应用脐带血清体外培养恶性疟原虫的研究

为寻找一种价廉、易得能代替正常成人血清体外培养疟原虫的代用品,本文参照Trager—Jensen蜡烛缸培养法,探讨了用新生儿脐带血清体外培养恶性疟原虫的效果,并与用正常成人血清培养进行了比较。实验结果表明脐带血清不仅能长期维持恶性疟原虫的体外生长,而且其培养效果优于成人血清(P<0.01),是体外培养疟原虫的良好血清来源。     

抚仙湖有机污染物化学背景值及人淋巴细胞体外致突变性评定

用ＸＡＤ－２树脂提取抚仙湖７个采样点的有机物质水样提取物,用气相色谱／质谱（ＧＣ／ＭＳ）进行分析,在每种水样品中发现有上百种有机污染物,提取物用培养的人淋巴细胞系姐妹染色单体交换（ＳＣＥ）试验作致突变潜力检查,结果显示,仅入湖口水样在高浓度组（０．０６２５Ｌ／ｍＬ）诱发ＳＣＥ明显增加。     

高能电子束超剂量照射与效应关系的探讨——人周血淋巴细胞核损伤指标的比较观察

为了探讨在大剂量辐射条件下建立生物量计的可能,本实验研究了在10MeV电子束照射后,人体外周血淋巴细胞各种核损伤指标的改变与剂量(0—40Gy)间的关系,结果表明,随着照射剂量的增大,复合核损伤指标——核异常率、微核率、核固缩率和核裂解率亦随之上升,在0—20Gy范围内,与剂量呈线性关系,相关系数显著性检验P<0.01的核损伤指标是:核异常率、微核率。P<0.05的是核变形率;在0—40Gy范围内,与之呈线性关系,P<0.01的仅有核固缩率。和染色体畸变分析相比,核异常检测方法简便,可反映超剂鞋(如>10Gy)辐射的损伤,值得引起研究者的注意。     

乳猪肝细胞短期培养后的低温保存

本文对乳猪肝细胞短期培养后冻存法和直接冻存法进行比较。采用改良原位两步胶原酶灌注法分离乳猪肝细胞,将肝细胞接种到含10％DMSO、激素、生长因子和10％NBS的RPM1 1640培养基中,用阶段性冻存法保存肝细胞,分别对直接冻存和培养后冻存10天、20天复苏的肝细胞进行培养,动态观察其活率和功能。研究结果表明各组复苏后的肝细胞均保持较高的活率;短期培养后冻存组肝细胞活率、G-6-Pase活性、白蛋白和葡萄糖合成功能及安定转化能力均较直接冻存组为高;LDH活性低于直接冻存组;冻存时间的长短对其白蛋白、尿素和葡萄糖合成功能有一定影响。因此,短期培养后冻存法较直接冻存法为好。     

混合淋巴细胞培养法用于小鼠遗传监测的初步研究

如果将两个有遗传差别个体的淋巴细胞进行混合培养(混合淋巴细胞培养,MLC),则其中一定比例的淋巴细胞会发生一系列改变,包括大分子物质合成速率增加,发生淋巴母细胞转化和增殖等,即混合淋巴细胞反应(MLR)。MLR受主要组织相容性复合体(MHC)的控制,而MLR是MHC可以识别的特征,其反应符合移植规律。故可将MLC用于实验动物遗传监测。本文旨在探讨MLC用于实验小鼠遗传监测的实际问题。1 材料和方法     

人—小鼠淋巴细胞杂交瘤中抗体分泌和人染色体丢失的关系

本文应用G带,G11和C带染色体制片的方法分析16个人一小鼠杂交瘤抗体分泌和人染色体丢失的关系。结果表明抗体阳性的9株杂交瘤保留人的染色体较多,7/9在13条以上,阴性的7株中4/7在5条以下。Ig基因相关的三对人染色体中,14号(重链基因相关)最稳定,22号(入链基因相关)其次,2号(K链基因相关)最易丢失。9株以SHM-D33为融合亲本瘤系的杂交瘤,没有1株保留第2号染色体,而用RF瘤系建立的4株杂交瘤中有3株拥有2号染色体,提示2号的丢失可能也与瘤系相关。     

