干细胞移植对兔后肢动脉血管成形术后血清血管内皮生长因子及转化生长因子β1水平的影响及意义

目的探讨干细胞移植防治血管成形术后再狭窄的可能机制。方法 2014年12月至2015年2月,新西兰大白兔18只随机分入对照组(A组,n=6)、球囊损伤组(B组,n=6)及球囊损伤+人脐血干细胞移植(HUCBSC)组(C组,n=6)。采用Ficoll密度梯度离心法分离制备人脐血单个核细胞悬液。A组只分离左侧后肢动脉标记后闭合伤口;C组行动脉分离后夹闭动脉两端,穿刺成功以3 mm×40 mm球囊进行局部扩张并间断牵拉球囊,每次30 s,共3次,成功制备动脉缺血损伤模型后,经导管注入脐血干细胞悬液0.5 ml于后肢动脉损伤局部,缓慢撤出球囊,恢复血供;B组经同样方法介入操作后,注入等体积的磷酸盐缓冲液(PBS缓冲液);术毕均予逐层缝合关闭伤口。分别于术前、术后7 d及术后14 d经耳中央动脉各采血3 ml,分离血清,采用ELISA法分别测定3组血管内皮生长因子(VEGF)及转化生长因子-β1(TGF-β1)水平;实验结束时留取局部血管组织进行HE染色,观察移植前后血管病理变化表现。组内比较采用配对样本t检验,组间比较采用均数方差分析及双变量回归与相关分析进行统计学处理。结果 (1)术前A组、B组及C组VEGF水平比较差异无统计学意义(F=0.000,P=0.978);术后7 d B组较A组明显增高(t=2.286,P=0.045),C组较A组及B组均明显增高(t=6.196,P=0.000;t=2.336,P=0.042);术后14 d B组与A组比较无明显差异(t=1.294,P=0.225),C组较A组及B组仍显著增高(t=6.738,P=0.000;t=2.641,P=0.038)。(2)术前A组、B组及C组TGF-β1水平比较组间差异无统计学意义(F=0.003,P=0.997);术后7 d B组较A组明显增高(t=9.052,P=0.000),C组较A组增高,但与B组比较明显减低,差异均有统计学意义(t=2.675,P=0.023;t=3.104,P=0.011);术后14 d B组与A组比较仍增高(t=3.443,P=0.006),而C组与B组比较显著降低(t=2.932,P=0.020),较A组增高,但差异无统计学意义(t=1.262,P=0.236);(3)球囊损伤及干细胞移植后不同时间点血清VEGF与TGF-β1水平变化呈负相关关系(r=-0.539,P=0.000);(4)术后14 d A组内膜连续完整,管腔正常,B组血管内膜均有不同程度增生且不连续,弹力层断裂,管腔变窄,C组内膜增生较B组明显减轻,管腔狭窄不明显。结论介入治疗后血清VEGF和TGF-β1水平均增高,HUCBSC后血清VEGF和TGF-β1水平变化呈负相关关系,两者共同参与促进受损内皮功能修复及改善血管壁重塑过程,是干细胞移植防治血管成形术后再狭窄的重要原因之一。     

冷冻胚胎移植周期中内膜形态及内膜厚度对妊娠结局的预测价值分析

目的:评价内膜厚度及内膜形态对于体外受精-胚胎移植中冷冻胚胎解冻复苏移植的临床妊娠结局的预测价值。方法:回顾性分析1521个冷冻胚胎解冻复苏移植周期,将患者按子宫内膜厚度分为4组,子宫内膜≤6 mm、6.1-8.0 mm、8.0-12 mm、12.0 mm,根据子宫内膜形态分为A型内膜、B型内膜、C型内膜。分别比较不同内膜厚度分组及不同内膜形态分组患者的年龄,移植胚胎数目、内膜准备方案构成比、移植胚胎类型(卵裂期胚胎、囊胚)构成比及各组间的临床妊娠率和活产率。采用ROC曲线分析子宫内膜厚度、形态对临床妊娠结局的预测价值。使用逐步回归分析内膜厚度、形态、年龄及移植胚胎类型与妊娠结局的相关性。结果:纳入1521个解冻复苏周期中按内膜厚度分为4组,各组周期数分别为96周期、454周期、893周期、78周期,各组间平均年龄分别为34.1±5.5岁、33.3±5.4岁、32.5±5.2岁、33.7±6.0岁(P0.05)。内膜厚度≤6 mm组临床妊娠率为31.3%,子宫内膜≤6mm、6.1-8.0 mm、8.0-12 mm、12.0 mm组临床妊娠率分别为48.5%、51.8%、47.4%(P0.05)。子宫内膜≤6 mm、6.1-8.0 mm、8.0-12 mm、12.0 mm组间活产率分别为18.8%、37.7%、44.6%、39.7%(P0.05)。A型、B型及C型内膜组周期数分别为920周期、189周期及412周期,三组间平均年龄分别为32.3±5.1、33.0±5.7、34.2±5.5岁(P0.05)。A型/B型及C型内膜组临床妊娠率分别为51.2%、46.6%及46.4%,三组间活产率分别为42.1%、36.0%及37.1%,三组间差异无统计学意义(P0.05)。子宫内膜厚度ROC曲线下面积为0.534(95%可信区间0.505-0.564),子宫内膜形态ROC曲线下面积为0.526(0.476-0.955)。逐步回归分析纳入内膜厚度、内膜形态、年龄、胚胎类型4个可变量,女方年龄(OR=0.929,P0.001),移植胚胎中囊胚比例(OR=1.595,P0.001)与临床妊娠率明显相关,内膜厚度(OR=1.054,P=0.05)及内膜形态(OR=0.864)与临床妊娠率无相关性。结论:虽然子宫内膜薄临床妊娠率下降,但是子宫内膜厚度与内膜形态不能够预测体外受精-胚胎移植解冻复苏周期临床妊娠率,患者年龄以及移植胚胎的发育潜能才是预测临床妊娠率的参考指标。     

