尖吻蝮蛇毒抗凝血因子Ⅱ与活化凝血因子Ⅹ的结合性质

皖南尖吻蝮蛇毒抗凝血因子Ⅱ（ACFⅡ）与活化凝血因子Ⅹ（FⅩa）在钙离子作用下形成了1∶1的复合物,从而延长凝血时间.这个复合反应是依赖于钙离子的,ACFⅡ在没有钙离子存在条件下不能与FⅩa形成复合物.ACFⅡ是凝血因子Ⅸ或凝血因子Ⅹ结合蛋白家族中一个新发现的成员,其相对分子质量为29 468.1.ACFⅡ分子中含有251个氨基酸残基,其氨基酸组成与这一家族中其他成员十分相似.ACFⅡ在抗凝血反应中存在一临界浓度（12 nmol/L）,只有在高于其临界浓度时,才表现出显著的抗凝血活性.     

垂体腺苷酸环化酶激活肽基因合成表达和产物纯化与鉴定

为利用基因工程技术获得垂体腺苷酸环化酶激活肽 (pituitaryadenylatecyclaseactivatingpolypeptide ,PACAP) ,根据大肠杆菌的密码偏好性 ,设计并人工合成编码 38个氨基酸的PACAP基因 .克隆到表达载体pET 35b(+) ,构建重组质粒pET PACAP ,转化大肠杆菌BL2 1 (DE3)pLysS+ .实现纤维素结合域 (cellulosebindingdomain ,CBD)与PACAP融合蛋白的表达 ,并在两者之间引入 (凝血 )因子Ⅹa识别位点 (Ile Glu Gly Arg↓ ) .融合蛋白CBD PACAP经纤维素亲和层析纯化后 ,因子Ⅹa酶切释放PACAP .在因子Ⅹa识别位点前引入 7个氨基酸的柔性短肽 (Gly Thr Gly Gly Gly Ser Gly)明显提高了融合蛋白对因子Ⅹa的敏感性 .HPLC进一步纯化得到纯度大于 95 %PACAP多肽 .所得的PACAP多肽的Western印迹鉴定为阳性 ;激光飞行质谱测定分子量结果与理论值相符 .生物活性分析表明 ,所制备的PACAP具有促进胰腺癌细胞株SW 1 990胞内cAMP合成的活性     

凝血靶向通用效应因子tTF/SA融合蛋白的表达及活性鉴定

制备凝血靶向通用效应因子tTF/SA融合蛋白,并鉴定其生物学活性。利用PCR技术构建tTF与链霉亲和素SA的融合基因,克隆至表达载体pET22b( ),在E.coliBL21(DE_3)中表达,镍亲和层析柱纯化tTF/SA融合蛋白。凝血实验和FⅩ活化实验鉴定融合蛋白中tTF的活性,ELISA鉴定融合蛋白中SA与生物素Biotin结合的活性。获得序列正确的tTF/SA/pET22b( )重组子,融合基因在E.coliBL21(DE_3)中高效表达。纯化后的融合蛋白具有活化FⅩ、引起血液凝固的能力,且能与生物素结合。融合基因已成功在E.coliBL21(DE_3)中表达,tTF/SA融合蛋白具有TF和SA活性。融合蛋白tTF/SA可作为通用效应因子,与生物素化的肿瘤组织血管特异性载体联用,实现选择性诱发肿瘤组织血管栓塞的多点治疗。     

蛇毒凝血酶原激活组分的研究概况

<正>蛇毒是一类复杂的具有多种生物学活性的蛋白质和蛋白多肽。目前已经分离纯化出许多作用于血液凝固酶促级联反应过程中的一个或多个环节的蛇毒组分,包括FⅡ、FⅤ、FⅦ、FⅩ等激活剂以及直接使纤维蛋白原凝聚的蛇毒凝血酶样酶。蛇毒蛋白中有一类凝血毒素作用于血液凝固酶促级联反应,发挥止血作用,作用方式:(1)激活内源性和外源性凝血途径中的各种凝血因子,从而促进血液凝固。(2)激活凝血酶原,从而发挥凝血作用。(3)直接使纤维蛋白原变成纤维蛋白,即类似凝血酶样作用[1]。现已在临床上广泛     

