电融合构建嗜杀啤酒酵母及其发酵性能的研究

以ＭＫ２－３：Ｋ＾＋Ｒ＾＋ｌｅｕ＾－ｐ＾＋（ｎ）为供体菌,ＡＳ２４２０－１;Ｋ＾－Ｐ＾－ｌｅｕ＾＋ｐ＾０（２ｎ）为受体菌,通过电融合技术构建一批嗜杀啤酒酵母。其中４株融合子具有较高的嗜杀活性,对这４株融合子的遗传性状、ＤＮＡ含主细胞大小、形态、嗜杀质粒ｄｓ－ＲＮＡ提取及电泳等研究表明,这４株菌具有双亲的互补性。对其中ＭＡＲ１的进一步实验表明,ＭＡＲ１的某些发酵性能接近甚至优于亲株ＡＳ２４２０－１,     

利用细胞质导入法选育嗜杀啤酒酵母

利用细胞质导入(Cytoduction)法中的核融合缺陷细胞融合技术,在对酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)D518菌株不做任何遗传标记,将嗜杀酵母5045菌株的嗜杀质粒转移到受体菌D518中,获得了具有两亲株优良性状的融合子KD102菌株。对融合子分析表明:融合子遗传性状稳定,不仅含有供体菌5045的嗜杀质粒,而且受体菌D518的核基因被原封不动地保留下来,为异质体细胞(Heteroplasmon)。将融合子KD102菌株用于小型、中型及生产性酿酒试验,结果表明,具有与亲株D518同样的酿造特性。在发酵过程中,能抑制野生酵母污染,净化发酵体系。对于保证啤酒纯种酿造及提高成品酒的生物稳定性具有明显效果。     

利用细胞质导人法选育嗜杀啤酒酵母

利用细胞质导入(Cytoduction)法中的核融合缺陷细胞融合技术,在对酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)D518菌株不做任何遗传标记,将嗜杀酵母5045菌株的嗜杀质粒转移到受体菌D518中,获得了具有两亲株优良性状的融合子KDl02菌株。对融合于分析表明：融合子遗传性状稳定,不仅含有供体菌5045的嗜杀质粒,而且受体菌D518的核基因被原封不动地保留下来,为异质体细胞(Heteroplasmon)。将融合子KDl02菌株用于小型、中型及生产性酿酒试验。结果表明．具有与亲株D518同样的酿造特性。在发酵过程中．能抑制野生酵母污染,净化发酵体系。对于保证啤酒纯种酿造及提高成品酒的生物稳定性具有明显效果。     

嗜杀酵母的生物学功能及其应用

嗜杀酵母能够分泌毒素蛋白,杀死敏感酵母。嗜杀酵母对自身分泌的嗜杀毒素具有免疫力。嗜杀酵母的嗜杀特性与两种双链线状RNA(dsRNA)有关,即编码产生毒素蛋白的M-dsRNA和编码自身和M-dsRNA外壳蛋白的L-dsRNA。嗜杀毒素破坏细胞跨膜化学质子梯度,造成ATP和钾离子泄漏,导致细胞死亡。应用嗜杀酵母可避免野生型酵母污染,净化发酵体系,改善发酵产物品质;嗜杀毒素也可作为抵制病原酵母和类酵母微生物的抗真菌剂。     

啤酒酵母对杀假丝菌素抗性的遗传分析

杀假丝菌素(Candicidin)在0．8μ／ml的YEPG平板上能完全抑制呻酒酵母(Saechar-mycescerevisiae) H802-1B (a,lys2)及H802-5D(a,ade,ural)的生长。将H802-1B涂布在含有5—70μg／ml的抗生素平板上分离得到抗性突变体。第一次突变体的最高抗性水平是50μg／ml,从5—50μg／ml 抗生素平板上共获得39株自发突变株,第二次抗性突变株是将第一次突变体涂布在更高浓度(70—90μg／ml)的抗生素平板上分离到的。部分抗性突变株(70μg／ml和90μg／ml)与亲株H802-5D交配,测其分离子的抗性,所有杂合二倍体表现：抗性：敏感性为2：2分离现象。H1121-1A(a,lys2,CADR9)XH113-8A(a, ural,CADR30)的杂种抗性分离行为：PD(17个子囊),NPD(2个子囊)T(4个子囊)口遗传分析证明,实验用的抗性突变体有两个显性抗性基因CADHr30和CADR90．     

嗜杀酵母毒素蛋白活性的平板检测

本文介绍一种在平板上直接检测嗜杀酵母产生的毒素蛋白活性的方法,此方法操作简便,可分析不同条件下毒素蛋白对敏感酵母细胞的嗜杀作用.     