脐血单个核细胞对缺血性脑卒中的临床干预

目的观察多份人脐血单个核细胞(MNC)静脉输注对缺血性脑卒中患者神经功能的改善作用。方法选择2008年4月至2015年5月在郑州市第二人民医院、郑州大桥医院住院和门诊收治的缺血性脑卒中患者76例(参照第四届全国脑血管病学术会议修订的脑卒中诊断标准,并经CT、MRI确诊),按照治疗方案的不同分为脐血MNC组和对照组,急性期对照组采用常规治疗,慢性期对照组采用康复治疗,脐血MNC组在常规治疗或康复治疗的基础上加用脐血MNC手背浅静脉输入,每例输入6次,每次细胞数大于或等于1×10~8个,每次间隔1~7 d。治疗前后神经功能缺损程度(NFD)、患侧肢体运动功能评价Fugl-Meyer(FMA)及日常生活评价(ADL)的比较采用配对t检验,组间比较采用独立t检验。结果脐血MNC组急性期治疗后NFD评分(11.50±2.58)明显低于急性期脐血MNC组治疗前(26.83±5.55,t=6.186,P<0.01)和对照组治疗后(24.33±5.16,t=5.442,P<0.01),脐血MNC组慢性期治疗后NFD评分(12.41±3.83)明显低于慢性期脐血MNC组治疗前(23.10±4.54,t=10.184,P=0.000)和对照组治疗后(23.09±3.94,t=11.012,P<0.01);脐血MNC组急性期治疗后Fuel-Meyer(上肢22.16±2.63,下肢32.00±5.32)明显低于急性期脐血MNC组治疗前(上肢11.66±2.94,t=-6.505,P<0.01;下肢12.66±3.01,t=-7.5386,P<0.01)和对照组治疗后(上肢15.00±3.63,t=-3.871,P=0.003;下肢16.83±4.91,t=-5.048,P<0.01),脐血MNC组慢性期治疗后Fuel-Meyer(上肢15.10±2.08,下肢15.03±1.86)明显低于慢性期脐血MNC组治疗前(上肢8.81±2.19,t=-11.748,P<0.01;下肢8.84±2.30,t=-12.619,P<0.01)和对照组治疗后(上肢9.16±2.60,t=-10.069,P<0.01;下肢9.69±2.98,t=-11.441,P<0.01);脐血MNC组急性期治疗后Barthel指数评分(65.83±7.35)明显低于急性期脐血MNC组治疗前(21.66±5.57,t=-11.916,P<0.01)和对照组治疗后(42.50±5.20,t=-6.387,P<0.01),脐血MNC组慢性期治疗后Barthel指数评分(63.40±9.19)明显低于慢性期脐血MNC组治疗前(25.20±3.81,t=-21.733,P<0.01)和对照组治疗后(29.90±5.36,t=20.361,P<0.01)。结论多份人脐血MNC手背浅静脉移植,方法简便、安全有效,有望成为治疗缺血性脑卒中的有效手段。     