内毒素结合肽的原核表达、纯化及生物学活性鉴定

重组人内毒素结合肽 (endotoxinbindingpeptide ,EBP)融合蛋白在大肠杆菌中表达 ,分离和纯化后对其进行生物学活性观察 .将构建好的PinpointⅩa3 EBP生物素融合表达载体转化大肠杆菌DH5α ,IPTG诱导表达菌株 ,亲和层析法纯化表达产物 ,因子Ⅹa(factorⅩa)切割分离内毒素结合肽 ,采用凝胶过滤和反相液相高效色谱法两步纯化 ,从相对分子质量、N端 1 0个氨基酸的序列分析等方面进行鉴定 ;利用人单核细胞U937对重组内毒素结合肽进行了生物学活性的检测 .结果发现 ,内毒素结合肽以包涵体形式存在 ,因子Ⅹa酶切融合蛋白后得到 3 5kD的内毒素结合肽 ,纯化后内毒素结合肽纯度达 99%以上 ,N端 1 0个氨基酸的分析结果与预期相符 ;初步证实内毒素结合肽具有较好的LPS结合活性 ,能够抑制LPS的作用 .经原核表达及纯化复性 ,获得了具有较好生物学活性的内毒素结合肽 ,为进一步研究其功能奠定了良好的基础     

因子Xa抑制剂研究进展

因子X位于内外源性凝血途径的交汇处,其活性形式因子Xa(FXa)与因子Va、Ca^2 、PF3一起激活凝血酶原,产生凝血酶,触发凝血级连发应的发生。由于其在凝血途径中的重要位置,FXa抑制剂成为抗凝治疗新药开发中很有吸引力的靶位点。     

组织因子功能的多样性

组织因子（TF）是一个分子量为47kD的跨膜糖蛋白。作为凝血因子FⅦ／FⅧa的受体在引发凝血中起着重要的作用。近几年陆续发现TF还在肿瘤血管形成,肿瘤迁移,信号转导,炎症,动脉粥样经及胚胎发育等方面都有一定作用。但其机制仍知之甚少。有些是TF与凝血因子FⅦ／FⅦa结合后继发的效应,有些则是非FⅦ依赖性的。本文就TF的这些功能做一综述,并初步探讨了其机制及相应的治疗策略。     

溃疡性结肠炎对凝血-纤溶系统激活现象的探讨

目的:通过对活动期和缓解期溃疡性结肠炎(UC)患者凝血和纤溶系统各指标的检测和对比,探讨肠炎对凝血-纤溶系统的激活作用。方法:以20名缓解期溃疡性结肠炎患者为对照,检测20名活动期溃疡性结肠炎患者体内凝血和纤溶系统各指标,包括血小板计数、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、凝血因子Ⅻ、Ⅺ、Ⅹ、Ⅸ、Ⅷ、Ⅶ、Ⅴ、Ⅱ,纤维蛋白原和D二聚体(D-D)。结果:活动期溃疡性结肠炎患者体内凝血因子Ⅺ、Ⅹ、Ⅸ、Ⅷ、Ⅴ、Ⅱ因子以及血浆纤维蛋白原、D-二聚体水平显著高于非活动期患者,其他指标没有显著差别。结论:活动期溃疡性结肠炎患者凝血-纤溶系统处于激活状态,提示肠炎可以激活凝血-纤溶系统。     

凝血理论的修正及其意义

凝血过程是一系列酶促反应,包括内在途径、外在途径与共同通路。经典凝血理论认为内在途径是生理性止血中凝血过程的主要途径,外在途径是次要的或辅助性的,现代凝血理论认为体内凝血过程的启动是通过组织因子途径（外在途径）实现的。但由于组织因子途径抑制物（ＴＦＰＩ）的存在,外在途径只能形成微量凝血酶,然后是放大阶段微量凝血酶通过“截短的”内在途径生成中量凝血酶,以完成正常凝血过程。现代凝血理论对于心脑血管病变     

