以下简称WB)的诊断抗原,用于实验感染大鼠血清抗体效价测定。同时与用汉城株(SR-11)感染的Vero-E6细胞作抗原的间接免疫荧光法(以下简称IFA)进行比较。WB法对3/4标本在大鼠接种病毒后第3天测得血清IgM阳性,而IFA法仅1/4标本出现阳性,IFA效价为1:5120的血清,WB效价为1’:40960,且在血清1:10稀释时反应带亦清晰。两种方法分别测定64份大鼠血清。甩IFA法,44份(68.8%)出现类似阳性的荧光颗粒,而用WB法测定,无特异的反应带出现。非感染Vero-E6细胞作IFA抗原,30份(46.9%)与正常细胞抗原有反应,此结果表明WB法在特异性和敏感性方面均高于IFA法。IFA法中的非特异性反应系血清与细胞成份之反应。 相似文献
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ELISA 法用于马抗狂犬病毒抗体的检测 总被引:2,自引:0,他引:2
本文建立了ELISA间接法,用以检测精制(马)抗狂犬病血清(或血浆)制造过程中的中和抗体效价,并与传统的小鼠脑内中和法比较。结果表明(1)两种检测方法对不同水平抗体的检出是一致的。它们之间有很好的线性关系(y=2.17x+21,r=0.99,p<0.01)。(2)应用ELISA间接法测定马抗狂犬病血清效价简便、快速、特异性及重复性好,可代替小鼠脑内中和法。 相似文献
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志贺氏毒素B亚单位的分离纯化及其多克隆抗体的制备 总被引:1,自引:0,他引:1
从高效表达志贺氏毒素B亚单位(StxB)的工程菌株DH5α/pSU108分离纯化了StxB,并用它制备了多克隆抗体。ELISA试验表明抗StxB抗血清的滴度达1×104。Westernblot结果显示该抗血清能与StxB发生特异反应。这为研究志贺氏毒素B亚单位的免疫保护作用和痢疾志贺氏Ⅰ型菌苗的研制打下了基础 相似文献
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用丙肝病毒C+E1区真核表达质粒pcDNA-HCV/C+E1按400ug/只剂量免疫BALB/C小鼠,14周后同一剂量再加强免疫一次。加强免疫后2周,在50%PEG1450介导下将脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞(51)融合。实验结果融合率达54.3%(313/576)。阳性率为5.4%(17”313)。克隆化后得到6株稳定分泌抗丙肝病毒C区单克隆抗体杂交瘤细胞株。这6株杂交瘤均产生IgM抗体,接种BALB/C小鼠后产生腹水的效价为164-1320(ELISA)。 相似文献
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用丙型肝炎病毒重组蛋白C33_c抗原免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术成功地建立了7株能稳定分泌抗C33_c单克隆抗体的杂交瘤细胞1H6D2、2G1A6、3A4A8、3E3E7、4G12C10、4A10C2、5F4B6.试验结果表明,7株McAbs具有良好的HCV特异性,间接ELISA法测得小鼠腹水McAb效价为1:10 ̄4-1:4×10 ̄4;竞争抑制实验和相加指数测定证实7株McAbs识别相关的抗原表位;7株McAbs中1株为IgM(5F4B6),其它6株为IgG(2a)。 相似文献
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检测肾综合征出血热抗原特异性循环免疫复合物ELISA方法的建立 总被引:3,自引:0,他引:3
检测肾综合征出血热抗原特异性循环免疫复合物ELISA方法的建立张东海,孙辉,高峰(山东省淄博第二卫生学校,淄博255015)关键词肾综合征出血热病毒,循坏免疫复合物,特异性,ELISA肾综合征出血热(HFRS)发病机理有多种学说,其中在体液免疫学说中... 相似文献