西洛他唑对大鼠颈总动脉球囊损伤后内膜增生及氧化应激的影响

目的:探讨西洛他唑对大鼠颈总动脉球囊损伤后内膜增生的抑制作用和血管壁氧化应激的影响。方法:SD大鼠24只,随机分组:假手术组、损伤组及西洛他唑治疗组。采用球囊损伤大鼠左侧颈总动脉,于术后2周处死大鼠,取损伤血管标本,进行HE染色、免疫组化染色及原位DHE染色,检测内膜增生、平滑肌细胞增殖及血管壁局部ROS水平。结果:球囊损伤2周后,血管壁内膜显著增生,西洛他唑治疗后内膜增生显著抑制,两组相比P<0.05。PCNA免疫组化染色:假手术组未见PCNA阳性细胞,损伤组PCNA阳性细胞面积百分比明显高于西洛他唑组,主要分布于新生内膜和内弹力膜区域(P<0.05)。原位DHE染色:球囊损伤后局部ROS水平显著升高,较假手术组差异显著P<0.05,西洛他唑干预后局部ROS水平显著降低(P<0.05)。结论:新型抗血小板制剂西洛他唑可显著抑制大鼠颈总动脉球囊损伤后内膜增生及局部氧化应激,抑制局部氧化应激可能是西洛他唑抑制内膜增生的机制之一。     

DJ-1基因siRNA对三阴性乳腺癌细胞侵袭和迁移影响的研究

目的:探讨DJ-1基因siRNA对三阴性乳腺癌细胞体外侵袭和迁移能力的影响。方法:设计DJ-1基因的小分子干扰RNA(siRNA)片段,脂质体介导转染入三阴性乳腺癌细胞株MAD-MB-23l,转染分3个组:A组(空白对照control组)、B组(转染非特异性对照Scramble组)、C组(转染si DJ-1组)。应用Western blotting免疫印迹法检测转染前后DJ-1表达水平;运用细胞迁移和侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力的变化。结果:C组DJ-1蛋白的表达强度弱于A组和B组(t=9.831,P0.05),而A组与B组比较,DJ-1蛋白表达水平则无明显差异(t=1.629,P0.05)。细胞迁移实验中,A组细胞为(218.37±12.75);B组的细胞为(214.46±11.38);C组的细胞为(129.65±8.59),C组细胞明显少于A组和B组(t=10.927,9.984,P0.05),而A组与B组之间,差异无统计学意义(t=0.512,P0.05)。细胞侵袭实验中,A组细胞为(127.28±12.65);B组的细胞为(123.06±13.08);C组的细胞为(52.85±9.58),C组穿过人工基底膜的细胞明显少于A组和B组(t=7.927,8.643,P0.05),而A组与B组之间,差异无统计学意义(t=0.627,P0.05)。结论:DJ-1基因siRNA可抑制三阴性乳腺癌细胞侵袭和迁移。     

急性毛细支气管炎并心衰患儿血小板活化因子,血小板源生长因子的表达及临床意义

目的:探讨血小板活化因子(PAF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及血小板源生长因子(PDGF)水平变化在毛细支气管炎并急性心衰的变化,探讨它们在该病的发病中的作用方法:58例心衰组患儿分别于治疗前和临床症状消失后采用双抗体夹心ABC-ELISA法检测PAF、TNF-α及PDGF血清含量,设正常对照组40例比较。结果:心衰组PAF治疗前为370.57±23.6ng/L,明显高于对照组的56.78±19.6ng/L,组间比较差异具有非常显著性意义(t=15.95,P<0.001);治疗后恢复至49.63±14.5 ng/L,与正常对照差异不明显;治疗前后比较,差异具有非常显著性意义(t=3.70,P<0.001)TNF-α治疗前为457.4±40.5 ng/L,明显高于对照组的148.8±21.6ng/L,组间比较差异具有显著性意义(t=2.135,P<0.05);治疗后恢复至162.6±37.61ng/L,与正常对照差异不明显;治疗前后比较,差异具有非常显著性意义(t=7.25,P<0.01)。PDGF治疗前为596.23±199.43)ng/L,较对照组259.76±69.58ng/L增高,组间比较,差异具有非常显著性意义(t=25.52,P<0.01);治疗后降为272.83±116.96ng/L,较治疗前明显恢复,组间比较差异均具有显著性意义(t=7.66,P<0.01)结论:结果表明,PAF、TNF-α、PDGF作为炎症介质不仅参与心衰的发病过程,还提示细胞外基质的异常在心衰发病学中的重要地位     