体外培养的牛耳成纤维细胞的细胞周期研究

通过细胞体外培养,对牛耳成纤维细胞的周期分布进行了研究。不同代数的细胞在生长至70-85％汇合和血清饥饿72h两种状态的细胞周期分布无显著差异。对于体外培养的第8代细胞,生长至50-60％、70-85％和完全汇合时,细胞周期分布存在显著差异;而培养时间对血清饥饿培养和正常培养至充分汇合时的细胞周期分布无显著影响。结果表明,体外培养代数及培养方法不会明显影响细胞周期的分布,但同代细胞因处于不同生长阶段细胞周期分布会存在显著差异。     

人外周血淋巴细胞酶超微结构定位与活性研究

应用电镜酶细胞化学方法研究了人外周血淋巴细胞ＡＴＰ酶、Ｇ６Ｐ酶、５′ＮＤ酶的超微结构定位与活性。结果：１ＡＴＰ酶主要定位在淋巴细胞膜下方,在内质网及线粒体等膜相结构也见到此酶的分布。Ｇ６Ｐ酶主要定位在内质网、线粒体等膜相结构。５′ＮＤ酶主要定位在细胞膜外表面。三种酶定位准确,颗粒清晰。２此结果与我们对人体淋巴结淋巴细胞酶超微结构定位结果相同。结果提示应用电镜酶细胞化学方法可以检测人外周血淋巴细胞酶活性变化,对于判定免疫细胞功能状态,具有一定意义。     

人的外周血淋巴细胞培养及染色体制作技术

从肘静脉采血于含有肝素的一次性注射器中,采用RPMI1640全培养基进行体外淋巴细胞培养。通过对采血后细胞培养时间、秋水仙素浓度及加入时间、低渗时间及培养温度等条件的模索．建立了较成熟的淋巴细胞体外培养方法及染色体制作技术。     

An Improved Culture System of Mouse Peripheral Blood Lymphocytes for Analysis of Radiation-Induced Chromosome Aberrations

There is an incentive to develop a culture system of mouse peripheral blood lymphocytes (PBLs) to serve as models for studying genotoxic effects in humans exposed to mutagens, including ionizing radiation. However, many past approaches have been laborious, complex and only partly reproducible. In the present study, we established an improved culture system of mouse PBLs by removing blood and/or plasma, which was found to inhibit in vitro mitotic stimulation or proceeding cell cycles of lymphocytes. We compared the reactions of isolated PBLs to mitogens between the classical method and the present improved one. Then, we applied this method to the cytogenetic analysis using chemically induced premature chromosome condensation (PCC) as well as the conventional analysis, and demonstrated that the frequency of excess fragments observed in PCC cells might be useful to quantify the radiation-induced damages on chromosomes.     

人外周血淋巴细胞凋亡与年龄及p21~(WAF1)的关系

 分别从老年人和新生儿外周血中分离淋巴细胞 ,用形态观察、DNA断裂电泳图谱、流式细胞仪分析凋亡峰等手段检测其在体外培养过程中发生凋亡的情况 .结果表明 ,不论是自发凋亡还是用1 0 mmol/L的丁酸钠诱导其凋亡 ,老年人淋巴细胞的凋亡率均高于新生儿组 .进一步检测淋巴细胞凋亡时 p2 1 WAF1的表达变化 ,结果表明老年人淋巴细胞 p2 1 WAF1的下调幅度明显大于新生儿组 .提示老年人淋巴细胞凋亡率高与其 p2 1 WAF1表达容易下调有关 .     

