虎纹捕鸟蛛生物学特性的观察

虎纹捕鸟蛛（Ornithoctonus huwenna)个体大,毒性强,有强烈的攻击性,蛛毒含量大,采毒易,是进行蛛毒,蛛蛋白研究的理想试验材料,研究在饲养条件下虎纹捕鸟蛛的生活习性,捕食特点,雌蛛产卵,护卵习性,卵的孵化,蜕皮及幼蛛的发育,以及耐饥饿,耐干旱能力。     

虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ cDNA克隆及序列

 从中国珍稀毒蛛种虎纹捕鸟蛛 (Selenocosmia huwena)毒腺中分离纯化的虎纹捕鸟蛛毒素 - (Huwentoxin ,HWTX- ) ,其一级结构、二级结构和溶液构象均已阐明 ,生理功能实验已证实 HWTX- 是一种作用于突触前膜的神经毒素和高阈值钙通道抑制剂 .为深入开展对 HWTX- 的应用研究 ,根据 HWTX- 多肽氨基酸序列 ,设计其 N-端、C-端和中间段 3组简并引物 (引物 、引物 和引物 ) .从虎纹捕鸟蛛毒腺提取制备 m RNA,逆转录合成 c DNA.以引物 和引物 为引物 ,采用 PCR方法对虎纹捕鸟蛛毒腺总 c DNA进行简并引物扩增 ,得到两条相对特异性的 DNA片段 ,产物直接与 PCR克隆载体 p UC- T连接 .重组子经原引物再次 PCR扩增和同位素标记引物 进行 Southern分子杂交鉴定 .对 4个重组子测序结果表明 ,有 1个重组子所对应的氨基酸顺序与 HWTX- 一致 ,Gen Bank数据检索说明 HWTX- c DNA编码序列确实是一个从未报道的序列 .本研究结果为 HWTX- 在真核细胞表达 ,大量获取蜘蛛毒素组分奠定了基础 .     

虎纹捕鸟蛛雄蛛的修订（蜘蛛目：捕鸟蛛科）

修订了王家福等所订虎纹捕鸟蛛ＳｅｌｅｎｏｃｏｓｍｉａｈｕｗｅｎａＷａｎｇｅｔ．ａｌ,１９９３的雄蛛,并将近期所采得的该种雄蛛作了重新描述。     

眼镜蛇毒腺cDNA文库的构建

目的　蛇毒含有多种生物活性成分, 从天然蛇毒中提取分离蛇毒有效成分受到蛇毒资源和质量的限制。为开发蛇毒有效成分的基因工程产品, 本研究构建了蛇毒腺的ｃ Ｄ Ｎ Ａ 文库, 为进一步筛选、克隆和表达蛇毒有关基因做准备。　方法　从眼镜蛇（ Ｎａｊａ ｎａｊａ ａｔｒａ ）毒腺中提取ｍ Ｒ Ｎ Ａ,经反转录合成ｃ Ｄ Ｎ Ａ后, 以λｇｔ１０ 噬菌体为载体, 构建非表达的ｃ Ｄ Ｎ Ａ 文库。　结果　蛇毒腺ｃ Ｄ Ｎ Ａ 非表达文库库容量为２×１０６ｐｆｕ／μｇ 重组子, 经大肠杆菌 Ｃ６００ ｈｌｆ 菌株平皿测定, 重组率为 ７０％ 。　结论　经平板鉴定和 Ｐ Ｃ Ｒ 快速鉴定表明, 所构 ｃ Ｄ Ｎ Ａ 文库达到建库要求, 能够用于目的基因筛选和克隆表达。     

中国虎纹捕鸟蛛的生态学

文中首次报道了虎纹捕鸟蛛种群生态分布特点、洞穴结构、活动规律、捕食、繁殖、防御和进攻行为，并初步分析了其种群分布与栖息地结构之间的关系。     

虎纹捕鸟蛛毒素及类似多肽

虎纹捕鸟蛛毒素及类似多肽梁宋平（湖南师范大学生物学系,长沙４１００８１）关键词虎纹捕鸟蛛毒素多肽神经毒素对研究离子通道、神经递质受体、神经突触传递等神经生物学和神经药理学问题具有重要意义。继在蛇、蝎和芋螺等动物毒中发现很多有重要价值的专一性神经毒素之...     