Simvastatin 与rhG-CSF 促进兔颈总动脉球囊损伤后内膜修复 的实验研究

目的:观察辛伐他汀及重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)在兔颈总动脉内膜损伤后对血管壁变化及外周血中CD34+细胞含量的影响。方法:雄性新西兰大白兔48只,随机均分为:单纯损伤组,辛伐他汀组,rhG-CSF组及辛伐他汀和rhG-CSF联合组(简称联合组),建立兔左颈总动脉内膜球囊导管损伤模型,术后给予辛伐他汀(10mg/kg/d经胃灌入)及rhG-CSF(100μg/d皮下注射)干预治疗,每组分别于术前1d、术后7d、14d、21d、28d抽取静脉血2ml,经流式细胞仪检测外周血中CD34+细胞含量;4周后处死所有动物取损伤段血管,弹力纤维染色,计算内膜厚度、中膜厚度、管腔面积(S)、内膜面积(Si)、中膜面积(Sm)及Si/Sm比值评价血管再狭窄程度。结果:①术前4组之间相比外周血CD34+细胞含量无明显差异(P>0.05);术后7d时各组外周血CD34+细胞含量最高,后逐渐下降,28d较低,但仍高于术前含量;rhG-CSF组及联合组与对照组相比外周血CD34+细胞明显增多(P<0.01,P<0.01);术后7d、14天时辛伐他汀组与单纯损伤组相比外周血CD34+细胞无明显差别(P>0.05)。术后21d、28天时辛伐他汀组与单纯损伤组相比外周血CD34+细胞有显著差异(P<0.05)。②与单纯损伤组相比辛伐他汀组、rhG-CSF组及联合组Si/Sm比值明显减小(P<0.05);辛伐他汀组和rhG-CSF组两组间比较无显著差别(P>0.05);联合组分别与辛伐他汀组、rhG-CSF组比较血管内膜增生更少,具有显著性(P<0.01,P<0.01)。结论:本实验研究发现辛伐他汀可促进损伤内膜修复及预防血管再狭窄,长期服用可以增加外周血CD34+细胞;rhG-CSF可明显增加外周血CD34+细胞及预防血管在狭窄;辛伐他汀与rhG-CSF联合用药可明显增加外周血CD34+细胞、加速内皮修复与预防再狭窄,较单一用药具有更好的疗效。     

骨髓间充质干细胞捕获支架对犬冠状动脉再狭窄影响的研究

目的:观察骨髓间充质(MSCs)干细胞捕获支架能否预防和减少犬冠状动脉支架植入术后再狭窄.方法:①用乙基纤维素作为包被底物对支架进行包被,然后再包被骨髓间充质干细胞抗体.②以球囊损伤法建立犬冠状动脉狭窄模型,应用标准球囊导管技术,将包被有抗体的支架植入犬(n=20)冠状动脉前将支损伤段远端,再以相同方法在损伤段近端植入裸支架作为对照组(n=20).4w后处死动物,取出支架段血管行血管内超声(IVUS)及血管形态学检测分析血管管腔面积和内膜增生面积.结果:术后4周,骨髓间充质干细胞捕获支架组较裸支架组的最小管腔直径和新生内膜面积较明显减少(P<0.05),而最小管腔面积则明显增加(P<0.05).结论:骨髓间充质干细胞捕获支架能快速修复损伤的血管内膜,降低再狭窄的发生.     

脐带间充质干细胞移植对糖尿病肾病的临床观察

目的探讨脐带间充质干细胞(UCMSC)移植治疗糖尿病肾病的临床效果及安全性。方法选择福州总医院干细胞治疗科收治的15例经胰背动脉、双肾动脉介入及外周静脉移植UCMSC治疗糖尿病肾病的患者为实验组,肾内科收治的15例单纯采用口服缬沙坦,皮下注射胰岛素治疗糖尿病肾病的患者为对照组。通过监测两组患者治疗前及治疗后3个月的血压、血糖、C肽值以及肾功能指标的变化情况来分析比较两组患者的治疗效果。采用配对样本t检验分别对实验组治疗前、后及对照组治疗前、后各项指标的差异进行统计分析比较,采用两独立样本t检验对实验组、对照组治疗前、后各项指标的差值进行统计分析比较。结果两组患者各项监测指标治疗后均较治疗前有所下降,差异均有统计学意义(P0.05)。对两组患者治疗前及治疗后3个月各项指标差值进行比较,实验组、对照组患者舒张压、尿素氮、血清肌酐、24 h尿白蛋白定量治疗前后差值分别为[(14.6±3.68)mm Hg,(12.1±2.49)mm Hg,t=2.208,P=0.037],[(1.97±0.77)mmol/L,(1.04±0.32)mmol/L,t=4.261,P=0.000],[(57.6±14.08)μmol/L,(39.5±14.61)μmol/L,t=3.448,P=0.002],[(1.48±0.45)g/d,(0.74±0.35)g/d,t=5.017,P=0.000],差异有统计学意义(P0.05)。结论经胰背动脉、双肾动脉介入及外周静脉移植UCMSC治疗糖尿病肾病安全有效,在改善舒张压、肾功能方面的临床疗效优于单纯控制血压、血糖等常规方法治疗糖尿病肾病。     