流行性出血热病毒对健康人外周淋巴细胞和大白鼠骨髓细胞染色体影响的研究

用流行性出血热病毒(EHFV)A9株,滴度为TCID_(50)10~(-5)/0.1ml,加入10名健康人外周血,作淋巴细胞姊妹染色单体互换(SCE)和染色体畸变的检测。每份血分对照组(不加病毒悬液)和A、B、C实验组(根据加不同病毒量而分)。其结果:一、SCE频率,实验组A(8.9±0.19)、实验组B(9.9±0.2)、实验组C(11.6±0.22)与对照组(6.57±0.15)比较,A、B、C、实验组均分别高于对照组,P<0.01,差异有高度显著性,A、B、C三个实验组比较,P<0.01,差异有高度显著性。二、染色体畸变,A、B、C三个实验组分别与对照组比较,P>0.05,差异均无显著性。用EHFV HA 108株,ID_(50)10~(-6)/0.02ml接种2—5日龄大白鼠脑内,15天后颈动脉放血处死,取骨髓细胞培养,另取幼大白鼠骨髓细胞培养作对照,检测SCE和染色体畸变。结果:一、SCE频率,实验组(9.8±0.35)高于对照组(5.4±0.19),P<0.01,差异有高度显著性。二、染色体畸变,实验组与对照组比较,P>0.05,差异无显著性。以上两个实验结果表明,EHFV作用于细胞,无论是在机体或试管内,都引起SCE频率增高,即EHFV促使DNA产生初级损伤,但不致染色体畸变。     

Genotoxic Effects of Amplitude-Modulated Microwaves on Human Lymphocytes Exposed in Vitro under Controlled Conditions

Peripheral human blood from 23 healthy donors aged between 23 and 95 years was exposed to continuous wave (CW) or 50 Hz amplitude modulated (AM) microwave radiation and was cultured for 72 h. Other exposure parameters were: frequency 9 GHz, specific absorption rate (SAR) 90 mW/g, exposure duration 10 min. The possible genotoxic effect was evaluated by means of cytokinesis-block micronucleus method. A significant (p < 0.05) increase in micronuclei was found following AM microwave exposure.     

人外周血淋巴细胞核心钟基因Clock和Bmal1的昼夜节律性表达

探讨自然光制下正常成年人外周血淋巴细胞钟基因Clock和Bmal1的昼夜节律性表达。用实时定量RT-PCR方法,测定不同昼夜时点(ZT)受试者外周血淋巴细胞总RNA中核心钟基因Clock和Bmal1的mRNA表达量,通过余弦法和Clock Lab软件获取节律参数,并经振幅检验分析是否存在昼夜节律。结果发现正常成年人外周血淋巴细胞钟基因Clock和Bmal1的mRNA表达呈昼夜节律性振荡(P0.05),Clock的峰时和谷时分别位于ZT13和ZT1,Bmal1的峰时和谷时分别位于ZT12和ZT24;两个基因在所检测的各个昼夜时点中表达水平均有明显差异(P0.05),Bmal1的表达水平较Clock降低;二者表达的峰值相位、振幅、峰时和谷时相一致(P0.05),但Bmal1转录的中值水平以及峰时mRNA水平和谷时mRNA水平降低(P0.05)。提示正常成年人外周血淋巴细胞钟基因Clock和Bmal1的表达存在同步化的昼夜节律性转录特征。     

半导体激光血管内照射对人体外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞的调节作用

本文报道了半导体激光血管内照射对人体外周血Ｔ淋巴细胞亚群及ＮＫ细胞的免疫调节作用。实验结果提示：在２３例经６５０ｎｍ．５ｍＷ的半导体激光血管内照射治疗一次,五次和十次的患者中,ＣＤ＋３细胞亚群的百分比与照射前（６３．６６％）比较,分别提高到６５．８６％,６９．９４％,７５．０４％。ＣＤ＋４Ｔ辅助细胞在第十次治疗后也有所增加。除此之外,半导体激光血管内照射对ＮＫ细胞比例及ＣＤ＋４／ＣＤ＋８比值具有双向调控作用,即偏离（即高于或低于）正常值的患者经照射后恢复到正常水平。这种双向调控作用将对临床治疗更有指导意义。     

