无患子内生真菌抗菌筛选与鉴定

目的 筛选和鉴定具有抗菌活性的无患子内生真菌,为进一步探索其抗菌成分提供菌源。方法 采用拮抗试验和体外抗菌测试方法,以大肠埃希菌（Escherichia coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）和白假丝酵母菌（Candida albicans）为指示菌,首次研究6株无患子内生真菌（HY11-1、HY11-2、P11、O、ye4、ye5）的抗菌特点。通过形态学观察和18S rDNA序列分析,对活性菌株进行菌种鉴定。结果 菌株HY11-1、ye5和P11具有较强的抗菌能力,其中菌株HY11-1对金黄色葡萄球菌抑菌效果最显著,确定菌株HY11-1、ye5、P11分别为Alternaria alternate、Aspergillus ochraceus和Penicillium chrysogenum。结论 3株无患子内生真菌A. alternate HY11-1、A. ochraceus ye5和P. chrysogenum P11具有较强的抗菌效果,具有进一步研究的价值。     

葛内生真菌抑菌活性菌株的筛选及鉴定

对药用植物葛的112株内生真菌进行抑菌活性的观察,结果显示:J5-2、J100-2、J31-3这3株菌对细菌及植物病原真菌具有较好的抑制作用,其中J100-2对苹果树腐烂病菌(Valsa mali)等5种植物病原真菌均有不同程度的抑制作用,抗菌谱较广。通过形态学特征观察和rRNA基因ITS序列系统发育分析对J100-2进行鉴定,可知J100-2为半知菌门,球壳孢目,球壳孢科,茎点霉属,巨腔茎点霉(Phoma macrostoma)。     

抗植物病原真菌紫叶小檗内生真菌的筛选和鉴定

对紫叶小檗根、茎、叶和果实中分离纯化得到的28株内生真菌进行液体培养,培养物烘干研磨后用丙酮浸提,测定各提取物对5种供试植物病原真菌的抑菌活性,对抗菌谱较广的菌株进行分子鉴定,并分别测定其胞内、胞外代谢产物的抑菌活性.结果显示:(1)紫叶小檗25株内生真菌中有5株菌(R3、S4、L6、F2、F6)的抗菌谱较广,其中,茎中的内生菌S4抑菌活性最强,对5种植物病原真菌的抑菌活性均大于90％,对马铃薯干腐病菌的抑菌率最高达93.06％.(2)经鉴定S4为子囊菌门的Para phaeos phaeria属真菌.(3)S4菌丝体丙酮提取液对马铃薯干腐病菌的抑菌率随其浓度(加入体积)的增加而增大,呈正相关线性关系(y=15.334x+14.618,r=0.99),而S4发酵液对马铃薯干腐病菌的抑菌率随其浓度(加入体积)的增加而减小,呈负相关线性关系(y=-20.196x+64.984,r=0.99),即在较高浓度时促进病原菌生长.研究表明,紫叶小檗内生真菌S4菌株的抑菌活性成分主要为胞内代谢产物.     

白花泡桐内生真菌的分离鉴定及抗菌活性筛选

从白花泡桐根、茎、叶中分离出19株内生真菌,对分离出的真菌分别利用琼脂块法和纸片扩散法进行初选和复选,通过形态学特征观察和rRNA基因ITS序列系统发育分析对抗菌活性菌株进行鉴定。抑菌试验结果显示JSD-8、JM-1和JM-10等3株内生真菌对枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)CGMCC1.769、大肠杆菌(Escherichia coli)CGMCC1.1103和白色念珠菌(Candida albi-cans)ATCC10123均有一定的抗菌活性。鉴定结果表明,JSD-8、JM-1、JM-10分别属于串珠赤霉菌(Gibberella moniliformis)、长柄链格孢菌(Alternaria longipes)和托姆青霉菌(Penicilium thomii)。     