17-AAG 对颈动脉球囊损伤大鼠血管平滑肌细胞增殖影响的实验研究

目的：研究17- 丙烯胺-17 去甲氧格尔德霉素（17-Allylamino-17-emethoxy-geldanamycin, 17-AAG）对球囊损伤后大鼠颈动脉 血管平滑肌细胞增殖的影响。方法：选取雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠30 只,随机数字法分为球囊损伤（Balloon injury,BI）组10 只、球囊损伤+17-AAG 低剂量治疗（Balloon injury+Low dose AGG,BIL）组10 只、球囊损伤+17-AAG 高剂量治疗（Balloon injury+High dose AGG,BIH）组10只。建立大鼠颈动脉球囊损伤模型,病理学评估血管内膜增生情况。各组于球囊损伤28 天后取 材,将损伤区域的血管段取材固定,苏木精- 伊红染色（HE）观察血管并测量内膜面积（Intimal Area, IA）、中膜面积（Membrane Area,MA）,计算内膜/中膜面积比（IA/MA）,以评估内膜增生情况;同时,利用免疫荧光染色（Immunofluorescence staining, IFS）观 察增殖细胞核抗原（Proliferating cell nuclear antigen, PCNA）表达的情况,以评价血管平滑肌细胞的增殖情况。结果：大鼠颈动脉球 囊损伤模型成功建立。HE 染色后计算血管I/M比值,结果表明BIL组与BI组血管I/M 比值无统计学差异（P>0.05）,BIH 与BI组 血管I/M比值有统计学差异（P<0.05）。IFS结果表明,BIL组血管壁PCNA 表达较BI组略有降低,但无统计学意义（P>0.05）。BIH 组血管壁PCNA表达较BI组明显减低,有显著统计学差异（P<0.05）。结论：一定浓度的17-AAG可明显的抑制球囊损伤后颈动脉 血管平滑肌细胞增殖;17-AAG可以成为球囊损伤后大鼠血管平滑肌细胞增殖的抑制剂。     

Egr-1的诱骗性寡脱氧核苷酸抑制大鼠颈总动脉损伤后MMP-2的表达

目的观察局部转染早期生长反应因子-1(early growth response factor-1,Egr-1)的特异诱骗寡脱氧核苷酸(decoy oligodeoxynucleotides,decoy ODNs)对球囊损伤颈总动脉后基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白表达的影响及内膜增生的情况,初步探讨Egr-1,decoy ODNs抑制球囊损伤后内膜增生的机制。方法 96只健康雄性Wistar大鼠,随机分为4组,分别为假手术组、对照组、杂码组和诱骗组,每组24只。除假手术组外均应用2F球囊导管行颈总动脉球囊损伤术,术中采用转染试剂FuGENE6介导的Egr-1decoy ODNs转染至损伤后大鼠血管中,与假手术组、对照组、杂码组相比较。术后3、7、14、21d每组处死6只动物。应用HE染色和免疫组织化学方法观察大鼠颈总动脉球囊损伤后内膜增生情况和MMP-2蛋白的表达及转染Egr-1decoy ODNs后对它们的影响。结果 (1)、内膜损伤后3d内膜增厚不明显,7d内膜开始增厚,14、21d时内膜明显增厚。(2)、在假手术组近腔面中膜可见MMP-2有少量散在阳性表达;在对照组及杂码组动脉损伤后3d,在近腔面中膜,有少量阳性表达,与假手术组相比,阳性表达指数上升。7d时在新生内膜和靠近新生内膜处中膜表达明显,14d后表达逐渐下降。(3)转染decoy ODNs治疗后,在各个时间点内膜增厚程度减轻,MMP-2蛋白表达减少,与对照组比较差异有显著性(P<0.01)。结论血管球囊损伤后,内膜7d开始增生,14d、21d增生更明显,而MMP-2在7d时表达明显,之后逐渐下降,Egr-1decoy ODNs能抑制MMP-2的表达,从而减轻血管损伤后内膜的增生。     

C 型钠尿肽对糖尿病兔下肢动脉硬化的影响及机制研究

目的:探讨C型钠尿肽(CNP)对糖尿病兔下肢动脉硬化的影响作用及其机制。方法:选取成功建模的糖尿病兔30只,随机分为A组(球囊损伤组)、B组(对照组)和CNP干预组各10只,分别抽取三组糖尿病兔术前1 d、术后1 d、7 d、14 d、28 d的血浆测定CNP及C反应蛋白水平(CRP)。并于术后第28 d处死三组糖尿病兔观察股动脉腔的狭窄程度及股动脉组织中环磷鸟苷(cGMP)、环磷鸟苷依赖蛋白(PKGⅠa)含量。结果:三组糖尿病兔术后28 d的cGMP、PKGⅠa差异显著(P0.05);A组的cGMP、PKGⅠa显著低于B组和CNP干预组(P0.05);术后第1 d、7 d、14 d三组CRP含量差异显著,A组显著高于B组和CNP干预组(P0.05);术后第1 d、7 d、14 d、28 d A组CNP含量显著高于B组(P0.05);三组间管腔面积两两比较差异显著(P0.05);A组中膜面积、内膜面积显著高于B组和CNP干预组(P0.05)。结论:CNP对糖尿病兔股动脉狭窄有一定的抑制作用,可能与其抑制CRP、提高cGMP及PKGⅠa水平有一定关系。     