温湿度对虎纹捕鸟蛛繁殖力影响的研究

研究不同温湿度对虎纹捕鸟蛛繁殖力的影响,结果表明：虎纹捕鸟蛛繁殖力在26℃恒温和RH80％的因子水平组合中较大。在24－26℃变温和RH80％的组合中为最大。     

虎纹捕鸟蛛毒的生物学活性鉴定

本文报道了采集广西产虎纹捕鸟蛛（Selenocosmia huwena)毒液的方法,并对粗毒进行了部分生物学活性的测定,该粗毒对小鼠和蜚蠊的LD50分钟为1．16mg/kg和300ug/g,该粗毒具有透明质酸酶,碱性磷酸酶,蛋白水解酶和脱氧核糖核酸酶活性,未测到磷脂酶A和胆碱脂酶性,通过电生理实验发现该粗毒含有阻断蟾蜍神经肌肉接头传递的毒素,并观察到当小鼠接受腹腔注射致死剂量（5mg/kg)粗毒后便迅速出现呼吸麻痹。     

虎纹捕鸟蛛毒素的抗菌活性探讨

从虎纹捕鸟蛛粗毒中分离得到2种多肽毒素,huwentoxin-I和huwentoxin-II,抗菌实验结果表明,这2种多肽毒素能抑制革兰氏阴性菌,革兰氏阳性菌及啤酒酵母菌的生长,并且这两种多肽毒素有一定的协同抗菌作用。     

虎纹捕鸟蛛的拉丁学名

虎纹捕鸟蛛常作为实验动物用于毒素等领域的研究。关于该种的行为学、生态学等方面的研究工作,也常见于国内各刊物。但在诸多的文献中,该种的拉丁学名写法不一,造成一些误解,也不便于检索。实际上,该种通用的拉丁学名是Haplopelma huwenum（Wang,Peng＆Xie,1993）。     

虎纹捕鸟蛛毒液中透明质酸酶的纯化和部分性质的研究

用分子筛（岛津ＤＩＯＬ－１５０柱）和阳离子交换（岛津ＷＣＸ－１柱）高效液相色谱从虎纹捕鸟蛛（Ｓｅｌｅｎｏｃｏｓｍｉａｈｕｗｅｎａ）毒液中分离提纯透明质酸酶（Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｄａｓｅ,ＥＣ３．２．１．３５）．经等电聚焦电泳为一条带,ｐＩ＝７．２．经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳测得分子量为４０ｋＤ,经凝胶过滤测得分子量为４０．７ｋＤ。以透明质酸为底物时在ｐＨ３．５─５．５范围内有较大活性,最适ｐＨ值为４．０;在ｐＨ４．５─６．０范围内稳定,在反应温度为３０─６０℃时有较大活性,最适温度为５０℃;对热稳定,０．１５ｍｏｌ／Ｌ的ＮａＣｌ对酶活性有一定的稳定作用．３％的肝素、５００μｍｏｌ／Ｌ的Ｈｇ~（２＋）、Ｆｅ~（２＋）、Ｃｕ~（２＋）对酶活性有明显的抑制作用。     

病态虎纹捕鸟蛛器官元素特点分析

采用火焰原子吸收分光光度计,对不同病症的虎纹捕鸟蛛Selenocosmia huwena（Wang et al,1993）的4种器官组织中的5种元素（铁（Fe）、铜（Cu）、锌（Zn）、锰（Mn）、镁（Mg）、钙（Ca））的含量进行了测定。结果表明：这5种元素在病症蜘蛛中的含量与正常蜘蛛相比均有很大差异。本文首次从元素的缺乏或过多积累方面分析了蜘蛛的致病原因。为其人工繁育、开发利用和资源保护提供基础资料。     

虎纹捕鸟蛛凝集素-I(SHL-I)的细胞凝集活性分析

采用人红细胞悬液在微量血凝板上测试了 1 1种单糖对虎纹捕鸟蛛凝集素 - I ( Selenocosmiahuwena lectin- I,SHL - I)的凝集活性的影响 .测试的糖类包括 D-半乳糖 ,甲基 -α- D甘露糖苷 ,D-甘露糖 ,D-甘露糖胺 ,D-葡萄糖 ,N-乙酰 - D-葡萄糖胺 ,D-葡萄糖胺 ,L -木糖 ,L-岩藻糖 ,N-乙酰神经氨酸 ,N-乙酰 - D-半乳糖胺 .测试结果表明 ,只有 D-甘露糖胺对 SHL- I的凝集活性表现出明显的抑制作用 .说明 D-甘露糖胺可能是与 SHL- I专一性结合的糖基 .温度适应性实验表明 SHL- I有较高的热稳定性 ,经 1 0 0℃处理 30 min,仍保持大部分凝集活性 .p H适应性实验表明 ,在碱性 p H环境下SHL- I的凝集活性明显下降 .     

虎纹捕鸟蛛毒素V的二硫键定位分析

虎纹捕鸟蛛毒素V是从虎纹捕鸟蛛毒液中分离得到的一种昆虫毒素．它含有35个氨基酸残基,其中6个半胱氨酸形成三对二硫键．首先采用多酶将天然的肽链裂解后,通过MALDI-TOF质谱分析酶解肽段,推断出1对二硫键位于Cys9-Cys21,然后利用改进的部分还原分步测序法,确定虎纹捕鸟蛛毒素V的另外2对二硫键的配对方式为Cys2-Cysl6和Cys15-Cys28．因此,虎纹捕鸟蛛毒素V的3对二硫键分别以Cys2-Cys16,Cys9一Cys21,Cys15一Cys28(即1-4、2-5和3-6)的方式配对．     