一株内生真菌黑曲霉的活性检测及鉴定

从飞龙斩血内分离到一株产广谱、高活性抑菌物质的内生真菌F-001,经测定对细菌、植物病原真菌和皮肤致病真菌共26种病原微生物有不同程度的抑制作用。对其进行了系统鉴定和生物学研究,形态特征表明,该菌株与曲霉属Paecilomyces Bainier中的黑曲霉Paecilomyceslilacinus的特征基本一致,ITS序列分析显示本菌株与多个黑曲霉菌株同源性都在99%,因此将菌株F-001命名为黑曲霉Paecilomyces lilacinusF-001。该研究首次从核桃树皮内分离得到黑曲霉并进行了该菌株的抑菌活性检测。     

远志内生真菌抑菌活性筛选

从10月份采集的栽培和野生远志(Polygala tenuifolia Willd) 的根、茎、叶中分离内生真菌85株, 其中自栽培远志分离33株, 野生远志分离52株, 共鉴定76株, 隶属于23个属。通过对14种指示菌进行生长抑制试验, 发现远志内生真菌对枯草芽孢杆菌、宋内氏痢疾杆菌、大肠杆菌、白色念珠菌和九州镰孢霉等5种指示菌抑制效果较好。经鉴定, 它们属于镰孢霉属, 交链孢霉属, Aphanocladium等属, 对单核细胞增生李斯特菌、蜡样芽孢杆菌、普通变形杆菌、致病性大肠埃希氏菌、小孢拟盘多毛     

远志内生真菌分离鉴定及活性筛选

从两个不同生长时期野生远志中分离内生真菌菌株88株,隶属于28个属,研究了各菌株对3种指示菌的拮抗作用。结果表明,远志不同生长时期不同部位的内生真菌数量、分布、种群存在差异,其优势属为Alternaria Nees。茎中内生真菌种类较多。88株内生真菌中有73株菌至少能拮抗1种指示菌,占总菌数的83.0%。4株抗性较强的菌株分别隶属于Trichothecium Link、Cephalosporium Corda、Alternaria Nees、Dactuliophora C.L.等。     

远志内生真菌分离鉴定及活性筛选

从两个不同生长时期野生远志中分离内生真菌菌株88株,隶属于28个属,研究了各菌株对3种指示菌的拮抗作用。结果表明,远志不同生长时期不同部位的内生真菌数量、分布、种群存在差异,其优势属为Alternaria Nees。茎中内生真菌种类较多。88株内生真菌中有73株菌至少能拮抗1种指示菌,占总菌数的83.0%。4株抗性较强的菌株分别隶属于Trichothecium Link、Cephalosporium Corda、Alternaria Nees、Dactuliophora C.L.等。     

红树植物内生真菌的分离鉴定及抗菌活性菌株的筛选

本文对厦门集美红树植物无瓣海桑(Sonneratia apetala),海马齿(Sesuvium portulacastrum)和秋茄(Kan-delia candel)的多个部位进行内生真菌的分离和形态鉴定,并采用菌饼法对分离到的内生真菌进行抗菌活性筛选。结果显示,从3种红树植物的根、茎、叶中分离得到25株内生真菌,分别隶属8个类群,以链格孢属和曲霉属为主,分别占菌株总数的28.0%和24.0%;有19株菌株对至少一种指示菌有抑制作用,占菌株总数的76.0%。研究结果表明,红树植物来源的内生真菌数量多,种属丰富,同时具有良好的抗菌活性,是研究抗菌活性化合物的重要资源。     