重组人活性凝血因子Ⅶ及其应用

人凝血因子Ⅶ(FⅦ)是一种维生素K依赖的单链糖蛋白,在体内凝血过程中发挥着重要的作用。重组人活性凝血因子Ⅶ(rhFⅦa)在血管损伤处与组织因子结合后产生足够的凝血酶,从而触发凝血瀑布。rhFⅦa于1999年由美国FDA批准上市(Novo Seven),尽管结构与血浆提取的FⅦa存在差异,但两的功能是完全一致的。临床研究表明,rhFⅦ对血友病、血小板减少症和血小板功能障碍、严重创伤、大面积外科手术的止血具有令人满意的止血效果。rhFⅦa由于安全有效,成为治疗血友病、外科创伤出血等的替代疗法。     

一种新的蛇毒凝血酶原激活物的分离纯化及特征

为获得矛头蝮蛇（Bothrops atrox）蛇毒凝血酶原激活物并研究其基本性质,采用SP Sepharose Fast Flow, DEAE Sepharose Fast Flow 和SP Sepharose High Performance等层析方法从巴西矛头蝮蛇蛇毒中分离纯化得到1种单一组分的凝血酶原激活物（prothrombin activator,FⅡA）.还原性SDS-PAGE结果显示,其分子质量约为72 kD,等电点为6.67. HPSEC显示纯度大于95%.该酶是1种N连接的糖蛋白,N末端氨基酸序列为ALVLIAFAQYLQQCP,获得登录号为：B3A0N1其活性可被EDTA-Na₂ 抑制,PMSF对其活性无影响,对凝血酶原的激活过程无需Ca2+、FⅤa、磷脂的参与,为P-Ⅰ金属蛋白酶,对凝血酶原的激活方式与FⅩa相似.本研究纯化与鉴定的新凝血酶原激活物为其药学研究及临床应用提供参考.     

接触系统生物学意义的再认识

目前,凝血学说发放发生了概念性改变,认为体风凝血过程分为两个阶段?组织因子途径凝血过程的启动,以因子Ⅸ（ＦⅨ）为起点的内在途径凝血过程的放大,而接触系统并不参与体内凝血过程。已有资料表明,接触系统是一个重要的血管生物学调制 主要作用包括调整血管紧张度、抑制血小板活化、促进纤溶、抑制粘附以及促进炎病等。它的改变与败血症、血栓性疾病等病变过程密切相关。     

凝血因子Ⅸ/凝血因子Ⅹ结合蛋白家族的研究进展

凝血因子Ⅸ/Ⅹ结合蛋白家族是近来发现的C型动物凝集素超家族中一个亚家族.它们存在于蝰科蛇毒中,不具有酶活性,通过与凝血因子Ⅸ或凝血因子Ⅹ结合来延长凝血时间.在钙离子存在下结合在凝血因子Ⅸ/Ⅹ分子中γ-羧基谷氨酸区域.它们彼此之间具有很高的序列同源性,都是由两条同源的肽链通过一对二硫键相连.两条肽链都具有C型糖识别区的二硫键构型,各含一个钙离子结合位点.其中habu凝血因子Ⅸ/Ⅹ结合蛋白的晶体结构已经测定,除掉相互交叠的中心环外,两条肽链都具有类似于鼠甘露糖结合蛋白的结构.     

滴水湖叶绿素a时空分布及其与水质因子的关系

根据2011年9月-2012年8月监测数据,分析上海市人工湖泊——滴水湖叶绿素a的时空分布及其与主要环境因子的相互关系.结果表明:滴水湖叶绿素a含量随时间的变化幅度较大,表现为3、7月出现高峰而其他月份较低;叶绿素a含量在空间分布上具有一定的分异性,湖心普遍偏高,其他各点相对较低;对滴水湖叶绿素a采用主成分多元线性回归分析(APCS-MLR),得到描述水质因子的潜变量F1、F2与其相关性较大,建立了潜变量与叶绿素a含量的相关性模型;滴水湖叶绿素a含量与溶解氧(DO)、水温、总溶解磷(TDP)、活性磷(AP)有着密切的相关性;磷为滴水湖水体初级生产力的限制因子;因此,磷是有效控制滴水湖水体富营养化的关键因子.     