嗜杀酵母KillerYeast的杀伤性质和酵母的病毒假说

嗜杀酵母Killer Yeasf,杀伤酵母或逆戟酵母,是指能释放毒素杀死其同类的酵母。具有杀伤性质的真菌有酵母属(Sac-charomyces),黑粉菌属(Usfflago),吲酵母属(Torulopsfs),德巴里酵母属(Debaromyces),汉逊酵母属(Han-     

以酵母嗜杀系统为基础的抗病毒药物筛选模型的建立

根据嗜杀酵母T158c/S14a中L-A病毒-1移码效率改变影响M1病毒的存活,导致K1毒素减少,在低pH的美蓝平板上用杯碟法通过抑菌圈的大小检测酵母K1毒素的嗜杀活性,建立了一个以酵母嗜杀系统为基础的抗病毒药物筛选模型。研究了杯碟法检测酵母毒素嗜杀活性的各种条件。对不同pH和温度下酵母的嗜杀活性进行了研究,确定了模型用于筛选的最适pH范围为4.3~4.7,最适温度范围为20~22℃。运用该模型研究了几种中药对嗜杀活性的抑制作用,发现了金银花和升麻具有一定的抗病毒作用。该模型为抗病毒药物的高通量初筛奠定了基础。     

啤酒酵母工业菌株单倍体的诱导、分离和鉴定

【目的】探索适宜的方法进行啤酒酵母工业菌株单倍体的诱导、分离和鉴定,为啤酒酵母改良和遗传学研究提供便利。【方法】首先,选择产孢效果最好的培养基进行产孢诱导,诱导产生的孢子在YPD培养基上形成菌落后,用流式细胞技术检测其DNA含量,进而判断其倍性;单倍体菌株的交配型通过MAT-PCR和杂交实验确定。【结果】啤酒酵母工业菌G-03通过产孢诱导和孢子分离、富集后得到26株菌,最终通过流式细胞技术确定了其中4株为单倍体,MATa和MATα型各2株。通过扫描电镜法观察4株单倍体菌株及出发菌G-03的细胞形态,发现单倍体菌株的形态和出发菌有较大区别,单倍体菌株长期培养没有假丝生长的现象发生。【结论】啤酒酵母工业菌单倍体育种较为困难,严格的单倍体筛选、鉴定尤其具有挑战性。     

酿酒酵母两种不同嗜杀菌的比较研究

以酿酒酵母两种不同类型的嗜杀菌株ＳＫ４（Ｋ１型）和ＥＲＲ１（Ｋ２型）为材料,分析了不同嗜杀酵母的嗜杀特性,两株嗜杀酵母具有相互杀死作用,其嗜杀活性与菌体生长有关。ＳＫ４和ＥＲＲ１的嗜杀质粒的比较表明：Ｍ１－ｄｓＲＮＡ质粒和Ｍ２－ｄｓＲＮＡ质粒分子量分别为１．７ｋｂ和１．５ｋｂ,两株菌的Ｌ－ｄｓＲＮＡ质粒均为４．０ｋｂ。用高温和紫外线处理嗜杀酵母,嗜杀活性随之消失,消除菌中的Ｍ－ｄｓＲＮＡ质粒也相应     

具有杀镰孢菌素合成功能基因菌株的筛选与鉴定

在NCBI数据库中搜索已知多黏类芽孢杆菌基因组中分别编码Fusaricidin合成酶3个NRPS功能区段的核苷酸保守序列,利用Primer5.0软件设计3对引物,对供试的95个细菌菌株进行PCR检测,筛选到1株阳性菌株T99,其3对引物扩增产物的测序结果表明,所得3个功能片段核苷酸序列与多黏类芽孢杆菌SC2和M1的Fusaricidin合成酶基因序列的一致性分别为99％、97％和99％,说明菌株T99基因组中具有Fusaricidin合成相关功能基因.结合形态特征及培养性状、生理生化特性和16SrDNA序列同源性分析的结果,将菌株T99鉴定为多黏类芽孢杆菌.     