小梁切除术中应用丝裂霉素C 对角膜内皮细胞的影响

目的:观察小梁切除术中应用丝裂霉素C(MMC)对角膜内皮细胞的影响。方法:收集2010年9月2011年5月在我院行小梁切除术的青光眼患者60例(78眼),随机分为术中应用丝裂霉素C的36例(46眼)患者为A组,术中不用丝裂霉素C的24例(32眼)为B组,分别观察术前、术后1个月和术后3个月两组眼压(IOP)、角膜内皮细胞的密度(CD)、平均细胞面积(AVG)及细胞面积变异系数(CV),分析其数量的改变及两组间的差异。结果:A组术前眼压为(35.4±13.7)mmHg,B组术前眼压为(32.5±13.5)mmHg差异无统计学意义(P>0.05),A组术后1个月及术后3个月眼压分别为(15.7±3.7)mmHg、(17.0±3.2)mmHg,均低于B组的(19.4±3.7)mmHg、(20.2±2.1)mmHg,差异有统计学意义(P<0.05)。A组术前、术后1个月及术后3个月角膜内皮细胞密度分别为(2475±484)个/mm2、(2199±373)个/mm2、(2164±332)个/mm2;平均细胞面积分别为(431.4±67.6)μm2、(480.6±66.8)μm2、(463.8±46.2)μm2;细胞面积变异系数分别为(31.1±7.4)%、(34.4±6.3)%、(31.2±7.5)%;术后1个月及术后3个月各参数与术前比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。B组术前、术后1个月及术后3个月角膜内皮细胞密度分别为(2342±94)个/mm2、(2185±215)个/mm2、(2074±218)个/mm2;平均细胞面积分别为(453.9±94.8)μm2、(516.3±100.8)μm2、(499.81±106.4)μm2;细胞面积变异系数分别为(30.2±3.0)%、(32.7±2.9)%、(31.4±4.3)%;除术后3个月角膜内皮细胞与术前比较有意义(P<0.05)外,余参数术后1个月及术后3个月与术前比较差异均无统计学意义(P>0.05)。术后1个月A组的角膜内皮细胞丢失率为10.4%高于B组的6.1%,差异有统计学意义(P<0.05);术后3个月A组的角膜内皮细胞丢失率为11.1%高于B组的10.0%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:小梁切除术中用丝裂霉素C的降压效果比不用丝裂霉素C的效果好,但短期内前者角膜内皮细胞的丢失率高于后者。     

卡立泊来德对AGEs所致新内膜形成的抑制作用及相关机制

为了观察Na⁺/H⁺ 交换蛋白1(NHE1)选择性抑制剂卡立泊来德(cariporide)对糖基化终末产物( advanced glycation end products,AGEs)所致大鼠颈动脉球囊损伤后新内膜形成的作用,以球囊损伤大鼠颈总动脉,取标本HE染色后进行形态学观察并计算内膜、中膜面积及内膜/中膜面积比．为探讨相关机制,原代培养大鼠主动脉平滑肌细胞( vascular smooth muscle cell,VSMC),[³H] thymidine 检测 VSMC增殖; RT-PCR及实时RT-PCR检测VSMC基质金属蛋白酶2( matrix metalloproteinases-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶9(matrixmetalloproteinases-9,MMP-9)及环氧酶2(cyclooxygenase-2,COX-2) mRNA水平;Western blot检测核因子κB(NF-κB)的表达及抑制蛋白κBα(I-κBα)的降解．大鼠颈动脉球囊损伤后,cariporide(0.1,10 mg/kg)能显著抑制AGEs所致新内膜增生(P < 0.01)．细胞实验结果显示,cariporide 可以浓度依赖性地抑制AGEs 诱导VSMC中COX-2、MMP-2及MMP-9 mRNA 表达,同时显著抑制I-κBα降解及NF-κB表达．结果表明,cariporide 能显著抑制血管损伤后AGEs所致新内膜的形成,其机制与抑制NHE1活性从而抑制NF-κB活化,下调MMP-2、MMP-9及COX-2 mRNA有关．提示NHE1可能是AGEs致血管损伤信号通路中的重要组成部分．     