野生黄芩内生真菌的分离鉴定及抗菌活性筛选

从野生黄芩的根、茎、叶中分离出97株内生真菌, 其中33株来自生长期植株, 64株来自成熟期植株。经分类鉴定, 隶属于38个属, 优势属为Alternaria, 成熟期的属种多样性高于生长期。将其中的95株内生真菌对14种指示菌进行抑菌试验, 发现其中91株内生真菌对一种或多种指示菌具有抑菌活性, 占分离菌株总数的95.8%。野生黄芩内生真菌对大肠杆菌CGMCC1.1103、枯草芽孢杆菌CGMCC1.769、蜡样芽孢杆菌ATCC1361、致病性大肠埃希氏菌ATCC49105、白色假丝酵母ATCC10231、小孢拟盘多毛孢CNUMB2PM01等6个指示菌菌株抑菌效果较好; 对单核细胞增生李斯特菌ATCC27708、普通变形杆菌ATCC33420、肠炎沙门氏菌ATCC14208、副溶血型弧菌ATCC27519、宋内氏痢疾杆菌ATCC51060、九州镰孢霉CNUMB2FK01等6个指示菌菌株抑菌效果较差; 对深红酵母CGMCC2.282和金黄色葡萄球菌ATCC12600没有抑制作用。     

具抑菌活性连翘内生真菌的分离与鉴定

【目的】从药用植物连翘内生真菌中筛选抑菌活性菌株, 并对其主要活性成分进行检测分析。【方法】采用常规组织分离法分离内生真菌, 滤纸片法测定其发酵产物对3种指示细菌的抑菌活性。TLC、HPLC和HPLC-MS检测活性菌株代谢产物中连翘苷成分。根据形态学特征和ITS序列分析鉴定目的菌株。【结果】分离得到的24株内生真菌中抑菌圈直径超过10 mm的菌株, 发酵液组有11株(45.8%), 菌丝体组有19株(79.2%), 活性菌株主要集中在果实内生真菌中, 其中G5、G7和G10表现出较强的抑菌活性。从菌株G10的胞内产物中发现活性成分连翘苷, 将其鉴定为胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides。【结论】连翘内生真菌是天然抗菌活性物质的重要筛选来源。     

Molecular characterization and antimicrobial activity of endophytic fungi from coffee plants

Endophytic filamentous fungi from coffee plants (Coffea arabica and C. robusta) deposited in the Brazilian Collection of Environmental and Industrial Microorganisms (CBMAI) were characterized taxonomically by using molecular tools and investigated concerning their antimicrobial activity against different human pathogenic bacteria. Thirty-seven out of 39 CBMAI strains investigated were identified to at least at genus level by ITS and rDNA D1/D2 sequencing and phylogenetic analyses. Bioactivity screening of fungal extracts against Salmonella choleraesuis (CBMAI 484), Staphylococcus aureus (CBMAI 485), Pseudomonas aeruginosa (CBMAI 489) and against four different Escherichia coli serotypes showed that 17 fungi inhibited at least one of the bacteria studied. The endophytic fungi Trichoderma harzianum (CBMAI 43), Guignardia sp. (CBMAI 69) and Phomopsis sp. (CBMAI 164) inhibited from four to five bacterial species, while five fungi were active against all pathogenic bacteria tested and were identified as Aspergillus versicolor (CBMAI 46), Fusarium oxysporum (CBMAI 53), Glomerella sp. (CBMAI 63) and Cladosporium spp. (CBMAI 64 and CBMAI 66). The Minimal Inhibitory Concentration (MIC) for the fungus extracts varied from 0.025 to 1.0 mg ml⁻¹, demonstrating antimicrobial potential of some of these fungi.     

Chemical evaluation and antibacterial activity of novel bioactive compounds from endophytic fungi in Nelumbo nucifera

The objective of this study was to characterize an endophytic fungi producing-bioactive compound from the aquatic plant, Nelumbo nucifera. All parts of such plant were cleaned with surface sterilization technique and cultured on potato dextrose agar to isolate endophytic fungi. The identification was characterized by morphological and molecular technique. Fungal isolates were screened to discover antimicrobial activities by disc diffusion method against Methicillin-resistant Staphylococcus aureus DMST20651 (MRSA). MIC and MBC for those crude fungal extracts were determined. Finally, the chemical profile of crude extract was determined by gas chromatography and mass spectrometry. Six endophytic fungi were isolated from the surface-satirized parts of N. nucifera. Based on disc diffusion assay, the highest antibacterial activity against MRSA was isolate ST9.1 identified as Aspergillus cejpii. Results demonstrated that the ethyl acetate extraction had more active fractions with MIC of 2.5 mg/ml and MBC concentration of 50.0 mg/ml. The crude extracts were developed to identify the chemical constituents by gas chromatography and mass spectrometry. The major component of crude extract of endophytic fungi was 5-(1H-Indol-3-yl)-4,5-dihydro-[1,2,4]triazin-3-ylamine (C₁₁H₁₁N₅). Thus, the plant could be used in the treatment of infectious diseases caused by bacterial pathogen.     