虎纹捕鸟蛛毒素-III及其天然突变体的纯化与鉴定(英文)

虎纹捕鸟蛛毒素 III及其天然突变体是从虎纹捕鸟蛛粗毒中分离得到的两个毒素多肽。虎纹捕鸟蛛毒素 III含 33个氨基酸残基 ,其中包含 6个半胱氨酸残基 ;而其天然突变体只比虎纹捕鸟蛛毒素 III少了C端的色氨酸残基。MALDI TOF质谱测得虎纹捕鸟蛛毒素 III及其天然突变体的分子量分别为 385 3.35和 36 6 7.4 0。通过比较其理论分子量和质谱测定的分子量表明两个多肽的 6个半胱氨酸残基分别形成了三对二硫键。虎纹捕鸟蛛毒素 III与从同一种蜘蛛分离得到的凝集素 I具有 70 .5 %的序列相似性。生物学活性实验表明 ,虎纹捕鸟蛛毒素 III具有使美洲蜚蠊可逆的致瘫作用 ,其半有效剂量 (ED50 )为 (1 92 .95±1 2 0 .84 ) μg/g (P =0 .95 ) ,而且能加强由电刺激引起的大鼠输精管收缩 ;而其天然突变体却不具有上述生物学活性 ,表明C端色氨酸残基为虎纹捕鸟蛛毒素 III生物学活性相关残基 ;同时虎纹捕鸟蛛毒素 III及其天然突变体都不具有类似于凝集素 I对红细胞的凝集活性 ,表明虎纹捕鸟蛛毒素 III和凝集素 I两者氨基酸序列中不同氨基酸残基对于决定两者的生物学活性有着重要的作用     

Three-Dimensional Structure of Selenocosmia huwena Lectin-I (SHL-I) from the Venom of the Spider Selenocosmia huwena by 2D-NMR

The three-dimensional structure of native SHL-I, a lectin from the venom of the Chinese bird spider Selenocosmia huwena, has been determined from two-dimensional ¹H NMR spectroscopy recorded at 500 and 600 MHz. The best 10 structures have NOE violation <0.3 Å, dihedral violation <2 deg, and average root-mean-square differences of 0.85 + 0.06 Å over backbone atoms. The structure consists of a three-stranded antiparallel β-sheet and three turns. The three disulfide bridges and three-stranded antiparallel β-sheet form a inhibitor cystine knot motif which is adopted by several other small proteins, such as huwentoxin-I, ω-conotoxin, and gurmarin. The C-terminal fragment from Leu28 to Trp32 adopts two sets of conformations corresponding to the cis and trans conformations of Pro31. The structure of SHL-I also has high similarity with that of the N-terminus of hevein, a lectin from rubber-tree latex.     

正常人体淋巴细胞cDNA文库的构建

应用GIBCOBRL建库试剂盒建立了正常人体淋巴细胞cDNA文库。取新鲜的正常人外周血,分离出淋巴细胞,进行体外培养,提取总RNA,纯化mRNA,并将其反转录成cDNA,与SalI和NotI接头连接后插入λZipLox载体,体外包装后转染到Y1090宿主菌中,进行滴度测试及文库扩增。构建的正常人淋巴细胞cDNA文库含2-6×106重组子,克隆效率为5×1012重组子/g cDNA,插入片段长度约为1~5kb。扩增后的文库浓度为3×107重组子/μl,将文库稀释到10-6时所产生的噬菌斑密度最为适宜。试验结果表明,该库符合标准,所构建的正常人淋巴细胞cDNA文库为进一步筛选目的基因、制作基因芯片等提供了有效的工具。 Abstract:A lymphocyte cDNA library of normal human was constructed in order to obtain specific gene and prepare lymphocyte gene chips to detect the relative genes between psychiatric diseases and immunity.The lymphocyte was abstracted from fresh normal human blood and cultured in vitro.Total RNA of lymphocyte was extracted from the cultured cells and then mRNA was extracted further.Moreover,single-strand cDNA and double-strand cDNA were synthesized in turn.The double-strand cDNAs were ligated to SalI and NotI adaptor,which were later ligated to arms of λZipLox.Ligated-cDNAs were packed in vitro,and then infected E.coli Y1090.Titering the phage and amplifying the library.The lymphocyte cDNA library consisted of 2-6×106 recombinants with the length of 1~5kb and the cloning efficiency was 5×1012 recombinants/g cDNA.The amplified library was 3×107recombinants/μl in concentration and the number of bacteriophage plagues was the most suitable in density after it was diluted to 10-6 in concentration.The constructed cDNA library of normal human lymphocyte would be helpful to further detecting target genes and preparing gene chips etc.     

cDNA文库固相构建法

本文介绍一种cDNA文库的固相构建法。文库构建过程cDNA的合成和修饰全部在固相介质—磁珠上完成,简便、迅速、文库质量高,能满足不同目的的cDNA文库构建,是一种值得借鉴和应用的好方法。