尖吻蝮蛇毒去纤酶制剂对家兔体内外凝血作用的影响

本文报导了尖吻蝮蛇毒去纤酶(defibrase)对家兔体内外凝血作用的影响。 体外实验表明,去纤酶和凝血酶具有相同的作用,它能将血浆纤维蛋白原变成纤维蛋白,后者是非交联性的,去纤酶能降解纤维蛋白原的α—链从而使血块进一步溶解,不致产生血管内凝血。 体内实验表明,去纤酶显著延长全血凝血时间,凝血酶时间和凝血酶原时间,注射去纤酶后,家兔血液中的血浆纤维蛋白原降低,优球蛋白溶解时间显著缩短,对因子Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ、ⅩⅢ和血小板因子却无明显影响。 体内外实验表明,尖吻蝮蛇毒去纤酶制剂似乎具有纤溶和去纤两种性质。     

vWF的结构与功能

vWF是体内一种分子量很大的糖蛋白,其功能单位是vWF单体,能与GPⅠb,GP Ⅱb-Ⅲ a,胶原,FⅧ和肝素等结合而参与凝血与止血,其缺陷将引起血管性假血友病．     

一种新型融合蛋白(RGD)3/tTF的基因表达与活性分析

为了发展一种新型的融合蛋白(RGD)3/tTF用于肿瘤血管的选择性栓塞治疗,利用PCR技术重组(RGD)3/tTF融合基因,克隆于pET22b( )载体,表达于E.coliBL21(DE3)。用镍柱纯化融合蛋白。凝血实验与FⅩ活化实验检测融合蛋白tTF组分的活性。间接ELISA分析(RGD)3/tTF与αvβ3的特异结合能力。pET22b( )/(RGD)3/tTF重组质粒成功获得并表达于E.coliBL21(DE3)。纯化蛋白(RGD)3/tTF能有效诱发血液凝固,活化FⅩ。(RGD)3/tTF与αvβ3的特异结合能力比RGD/tTF提高了32%。新型融合蛋白(RGD)3/tTF已在E.coli系统成功表达,表达蛋白保持tTF的活性并显示比RGD/tTF更高的与αvβ3的结合能力。     

羊栖菜褐藻糖胶抗凝血活性的研究

本文研究了羊栖菜褐藻糖胶的化学组成和抗凝血活性之间的关系。采用热水提取得羊栖菜粗多糖,CaCl2纯化得褐藻糖胶,DEAE Sepharose CL-6B柱层析与Sepharose CL-6B柱层析对褐藻糖胶进行分级,得到F1、F2、F31、F32和F33五个级分,均为岩藻糖、半乳糖和甘露糖等糖基组成的杂多糖,并含有硫酸酯和糖醛酸以及少量的蛋白质,相对分子质量范围2．5万～95万。采用活化部分凝血活酶时间(APTT)和凝血酶时间(TT)检测了这5个级分的抗凝血活性,结果显示,羊栖菜褐藻糖胶能显著延长APTT的凝血时间,而对TT的影响不明显。F1、F31和F32对APTT的影响比较显著,而F2、F33和羊栖菜粗多糖的影响较小。研究表明,羊栖菜褐藻糖胶主要是通过抑制内源凝血途径而达到抗凝血的效果,其抗凝血活性与褐藻糖胶的硫酸基含量成正相关,而与相对分子质量和糖醛酸含量无关。     

男性离休干部凝血功能和血脂检测结果分析

目的:探讨男性离休干部凝血功能和血脂检测指标的变化规律,以便做好干部预防保健工作.方法:选取门诊体检的男性离休干部120人,进行抗凝血酶活性(AT)、因子Ⅷ活性(FⅧ)、纤维蛋白原(Fg)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)检测,作为实验组,另随机选取80名40～75岁男性进行检测以上项目作为对照组.比较两组检测结果及结果异常率.结果:实验组与对照组相比各项都存在差异,尤以AT、FⅧ、Fg、TC差异更显著;实验组AT、FⅧ结果异常率显著高于对照组.结论:男性离休干部凝血功能和血脂水平与成年男性差异显著,故应定期监测这些指标的变化,尤其要注意监测AT、FⅧ,以便预测血栓性疾病风险,及时处理,提高生活质量.