植物叶片内生放线菌的分离、分类与拮抗活性

以四川采集的芍药和北京采集的三叶草的叶片为材料,经表面消毒程序后,分离出内生放线菌15株。通过表观特征比较和BOX-PCR基因指纹图谱分析的方法,将分离出的放线菌归并于12个不同的基因型,其中6个来自芍药,6个来自三叶草。结合16S rRNA基因序列分析可知,分离菌株除C4、C5属于假诺卡氏菌外,其余的13株都是链霉菌;菌株C12与最近模式种的16S rRNA基因序列相似性较低,为96.6%。对分离菌株的抗菌活性实验表明,有11株在一个或一个以上的测试中呈阳性;其中6株对植物致病菌立枯丝核菌有明显抗性,占阳性菌株的55%。     

银杏内生细菌的分离鉴定及抑菌活性初探

【目的】从银杏(Ginkgo biloba)茎叶中分离鉴定内生细菌, 测定其体外抑菌活性及对辣椒果疫病的防治效果。【方法】采用平板对峙法筛选出对辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)有拮抗作用的内生细菌, 并用平板对扣法测定其中一株防治效果较好的内生细菌产生的挥发性物质对辣椒疫霉菌生长的影响。通过生防菌液和病原菌孢子悬浮液喷雾接种辣椒果测定该菌株对辣椒果疫病的防治效果。基于形态特征、生理生化特性、16S rDNA和gyrA基因序列同源性分析鉴定该生防菌株。【结果】从银杏的茎和叶中分离获得9株内生细菌。平板对峙生长试验结果表明, 菌株W5对供试的辣椒疫霉菌、稻瘟病菌(Pyricularia grisea)、水稻纹枯菌(Rhizoctonia solani)、黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、荔枝霜疫霉菌(Peronophythora litchi)、荔枝酸腐菌(Geotrichum candidum)均有抑制作用, 其中对辣椒疫霉菌、稻瘟病菌和荔枝霜疫霉菌的抑菌效果显著, 抑菌率分别为88.9%、86.3%和90.2%。其产生的挥发性物质能明显抑制辣椒疫霉菌菌丝的生长。对辣椒采后果疫病的防治效果表明, 先喷雾接种W5菌悬液24 h后再接种辣椒疫霉病菌孢子悬浮液的防治效果最好, 可将辣椒果的保鲜期延长2?3 d。该菌株被鉴定为解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。【结论】获得了一株对植物病原菌物有良好防治效果的银杏内生解淀粉芽胞杆菌W5, 对辣椒采后果疫病及其他病原真菌的防治具有潜在应用价值。     

