真菌异核体不亲和性机理研究进展

异核体不亲和性是普遍存在于真菌中的一种生物学现象,由特定的不亲和性位点所控制。从真菌异核体不亲和性分子机理的研究进展以及不亲和融合细胞死亡过程和相关蛋白的关系展开论述。对真菌异核体不亲和性机理的深入研究,将有助于揭示生物中非己识别系统的演化规律,并为解决原生质体融合子的不稳定性探索出有效的方法和途径。     

利用28S rDNAI型内含子研究琅琊山球孢白僵菌菌株的遗传多样性

通过四对引物对89株采自琅琊山的球孢白僵菌菌株进行PCR扩增,得到17类不同的单倍型,其中以BBBA型最多,占39．33％,而BABB型等其他9种单倍型较少,各占1．12％。该地区单倍型种类占已发现类型的57．7％,这说明在固定时间内同一地区的菌株也有较为丰富菌株类型,种群遗传结构是多样化的。具有较广寄主谱的BBBA型菌株是该地区的优势菌株,可作为生防菌株的重点筛选对象。     

利用28S rDNA Ⅰ型内含子研究琅琊山球孢白僵菌菌株的遗传多样性

通过四对引物对89株采自琅琊山的球孢白僵菌菌株进行PCR扩增,得到17类不同的单倍型,其中以BBBA型最多,占39.33%,而BABB型等其他9种单倍型较少,各占1.12%。该地区单倍型种类占已发现类型的57.7%,这说明在固定时间内同一地区的菌株也有较为丰富菌株类型,种群遗传结构是多样化的。具有较广寄主谱的BBBA型菌株是该地区的优势菌株,可作为生防菌株的重点筛选对象。     

棉花枯萎病菌异核体不同核型分离子表观特性及其核DNA的RAPD分析

切割野生型棉花枯萎病菌Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｉｒｕｍ ｆ．ｓｐ．ｖａｓｉｎｆｅｃｔｕｍ菌落的菌丝尖端,得到菌株Ａｇ１４９,该菌株是一个异核体,其菌落出现明显角变,自角变处经单孢分离和继代培养,得到三种表观性状稳定的分离了：Ａｇ１４９－Ⅰ、Ａｇ１４９－Ⅱ和Ａｇ１４９－Ⅲ。它们在色素产生、菌落质地、孢子产量以及致病性上存在明显差异,但对这三种核型分离子核ＤＮＡ进行ＲＡＰＤ分析,未发现明显差异。     

棉枯萎病菌异核体及其不同表型分离子在基因转录水平上的差异

采用银染mRNA差异显示技术,研究了棉花枯萎病菌异核体菌株(Ag149)及其两个不同表型分离子(Ag149-Ⅰ和Ag149-Ⅲ)之间差异表达的基因,观察到在300～700bp之间出现了19个差异条带,经反向RNA印迹,证实其中2条差异带为阳性：编号为C6的差异条带在Ag149和Ag149-Ⅰ菌株中呈高表达,而编号为G5的差异条带在菌株Ag149和Ag149-Ⅲ中呈高表达。这两条差异片段经测序后在GenBank中分别进行同源比较,发现由C6片段编码的氨基酸序列与多种生物(包括动物、植物和微生物)NADH脱氢酶的第6个亚基有不同程度的同源性(30％～70％);而编码G5片段的氨基酸序列与龟裂链霉菌(Streptomyces rimosus)的OtrB(tetracycline efflux protein)蛋白有35％的同源性。首次证明在异核体菌株及其不同表型分离子之间存在基因转录水平差异,为深入研究丝状真菌异核体形成的分子遗传机制提供了线索。     

球孢白僵菌种群野生菌株异核现象的分子验证

球孢白僵菌28S rRNA基因D11域由于一内含子的存在与否,引起这一区域的扩增产物有两种片段类型（约520bp及120bp),将此作为分子标记分析了球孢白僵菌的117个菌株,发现17％菌株的扩增产物为双片段类型,即为异核体,异核体在不同种群中的分布频率因地理生态条件而异,单孢分离分析表明,异核体的分离频率约为35％,RAPD检测结果说明异核体在准性循环中发生了不同程度的遗传交换及遗传重组,球孢白僵菌异核体在继代培养中极不稳定。     