慢性多重应激大鼠心律失常及维拉帕米的抑制作用

目的:研究慢性多重应激大鼠心律失常和心房肌细胞内钙离子浓度及血清儿荼酚胺浓度变化,分析钙离子阻滞剂维拉帕米对应激性心律失常的抑制作用.方法:健康雄性SD大鼠随机分为A组(应激组)、B组(应激+维拉帕米组)和C组(对照组).选用噪声加足底电击、强迫游泳和束缚加夜间光照的复合刺激为应激源,建立大鼠慢性多重应激模型.B组大鼠饲以钙离子阻滞剂维拉帕米.记录心电图,分析各组心律失常的类型、心律失常事件次数.测定实验前后血清儿茶酚胺含量,实验结束后,测定心房肌细胞内钙离子浓度.结果:实验结束后A、B两组大鼠全部记录到心律失常,A组大鼠出现较多类型的心律失常(窦性心律不齐、房性期前收缩、室性期前收缩、房性期前收缩和未下传、室上性心动过速、阵发性室速),B组记录到室性期前收缩(ventricular pre-mature beats,VPB)和房性期前收缩(atrial premature beats,APB o B组大鼠出现心律失常时间较晚(A组:17±4d;B组:25±3 d,p<0.01)、心律失常发生频率低于A组(VPB:A=2.0±0.4;B=0.8±0.06,p<0.01 events/min,APB:A=1.8±0.3;B=0.3±0.05events/min,p<0.01).实验结束后,A、B两组血清去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)和肾上腺素(epinephrine,Epi)水平增高,并高于对照组,B组低于A组(NE:A=2,617±344 pg/ml;B=751±146 pg/ml,P<0.01;Epi:A=1,635±224 pg/ml;B=538±106pg/ml,P<0.01).B组动物心房肌细胞内钙离子浓度较A组低(A=215± 26nmol/L;B=101±15mnol/L,P<0.01).结论:钙离子阻滞剂维拉帕米可阻止心房肌细胞钙离子内流和减少儿荼酚胺释放水平进而延缓慢性多重应激诱导的心律失常和降低其发生率.     

早期吸入不同浓度布地奈德对哮喘大鼠气道炎症和重构的干预

目的:研究早期吸入不同浓度布地奈德对哮喘大鼠气道炎症和气道重构的干预情况。方法:32只Wistar大鼠随机分为4组:A对照组8只,B卵蛋白(OVA)致哮喘组8只,C卵蛋白致哮喘后吸入低浓度布地奈德治疗组8只,D卵蛋白致哮喘后吸入高浓度布地奈德治疗组8只。分别测定各组大鼠血中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及肺泡灌洗液(BALF)中内皮素-1(ET-1)的水平,计数BALF中细胞总数及分类。各组大鼠行肺组织切片HE染色,再行胶原染色、免疫组化NGF、TGF-β1染色,借助计算机图象分析软件测量单位气道面积炎性细胞数目,基底膜周径(Pbm)、平滑肌面积(WAm)、气道内壁面积(WAi)、胶原面积(Wcol),NGF及TGF-β1阳性信号积分吸光度。结果:B组BALF中细胞总数、嗜酸细胞分类及TNF-α、ET-1水平与A组比较均明显增加,差异有统计学意义(P<0.01),C组及D组较B组均明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。B组NGF及TGF-β1的表达、气道壁炎性细胞计数、气道内壁面积、平滑肌面积、胶原面积与A组比较均明显增加,差异有统计学意义(P<0.01),C组及D组与B组比较均明显降低,差异有统计学意义(P<0.01),C组及D组与A组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),C组与D组差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:早期吸入不同浓度的布地奈德均可明显抑制气道炎症和气道重构,高浓度较低浓度对气道炎症和气道重构的影响更明显。     

百草枯中毒大鼠TNF-α、IL-10 的表达及大黄保护作用的研究

目的:观察大黄对急性百草枯中毒大鼠TNF-α、IL-10的干预作用,探讨其可能的作用机制。方法:90只SD大鼠随机分为生理盐水对照组(A组)、PQ(60 mg/kg)灌胃染毒组(B组)、生大黄(300mg/kg.d)干预组(C组),每组30只。中毒后6h、24h、72h分批处死存活的大鼠,并且检测大鼠血浆TNF-α、IL-10水平。结果:B组、C组TNF-α、IL-10水平在染毒后6h开始升高,72h达到高峰,与A组相比,差异有统计学意义(P<0.05、P<0.01),在相同时间点C组TNF-α和IL-10的表达低于B组,差异均有统计学意义(P<0.01)。B组、C组血浆TNF-α、IL-10水平与中毒时间呈显著正性相关关系(r=0.849,P<0.01;r=0.790,P<0.01;r=0.0.943,P<0.01;r=0.892,P<0.01)。结论:大黄能够通过降低百草枯中毒大鼠体内的TNF-α、IL-10水平,减轻百草枯对大鼠的损伤作用。     