二型花柱植物金荞麦的繁殖生态学研究

通过野外实验观察和人工控制套袋等方法,从金养麦的花部基本特征、开花动态、花粉胚珠比(P/O)、花粉活力、柱头可授性、杂交指数、套袋实验及访花昆虫等方面对其繁殖生态学进行了研究.结果显示:(1)金荞麦在同一居群中同时具有长柱型(L-型)和短柱型(S-型)两种花型,短花柱花直径(7.25±0.11 mm)显著大于长花柱花直径(6.79±0.11 mm),长花柱花的柱头和花药高分别为3.39±0.04 mm和1.80±0.02 mm,短花柱花的柱头和花药高则分别为1.89±0.04 mm和3.19±0.06 rnm,表现出互补式雌雄异位的花部特征.(2)金荞麦8～10月开花,单花序的花期为15～23 d,单花的花期为1～3 d,开花进程中,内轮雄蕊先散粉,外轮雄蕊后散粉;S-型花的花粉活力高于L型花的花粉活力,但其单花花粉量低于L-型花,显示了两种花型的自我调控机制.(3)套袋实验表明,金荞麦自花自交不亲和,但具有型内和型间亲和性,L型和S-型花的P/O值分别为810±40.48和526.5±42.24,表明其繁育系统为兼性异交,需要传粉者,但L-型花更倾向异交.(4)金荞麦的主要访花昆虫为膜翅目(Hymenoptera)、双翅目(Diptera)、鳞翅目(Lepidoptera)、半翅目(Hemiptera)和蜻蜒目(Odonata) 19个科37种昆虫,其中,两种花型拥有12种共同的访花昆虫,L-型花访花昆虫14种,S-型花访花昆虫35种,表明S-型花对昆虫具有更强的吸引力.研究表明,金荞麦是典型的二型花柱植物,虽然具有严格的自交不亲和性,但显示一定的型内亲和性.     

山苍子叶内生真菌的纯化与鉴定

本研究选用PDA培养基,通过组织块分离法从山苍子叶中分离得到两株内生真菌。对照真菌鉴定手册,根据菌株和菌丝体形态学特征,并给合ITS区段的碱基序列分析,鉴定两株内生分别属于顶孢霉属和芒果球座菌属。     

邳州银杏内生放线菌分离、筛选及活性菌株鉴定

【目的】从银杏中分离、筛选得到具有抑菌作用的内生放线菌,为放线菌在生物防治上的应用提供新的菌种资源。【方法】采用组织贴片培养法进行分离,生长对峙法进行筛选。【结果】从银杏的根、茎、叶中分离得到98株、50株、8株内生放线菌(共计156株),47株放线菌具有拮抗植物病原真菌活性。菌株KLBMP 5501抗菌活性最好且具有广谱性,基于形态特征、培养特征、生理生化特征和16S rRNA基因序列的相似性分析等多项分类特征表明,菌株KLBMP 5501是一株浅紫链霉菌(Streptomyces violascens)。【结论】筛选得到了具有应用潜力的高活性菌株,并进行了菌种鉴定。     

喜树种子内生放线菌的分离鉴定及抗菌活性物质初分离

【目的】探究含有抗肿瘤活性喜树碱的喜树(Camptotheca acuminata Decne.)种子中内生放线菌的多样性,以及从内生放线菌中寻找新型活性化合物产生菌。【方法】利用放线菌富集培养基分离喜树种子内生放线菌,并根据菌落形态及16S rRNA基因序列同源性分析进行菌种鉴定;以及利用与病原微生物共培养方法检测分离菌株的抗菌活性。【结果】从上海交通大学校园的喜树种子中共分离到33株内生疑似放线菌,经基于16S rRNA基因序列分析的分子鉴定,确定其中21株属于链霉菌,1株属于拟诺卡氏菌,另有3株由于序列相似性低于95%而无法分类;8株因未能克隆16S rRNA基因序列而未确定分类。这11株疑似内生放线菌是否是新放线菌(种)类群,有待后续深入研究。初步的抗细菌、真菌活性检测发现,分离到的内生放线菌中42.42%以上对立枯丝核菌(Rhizoctonia solani Kühn)有很强的抑制菌核形成的作用,54.54%内生菌有较强抑制芽孢杆菌生长的作用。并且挑选其中具有代表性的菌株Streptomyces sp.CXSZ1进行代谢产物的分析,初步发现其代谢产物中含有抗细菌活性成分。【结论】喜树种子内生放线菌的分离、鉴定及生物活性物质分离鉴定的研究工作,一方面可以为揭示喜树等高等植物种子内生菌的起源、演化等提供有价值的信息,同时也为新结构、新活性化合物发掘提供实验材料。