核糖核酸一级结构微量分析方法的研究 Ⅲ.萤光标记法测定寡核糖核苷酸3′端及核苷酸顺序

本文报导了一种新的萤光试剂DNS-Gly-NHNH_2在寡核糖核苷酸一级结构分析中的应用。寡核糖核苷酸3′端经高碘酸氧化后能与萤光试剂DNS-Gly-NHNH_2反应,经红酵母RNase酶解后得到DNS-Gly-核苷腙。通过聚酰胺薄板层析鉴定DNS-Gly-核苷腙,从而能测定寡核糖核苷酸3′端核苷。另外,运用β消去循环,对寡核糖核苷酸进行化学逐步降解,在此基础上结合上述萤光标记测定寡核糖核苷酸3′端技术,对化学合成片段UpCpCpA进行了顺序分析。片段用量为0.16A_(260)单位。这一方法较紫外吸收法灵敏,易在一般实验室中使用。     

核糖核酸一级结构微量分析方法的研究 Ⅲ.萤光标记法测定寡核糖核苷酸3′端及核苷酸顺序

本文报导了一种新的萤光试剂DNS-GIy-NHNH_2在寡核糖核苷酸一级结构分析中的应用。寡核糖核苷酸3′端经高碘酸氧化后能与萤光试剂DNS-Gly-NHNH_2反应,经红酵母RNase 酶解后得到DNS-Gly-核苷腙。通过聚酰胺薄板层析鉴定DNS-Gly-核苷腙,从而能测定寡核糖核苷酸3′端核苷。另外,运用β消去循环,对寡核糖核苷酸进行化学逐步降解,在此基础上结合上述萤光标记测定寡核糖核苷酸3′端技术,对化学合成片段UpCpCpA 进行了顺序分析。片段用量为0.16A~(260)单位。这一方法较紫外吸收法灵敏,易在一般实验室中使用。     

改良银染色法鉴定卡氏肺孢子虫的研究

本文采用碘酸钠作氧化剂对卡氏肺孢子虫的包囊进行银染色，并与铬酸氧化的结果作了比较。在同一批次小鼠肺涂片，氧化时间相同时，过碘酸钠氧化可显示较多的含括号状结构的包囊，这将利于临床实验室的鉴别诊断，实验结果表明过碘酸钠作氧化剂的银染色效果优于铬酸。     

名词解释

核苷、核苷酸碱基与脱氧核糖或核糖以糖苷键连接而成的糖苷叫做核苷。所含的糖若为脱氧核糖,所形成的核苷叫脱氧核糖核苷:所含的糖若为核糖。则所形成的核苷叫核糖核苷。碱基有多种,组成脱氧核糖核苷的碱基主要有腺嘌呤(A)、鸟嘌呤(G)、胸腺嘧啶(T)和胞嘧啶(C)四种:而组成核糖核苷的碱基主要也是四种,但它没有胸腺嘧啶(T),被尿嘧啶(U)所代替。组成核酸的碱基数量都是很大的,排列的顺序富有多样性。核替的糖上再连上一个磷酸,就成为核苷酸。很多核苷酸连接起来,就成为多核苷酸——核糖核酸(RNA)或脱氧核糖核酸(DNA)。     

核糖开关及其在抗菌药物方面的研究进展

核糖开关是一类与核酸、氨基酸、金属离子、糖类衍生物以及辅酶等特异性配体结合的RNA元件,它与配体结合后通过调控相应下游的基因表达起到控制细胞生命及活动的作用。目前核糖开关是基因调控方面的研究热点,应用于大量筛选工程菌株、构建新型生物传感器以及作为抗菌药作用的新靶点。综述了几种主要的核糖开关(如:嘌呤核糖开关、赖氨酸核糖开关、环二鸟苷酸核糖开关、glm S核糖开关、TPP核糖开关、FMN核糖开关等)在抗菌药物靶点方面的研究进展。     

过碘酸钠氧化辣根过氧化物酶(HRP)中的若干问题及高效果的标记方法

本文研究了过碘酸钠氧化HRP的某些条件。戊二醛和磷酸盐对酶有一定的影响,而低浓度甲醛和醋酸盐缓冲液(HAcB)则无明显影响。氧化的最适pH在5.6左右。过碘酸钠氧化酶的适宜浓度在0.06～0.015M之间。氧化时间为10～30分钟,过长则影响结合物效价。讨论了加入乙二醇的必要性。醛化的HRP在pH9左右与抗体结合作用的适宜时间为16～24小时,过长则影响酶与抗体的活性,过短则结合不够完全。封闭结合物上多余醛基的KBH_4适宜量为0.1～0.2mg/mg酶。本法标记抗体、抗原和葡萄球菌A蛋白的效果均较好,方法简易,标记效果取决于酶是否能与抗体和抗原相结合,以及标记过程中酶和抗体活性是否受影响。     