不同途径移植脐带血干细胞对兔2型糖尿病的疗效观察

目的观察不同途径移植脐带血干细胞对兔2型糖尿病的治疗效果。方法 30只新西兰白兔,雌雄各半,制备2型糖尿病模型,随机分成5组,其中6只在兔的胰腺内注射脐带血干细胞5×10~5个(A组),6只向胰腺背动脉内注入脐带血干细胞5×10~5个(B组),6只经耳缘静脉输注脐带血干细胞5×10~5个(C组),6只在腹腔内多处注入脐带血干细胞5×10~5个(D组),其余6只向腹腔内注射相同体积的PBS液作为对照组(E组)。HE染色观察胰腺组织形态学变化。以上5组白兔均培养观察4周,每天监测白兔血糖,每周测血浆胰岛素水平,采用单因素方差分析和t检验对血糖值及胰岛素水平进行统计分析。结果 A组及B组在移植后血糖逐渐下降,胰岛素水平逐渐上升,第4周末,血糖降至(6.80±0.64)mmol/L和(6.78±0.57)mmol/L,胰岛素水平逐渐回到正常分别为(25.60±1.47)m U/L和(25.55±1.52)m U/L,与E组(21.77±2.70)mmol/L和(3.80±0.41)m U/L比较,差异均有统计学意义(P0.01)。而C组血糖较前下降,至第4周末血糖及胰岛素均未回正常水平,分别为(9.97±1.19)mmol/L和(15.82±1.05)m U/L,D组仍维持高血糖状态,血糖水平为(21.00±1.99)mmol/L,胰岛素水平无明显变化(3.77±0.31)m U/L,与E组(21.77±2.70)mmol/L和(3.80±0.41)m U/L比较,差异无统计学意义(P0.05)。移植后4周A、B两组胰腺组织形态得到明显改善,C组部分改善,D组无明显改善。结论将脐带血干细胞在胰腺、胰腺背动脉注射及耳缘静脉输注进行移植,可以明显降低血糖,增加胰岛素分泌量,其中,胰腺和胰腺背动脉注射效果优于耳缘静脉输注,腹腔内移植无明显效果。     

AT2R载体可调控表达对大鼠颈动脉损伤后骨桥蛋白及新生内膜增生的影响

目的:血管紧张素Ⅱ 2型受体(AT2R)基因转染的骨髓间充质干细胞(MSC)在四环素可调控系统下作为载体,利用计算机图像分析系统研究新生内膜增生的情况,并探讨AT2R在体可调控表达对大鼠颈动脉损伤后骨桥蛋白(OPN)表达影响。方法:利用球囊损伤60只SD大鼠颈动脉,并随机将SD大鼠分为5组,分别为正常组(未行球囊扩张术)、对照组(球囊扩张术后注入PBS)、MSC组(球囊扩张术后注入常规MSC)、MSC转染组(球囊扩张术注入转染AT2R的MSC)、强力霉素(Dox)组(球囊扩张术后注入转染AT2R的MSC,术后当天至处死前三天通过尾静脉注射Dox 100μg/kg/d)。术后14及28天分别处死大鼠取材,光镜下观察血管内膜增生情况,Image pro plus 6.0计算机图像分析系统测量新生内膜面积(I/M),逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测AT2R及OPN在大鼠血管标本中的表达变化。结果:大鼠颈动脉AT2R在Dox组的表达显著增高,新的增生内膜面积较其它各损伤组显著降低(P≤0.01),并且OPN的表达显著低于其他各手术组。结论:AT2R基因在体可调控表达受到Dox的有效控制,AT2R基因可能抑制血管损伤后OPN的表达及新生内膜的过度增生。     

初发高血压患者血压昼夜节律变化与尿微量白蛋白的关系

目的:探讨初发高血压病患者血压昼夜节律变化与尿微量白蛋白的关系.方法:将186例初发原发性高血压病患者按照24h动态血压检测结果分为A、B两组:A组为杓形组,共71例;B组为非杓形组,共115例,分别检测血清超敏C反应蛋白和尿微量白蛋白水平.结果:B组的的超敏C反应蛋白水平明显高于A组[(6.97±13.17)mg/L与(2.34±1.49)mg/L(P＜0.01)],B组的尿微量白蛋白水平明显高于A组[(21.08±3.97)μg/mL与(11.14±3.32)μg/mL,P＜0.01](P＜0.01).结论:初发高血压病患者血压昼夜节律变化与炎症反应、尿微量白蛋白关系密切.