一株嗜盐菌新种的分离与鉴定

从舟山册子岛船舶压载水泥样中分离到一株细菌S3-22,其与已知细菌的16S rDNA序列相似性低于97%,G+C mol%为54.9 mol%,主要脂肪酸iso-C17:1ω9c(24.99%),细胞醌型为甲基萘醌MK-5。革兰氏染色阴性,最适生长条件为30～37℃、pH7、3%NaCl。嗜盐,氧化酶、接触酶、淀粉酶、酯酶呈阳性,可还原硝酸盐。依据其16S rDNA序列相似性、系统发育学分析及细胞与分子水平的鉴定表明,该菌是Kordiimonas属的一个新种,菌株S3-22的16S rDNA序列登陆号为FJ847942。     

酿酒酵母两种不同嗜杀菌株的比较研究

以酿酒酵母两种不同类型的嗜杀菌株SK4（K1型）和ERRI（K2型）为材料,分析了不同嗜杀酵母的嗜杀特性,两株嗜杀酵母具有相互杀死作用,其嗜杀活性与菌体生长有关。SK4和ERRI的嗜杀质粒的比较表明：M1－dsRNA质粒和M2-dsRNA质粒分子量分别为1．7kb和1．5kb,两株菌的L－dsRNA质粒均为4．0kb。用高温和紫外线处理嗜杀酵母,嗜杀活性随之消失,消除菌中的M－dsRNA质粒也相应消失,嗜杀活性的消除率随菌株和消除剂的不同而变化。实验证明两株菌产生的毒素蛋白的最适嗜杀作用条件不同,最适pH和温度分别为4．8、16℃和4．0、22℃,但两种毒素蛋白均对在对数生长期的敏感细胞作用最显著。     

杀线虫海洋放线菌的筛选及菌株HA07011的鉴定

从海南、湛江等海洋环境样品中分离到256株放线菌,运用松材线虫筛选模型进行杀线虫活性菌株的筛选,得到23株对线虫有较高校正击倒率的放线菌。其中菌株HA07011的发酵滤液稀释10倍后对线虫校正击倒率仍达到68.9%,且具有较好的遗传稳定性。根据形态观察、生理生化特征和16S rDNA序列的对比分析,将HA07011归为链霉菌属。     

嗜盐噬菌弧菌BALOs10菌株的分离、鉴定及其裂解谱

【目的】从海水中分离得到蛭弧菌类群(Bdellovibrio-and-likeorganisms,BALOs)新型菌株,丰富BALOs的种质资源。【方法】从中国深圳大亚湾取回海水样品后,使用本实验室分离得到的Vibrio alginolyticus LF TCBS 15作为宿主,通过海水双层平板法分离得到BALOs菌株,通过光学显微镜及透射电镜观察菌体形态,对16S rDNA序列进行系统发育分析,完成分子鉴定。采用双层平板滤纸片法分析NaCl浓度、pH及温度对菌株BALOs10生长的影响并测定菌株BALOs10对16株细菌的裂解效果。【结果】成功分离出一株以Vibrio alginolyticus LF TCBS 15为宿主的BALOs菌株BALOs10。噬菌斑呈圆形、透明且边缘光滑整齐,菌体为弧状,极生单鞭毛,菌体大小(0.21–0.44)μm×(1.25–1.87)μm。菌株最佳生长温度、NaCl浓度和pH范围分别为35–37°C、2%–3%(W/V)和7–8。菌株BALOs10可以裂解9株不同种的受试菌,占总试验菌株数(16株)的56.3%,主要是海杆菌属和弧菌属;菌株BALOs10的16S rDNA与最相近的典型菌株Halobacteriovorax marinus SJ的相似性只有92.14%,可能是一个全新的物种,将其命名为Halobacteriovorax sp. BALOs10。【结论】本文研究发现了Halobacteriovorax属(嗜盐噬菌弧菌属)的一个新型菌株,丰富了BALOs种质资源,为后续的应用及理论研究奠定物质基础。     

甜菜增产菌P10菌株的鉴定

在新疆甜菜块根皮层内分离并筛选到对甜菜具有增产增糖作用的优化菌株Ｐ＿（１０）。通过形态培养征和生理生化特性研究,将该菌株鉴定为短小芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｕｓｐｕｍｉｌｕｓ）。