医药中间体L-核糖的生物制造研究进展

L-核糖(L-ribose)是自然界不存在的L-型稀有糖,L-核糖是多种核苷类似物药物的核心砌块,其衍生物2-脱氧-L-核糖也是昂贵的药物中间体;过去只能通过化学合成获得,近年来开始有酶法合成的报道。本文综述了L-核糖生物制备的三种关键酶-L-阿拉伯糖异构酶(L-AI)、甘露糖-6-磷酸异构酶(MPI)、以及L-核糖异构酶(L-RI)在制备L-核糖方面的研究进展,结合产品衍生物研发进行了总结,并展望了L-核糖在未来医药行业的技术需求。     

用过碘酸氧化试验鉴定单抗抗糖表位特性

过碘酸在酸性条件下能氧化糖蛋白中糖的连羟基而不改变多肽链结构。将这一特性与ELISA或免疫印迹试验结合起来建立了检测单抗是否抗糖表位的方法。     

核糖核酸一级结构微量分析方法的研究——Ⅳ.寡核糖核苷酸3′-端的显色标记微量测定法

本文报告用甲基橙为原料合成了甲基橙的两种衍生物:4-二甲氨基偶氮苯-4'-磺酰-甘氨酰肼(DABS-Gly-NHNH_2,Ⅰ)和4-二甲氨基偶氮苯-4'-磺酰肼(DABS-NHNH_2,Ⅱ),并用(Ⅰ)成功地标记了高碘酸氧化的核苷二醛。标记产物在聚酰胺薄板上分离得很好,其灵敏度达到10~(-9)～10~(-10)克分子,比紫外吸收法灵敏数十倍。我们用试剂(Ⅰ)标记测定了四种不同的寡核糖核苷酸的3'-端,用量为0.08～0.12A_(260)。     

二磷酸腺苷核糖多聚酶的研究进展

二磷酸腺苷核糖多聚酶[Poly（ADP-Ribose）Polymerase,PAPe]是一类具有重要生理功能的蛋白酶。PARP能催化二磷酸腺苷核糖多聚化反应。二磷酸腺苷核糖多聚化对DNA修复和基因组稳定性起着重要作用。但PARP的过激活与许多疾病的病理机制有关。介绍了PARP的结构和功能,PARP家族的同族体以及PARP在一些疾病病理机制中的作用。     

5—氟尿苷的微生物转化

5 氟尿苷 (简称ＦＵＲ)是抗肿瘤核苷药物脱氧氟尿苷 (Ｆｌｏｘｕｒｉｄｉｎｅ ,简称ＤＦＵＲ)的合成中间体。脱氧氟尿苷是一种抗代谢类抗肿瘤药 ,在体内可以部分转化为氟尿嘧啶 (简称ＦＵ) ,二者具有相似的作用途径和抗肿瘤谱。与ＦＵ相比 ,由于ＤＦＵＲ的抗肿瘤活性高且毒副反应小 ,主要用于治疗晚期结直肠癌和各种类型肝癌。在国内 ,采用化学法合成的ＤＦＵＲ业已进入临床研究阶段[1]采用化学合成法生产ＤＦＵＲ时 ,由于反应过程中需将碱基或核糖残基的部分基团进行保护 ,而且产物为多种核苷异构体和其它副产品的混合物 ,需要进一步分离 ,…     

核酸类化合物对C~(14)—甘氨酸参入大腸杆菌原生质体制剂的影响

用Lissapol处理的大腸杆菌原生貭体的制剂具有C~(14)-甘氨酸的参入活性,RNA有提高参入的能力,但不稳定;碱水解的RNA則有更显著的作用。四种2′,3′-核苷酸对甘氨酸参入都有刺激,一般以尿嘧啶核苷酸的效应为高,核苷的刺激作用較核苷酸为差,核糖无影响,碱基稍有抑制,用羧肽酶水解及2,4-二硝基氟苯处理标記的蛋白貭,証明C~(14)-甘氨酸参入到蛋白貭的肽鏈中。     

谷氨酰胺磷酸核糖焦磷酸转酰胺酶研究进展

谷氨酰胺磷酸核糖焦磷酸转酰胺酶是生物．体内嘌呤产物合成途径的关键酶,负责催化全合成途径的第一步反应。肌苷属于嘌呤核苷,是食品和医药行业广泛应用的重要产品。谷氨酰胺磷酸核糖焦磷酸转酰胺酶在肌苷的生物合成途径中起重要调节作用,对其深入研究将有助于提高肌苷的产量,对工业化生产有重大意义。本从谷氨酰胺磷酸核糖焦磷酸转酰胺酶的属性、功能、结构和基因表达与调控方面对其做了介绍,为肌苷产量的提高工作奠定了基础。     