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应用免疫组织化学SP法对4例饲喂黄曲霉毒素B1的Wistar大鼠肝组织中AFB1-DNA加合物的染色及常规HE染色发现,4例肝细胞核均出现异型性,但未见肝细胞坏死、增生灶及肝细胞癌;免疫组化揭示部分肝细胞核出现棕黄色、不均质状的AFB1-DNA加合物,阳性细胞数占10~85%。结果提示免疫组织化学方法可作为一种AFB1的定位方法,AFB1在动物致癌过程中AFB1-DNA加合物可能具有启动作用 相似文献
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噬菌体抗体文库的构建及人源抗HIV-1 gp 160抗体的筛选 总被引:7,自引:0,他引:7
构建人源噬菌体抗体文库如下:HIV感染者脾细胞中提取mRNA,经反转录再以人IgG重链Fd两端及轻链“通用”引物分别扩增Fab基因片段,依次插入到噬菌粒载体pComb3中,电转化大肠杆菌XL1-Blue,经辅助噬菌体救助,重组噬菌体得以溶源裂解,Fab表达于噬菌体包膜蛋白Ⅲ的N端.此噬菌体抗体库的容量为5×105.筛选抗HIV-1同时又具有能被抗独特型抗体“IF7”所识别的独特型的阳性抗体:以重组包膜糖蛋白gp160及gp41多肽对噬菌体抗体文库进行三次淘选,使抗gp160的特异性抗体得到100倍的富集.然后通过直接ELISA和竞争性ELISA实验筛选出两株结合性较好的特异性抗gp160抗体-3B株与1D株.直接ELISA实验表明这两株克隆均能被“1F7”所识别,为抗独特型多肽的筛选奠定了基础. 相似文献
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专一识别脱落酸甲酯的单克隆抗体的制备与应用 总被引:2,自引:0,他引:2
专一识别2-顺(S)ABA甲酯的单克隆抗体来源于以ABA分子中的1-COOH为偶联位点合成的免疫原。它与游离态ABA和结合态ABA葡萄糖酯的交叉反应仅分别为1%与3.5%,而与ABA类似物,如2-顺-黄质醛、紫黄质以及ABA的2-反式异构体和(R)-对映体则无交叉反应。利用该抗体建立的高度灵敏和精确的ABAme酶联免疫测定法,其检测线性范围为0.048~1.52pmol。通过ABAmeELISA和GA1+3ELISA分析可知羊蹄叶片衰老与内源GA1+3/ABA比值的下降有关。 相似文献
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将编码丙型肝炎病毒(HCV)E2蛋白417~750位氨基酸的DNA片段 克隆到真核表达载体pcDNA 3.1(-)中的CMV IE启动子下游,构建成HCV E2重组真核表达质粒 pcE2。ELISA法检测pcE2 DNA免疫兔血清中的E2抗体变化和维持规律,结果显示免疫20d已有 抗体产生,30d后开始进入高峰,40d时达到最高值,至第90d抗体水平保持平稳,抗体滴度 达到1∶1600左右。流式细胞计数仪(FACS)检测pcE2 DNA免疫鼠CD4+、CD8+T淋巴细胞变 化情况,与注射空载体pCDNA3.1(-)的阴性鼠相比,CD4+淋巴细胞水平略有上升,CD8+ 细胞水平有较大升高,增幅达35.46%。免疫组化检测结果显示注射pcE2的小鼠组织中有明显 的阳性着色,而注射pcDNA3.1(-)的对照组小鼠免疫组化结果为阴性。以上结果表明:pcE2 在实验动物内表达出的HCV E2蛋白可以引起免疫动物的体液免疫应答和细胞免疫应答,尤其 是MHC-1限制性杀伤性CD8+T淋巴细胞水平的提高对清除 病毒是十分有利的,因此HCV E2 DNA免疫有可能成为预防和治疗HCV感染的一条新途径。 相似文献
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为进一步研究HFRS免疫损伤机制,用ELISA法同步测定了108例不同临床型、不同病日、病期HFRS患者血清中特异性IgA、IgE抗体以及HFRS病毒特异性IgA、IgE型CIC的水平及检出率。发现HFRSIgA型抗体在轻型病例高于中、重型病例;HFRSIgE型抗体及IgE型CIC在重型病例高于中、轻型病例。上述差异在病程早期(发热、休克少尿期,或是3~8病日)尤为突出。IgA型CIC则未见到上述差异。 相似文献