HIV-1 Tat蛋白通过增加线粒体ROS产生诱导人外周血B淋巴细胞凋亡

目的:探讨HIV-1 Tat蛋白对人外周血B淋巴细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法:采用流式细胞分选术分离HIV阳性患者外周血单核细胞的B淋巴细胞,分别转染pTat或pcDNA3.1各10μg(分别为pTat组与pcDNA3.1组),采用MTT实验检测细胞胞增殖情况,流式细胞术检测凋亡情况,DCHF-DA测定ROS水平,彗星试验检测细胞DNA损伤情况。结果:pTat组转染24h、48h的细胞增殖抑制率、细胞凋亡率及线粒体ROS水平均显著高于pcDNA3.1组(P0.05)。pcDNA3.1组细胞的DNA大部分呈圆形荧光团,无拖尾现象;pTat组的细胞DNA拖尾现象,呈现典型彗星图像。与pcDNA3.1组相比,pTat组细胞DNA尾长、尾部DNA比例均显著增加(P 0.05)。结论:HIV-1 Tat蛋白可能通过增加线粒体ROS产生,诱导DNA损伤,进而抑制人外周血B淋巴细胞增殖并促进其凋亡。     

Transport of the Immunosuppressant 15-Deoxyspergualin in Human Peripheral Blood Lymphocytes

15-deoxyspergualin (DSG) is a potent immunosuppressive compound currently in clinical trials. In this study, we have characterized the uptake and intracellular localization of DSG in human peripheral blood lymphocytes (PBL′s). DSG is transported into human PBL′s and reaches an estimated maximum concentration of approximately 500μM in 6 hours. The majority of the [³H]-DSG remains in the cytoplasm of cells and that which is associated with the nucleus is only loosely associated. DSG was transported by HeLa cells, as well, suggesting uptake is not specific for hematopoietic cells. Positively charged amino acids and polyamines, which are structurally similar to DSG, were unable to compete for DSG transport suggesting that DSG is transported into cells via a pathway distinct from amino acids or polyamines.     

Derivation of Induced Pluripotent Stem Cells from Human Peripheral Blood T Lymphocytes

Induced pluripotent stem cells (iPSCs) hold enormous potential for the development of personalized in vitro disease models, genomic health analyses, and autologous cell therapy. Here we describe the generation of T lymphocyte-derived iPSCs from small, clinically advantageous volumes of non-mobilized peripheral blood. These T-cell derived iPSCs (“TiPS”) retain a normal karyotype and genetic identity to the donor. They share common characteristics with human embryonic stem cells (hESCs) with respect to morphology, pluripotency-associated marker expression and capacity to generate neurons, cardiomyocytes, and hematopoietic progenitor cells. Additionally, they retain their characteristic T-cell receptor (TCR) gene rearrangements, a property which could be exploited for iPSC clone tracking and T-cell development studies. Reprogramming T-cells procured in a minimally invasive manner can be used to characterize and expand donor specific iPSCs, and control their differentiation into specific lineages.     

人外周血纤维细胞的分离、培养方法

目的:探索简便易行的外周血纤维细胞体外分离、培养方法极其生物学特征与功能.方法:采用Ficoll密度梯度离心分离法分离成人外周血,所获得的白细胞在一定条件要求下体外培养,采用流式细胞技术、细胞免疫荧光染色等对贴壁生长的成纤维样细胞进行鉴定,在扫描电镜下进一步观察其形态结构.结果:培养至第14天时,外周血纤维细胞开始分化成熟.血液来源的取材、首次换液的时间、细胞的接种密度、血清浓度等多种因素均会对外周血纤维细胞的培养造成影响.免疫荧光染色结果显示培养至12天时CD34和COL Ⅰ均为强阳性表达,继续培养至28天时,血液来源的细胞表面抗原CD34发生明显丢失,免疫荧光染色几乎不能显色;相反COL Ⅰ持续表达阳性,取培养14天的贴壁细胞,经流式细胞仪分析,Col Ⅰ+细胞为81.6％,显示PBFCs不断向成纤维细胞分化的特性.结论:采用密度梯度离心法配合适当的培养条件,成人外周血中存在的前体细胞经体外分离、培养可分化为外用血纤维细胞,并保持其生物学特性.