过表达腺苷生物合成正相关基因GlPNP提高灵芝腺苷的含量

【背景】灵芝被纳入我国“药食同源”试点名单,腺苷作为其主要活性物质之一,在免疫调节、抗炎、抗癌等方面发挥着重要作用。【目的】调控腺苷生物合成关键酶基因的表达来提高灵芝腺苷产量。【方法】将不同培养时间阶段腺苷合成酶基因(包括5-氨基咪唑-4-甲酰胺核糖核苷酸甲酰转移酶GlATIC、嘌呤核苷磷酸化酶GlPNP、腺苷激酶GlADK)的表达量与腺苷含量相关联,筛选出与灵芝腺苷含量呈正相关的关键酶基因。克隆关键酶基因并在灵芝中过表达,探究关键酶基因过表达对灵芝腺苷积累的影响。【结果】GlPNP的表达与灵芝腺苷含量呈正相关。GlPNP的cDNA全长为969 bp,预测GlPNP蛋白的相对分子量为34.6 kDa,呈三聚体的四元结构。研究结果表明,过表达菌株中GlPNP的表达量在第4天比野生型菌株(WT)上调了2.9-3.9倍,与含空载体的菌株(CK)相比,腺苷含量分别提高了78%和63%。【结论】过表达嘌呤核苷磷酸化酶是提高灵芝腺苷产量的一种有效手段。     

过碘酸盐氧化法制备固相载体除抗非目的蛋白抗体

Sephacryl凝胶经过碘酸盐氧化将产生醛基 ,非目的蛋白通过氨基与醛基反应结合到凝胶上制备固相载体。装柱后 ,抗体经过长时间循环上样 ,抗非目的蛋白的抗体被吸收 ,抗体得到了纯化。用经本法处理过的抗体做免疫印迹 ,特异性大大提高。     

消化道组织块黏液细胞的组织化学染色

目的：探索中华蟾蜍、黑斑蛙消化道组织块黏液细胞的组织化学染色。方法：利用阿辛蓝-过碘酸Schiff（AB-PAS）反应,对消化道组织块黏液细胞进行染色和观察。结果：对消化道壁较薄的组织块（食管、小肠、大肠）,采用3％乙酸3min、1％阿尔新蓝30min、3％乙酸3min、3％过碘酸氧化10min、Schiff反应20min染色,即可达到良好染色效果;对消化道壁较厚的组织块（胃）,则应采用3％乙酸9min、1％阿尔新蓝70min、3％乙酸9min、3％过碘酸氧化30min、Schiff反应60min染色,将能达到良好染色效果。结论：经过染色可将黏液细胞分为四个类型：Ⅰ型红色,PAS染色阳性,AB染色阴性;Ⅱ型蓝色,PAS染色阴性,AB染色阳性;Ⅲ型紫红色,PAS染色强阳性,AB染色弱阳性;Ⅳ型蓝紫色,PAS染色弱阳性,AB染色强阳性。     

粘液糖蛋白去糖基化作用的研究进展

由于粘液糖蛋白中的寡糖侧链对其蛋白质多肽链的水解具有保护作用,为了研究粘液糖蛋白多肽链的结构与功能,必须进行去糖基化作用的处理。处理的方法主要有酶法和化学法。到目前为止,以碘酸三氯甲烷(TFMSA)预处理,再以高碘酸盐氧化,然后在碱性条件下进行β-消去的方法最为理想。     

辣根过氧化物酶标记葡萄球菌A蛋白的简易过碘酸钠法

辣根过氧化物酶(HRP)标记葡萄球菌A蛋白(SPA)的方法多为过碘酸钠法。1982年薛采芳等采用过碘酸钠改良法获得满意效果。我们依照Wilson等报道的HRP标记     

茶儿茶素氧化产物体外清除·OH自由基作用的研究

本文采用２－脱氧－Ｄ－核糖（ＤＲ）法产生．ＯＨ,测定了不同浓度的茶儿素氧化产物Ａ及Ｃ对．ＯＨ的清除作用。结果表明,在一定的浓度范围内,氧化产物Ａ及Ｃ均有很强的清除．ＯＨ的作用且最佳清除浓度为２００μｇ／ｍｌ。在茶多酚、氧化产物Ａ及Ｃ三种物质中,以产物Ｃ的清除作用最强,其ＩＣ５０值为７．３μｇ／ｍｌ,其次是Ａ,ＩＣ５０为１０．１μｇ／ｍｌ,最后是茶多酚,ＩＣ５０值为７０μｇ／ｍｌ。     

核糖核酸一级结构微量分析方法的研究——Ⅱ.萤光试剂及其核苷腙的一些性质

使用化学降解核苷腙的方法证明核苷二醛与DNS-Gly-NHNH_2的结合为1:1。观察了DNS-Gly-NHNH_2及其核苷腙的聚酰胺薄板层析及电泳行为;测定了在水、乙醇、二氧六环中的紫外吸收光谱与克分子消光系数以及萤光光谱和量子产率。DNS-Gly-NHNH_2及其核苷腙的萤光强度随溶剂极性降低而增大。在二氧六环中它们的量子产率为0.4左右。