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高效价甘薯羽状斑驳病毒抗血清的制备 总被引:6,自引:0,他引:6
用嫁接方法将甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV)接种到I.setosa上扩繁,以0.2mol/LpH7.2PBK缓冲液、垫层差速离心、蔗糖密度梯度离心提取纯化SPFMV。纯化的SPFMVOD260/280的比值为1.25。将纯化的SPFMV免疫家兔制备抗血清,在环状沉淀和微量沉淀试验中,用提纯病毒测定抗血清的效价均为1:4096;以SPFMV-IgG为第一抗体,应用Dot-ELISA对甘薯和I.selosa叶片中的SPFMV分别作了测定。 相似文献
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清洁级实验动物四种病毒抗体玻片酶免疫检测试剂盒的研制 总被引:1,自引:0,他引:1
本文报道对清洁级实验动物应排除的四种病毒(淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒、小鼠脱脚病病毒、鼠肝炎病毒和仙台病毒)抗体玻片酶免疫(EIA)检测试剂盒的研制。四种病毒感染的细胞和对照细胞经冷丙酮固定于载玻片上制成特异性抗原和对照抗原,此四种病毒的抗血清各10份和SPF小鼠血清20份分别与四种病毒的特异性抗原和对照抗原进行EIA交叉试验,结果显示,抗原只与其相应抗血清发生特异性显色反应,与非特异性小鼠血清和SPF小鼠血清不显色。与HI或ELISA方法比较,通过对112份普通小鼠血清进行测试,结果表明,EIA对仙台病毒抗体的检出率(19.6%)显著高于(<0.005)HI(6.3%),对小鼠脱脚病病毒抗体的检出率(23.3%)与HI(21.4%)无显著性差异(P>0.05)。EIA对淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒和鼠肝炎病毒抗体的检出率分别为1.8%和71.2%,ELISA对两种病毒抗体的检出率分别为1.8%和67.6%,两种方法对两种病毒抗体的检出率无显著性差异(P>0.05)。重复性试验表明两批四种病毒抗体试剂盒对108份小鼠血清两次测定的符合率为96~100%。四种病毒的EIA抗原在-18℃保存12个月或在2-8℃保存3 相似文献
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给BALB/c小鼠腹腔注射产肠毒素B金黄色葡萄球菌(SEBS)、绿脓杆菌(PA)或葡萄球菌肠毒素B(SEB),均可引起小鼠胸腺萎缩,呈现胸腺重量减轻、胸腺细胞数减少、胸腺细胞存活率降低。实验发现,在这些细菌或毒素作用下,胸腺细胞发生了具有细胞凋亡的特征性形态学和生化学变化。进一步研究表明,小鼠胸腺细胞凋亡的机制可能与这些细菌或毒素诱导宿主产生TNF-α、IFNr和IL-6等细胞因子有关。 相似文献
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海蛇乙醇浸出物对实验性大鼠关节炎的防治作用 总被引:2,自引:0,他引:2
探讨大鼠灌胃给予海蛇乙醇浸出物(AEBFSS)对大鼠胶原性关节炎(CIA)的预防和治疗作用。方法用自制的可溶性猪尾Ⅱ型胶原注入实验大鼠左后足造成胶原诱导性大鼠关节炎模型。结果大鼠在致炎前口服AEBFSS,当剂量达含4.0mg浸出蛋白/kg,可明显推迟CIA发病时间,降低CIA发病率和减轻关节炎症状;大鼠发生关节炎后口服AEBFSS,可明显抑制CIA大鼠关节炎症的程度,其作用在用药后7天表现明显;关节组织病理检查表明,口服AEBFSS显著减轻了患鼠关节的炎症程度。初步分析表明,口服AEBFSS既降低了CIA患鼠血清抗CⅡ抗体水平,又对患鼠耳迟发型超敏反应(DTH)产生了明显的抑制作用。结论口服AEBFSS对大鼠胶原性关节炎有显著的防治作用,其机制同时涉及T和B淋巴细胞免疫。 相似文献