稻恶苗菌异核体三种核型核DNA的RAPD分析

利用RAPD技术,对稻恶苗菌TJ47-26异核体的紫、红、白三种核型(同核体)核DNA进行比较,用80种10bp长的随机引物进行DNA扩增,共检测了基因组中近400个位点,未发现三种核型的基因组间有明显差异,表明紫、红、白三种核型的DNA碱基序列高度相似。由此推测TJ47-26异核体的三种不同核型是来自同一个核的变异体。     

植物的准性生殖

随着测试手段的提高和电镜的应用,在近几十年中,才逐渐在一些过去认为没有有性生殖的植物中发现了一种类似于有性生殖的生殖方式,并把它称之为准性生殖。准性生殖的发现,有着重要的意义,特别在培育优良新品种方面开辟了一个广阔的新途径。由于准性生殖是逐渐被发现的,所以对其含义的解释,以及在哪些植物中有准性生殖过程等的认识很不一致,甚至造成一些混乱。例如,有些人只把在真菌的半知菌纲中发现体细胞重组的过程称为准性生殖,但现在真菌的子囊菌纲和担子菌纲中也发现有体细胞重组的过程。又如在近20年来,人们在原核生物中也发现有很多种类有进行遗     

被子植物配子-体细胞杂交研究的进展与展望

Pental和Power于1985年提出用植物的单倍体原生质体,与二倍体体细胞原生质体融合产生三倍体植株,以用于限量基因转移研究的设想"'。次年粘毛烟草（Nicotianaglutinosa川、抱子四分体原生质体与烟草（N．tatacum）的体细胞原生质体融合,就成功地得到了三倍体杂种植株,并被称     

大丽轮枝菌异核体及其后代的形态与致病力变异

以硝酸盐利用缺陷型突变（ｎｉｔ突变）和抗杀菌剂突变两种遗传标记,对大丽轮枝菌（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍｄａｈｌｉａｅ）异核体后代的形态和致病力进行研究,结果表明,菌核型菌株与菌丝型菌株经菌丝融合形成异核体后,菌丝型菌株能恢复形成微菌核,其后代单孢菌落形成微菌核的数量明显低于菌核型亲本,且遗传性状不稳定;随着转代次数的增多,微菌核形成能力的丧失较菌核型亲本菌株快,异核体后代对棉苗的致病力变化较大,一     

棉花枯萎病菌异核体不同核型分离子表观特性及其核DNA的RAPD分析

切割野生型棉花枯萎病菌Fusariumoxysporumf.sp.vasinfectum菌落的菌丝尖端,得到菌株Ag149,该菌株是一个异核体,其菌落出现明显角变,自角变处经单孢分离和继代培养,得到三种表观性状稳定的分离子Ag149-I、Ag149-II和Ag149-III。它们在色素产生、菌落质地、孢子产量以及致病性上存在明显差异,但对这三种核型分离子核DNA进行RAPD分析,未发现明显差异。     

棉花枯萎病菌异核体不同核型分离子表观特性及其核DNA的RAPD分析*

切割野生型棉花枯萎病菌Fusarium oxysporum f. sp. vasinfectum菌落的菌丝尖端,得到菌株Ag149,该菌株是一个异核体,其菌落出现明显角变,自角变处经单孢分离和继代培养,得到三种表观性状稳定的分离子：Ag149-I、Ag149-II和Ag149-III。它们在色素产生、菌落质地、孢子产量以及致病性上存在明显差异,但对这三种核型分离子核DNA进行RAPD分析,未发现明显差异。     

金针菇生活史各阶段核相研究

对金针菇Flammulina velutipes生活史各阶段的菌丝体、子实体、担孢子等进行荧光显微观察。结果表明,金针菇单个担孢子发育而来的同核体菌丝为单核,无锁状联合,部分单孢菌株能形成同核子实体,同核子实体的原担子中只有1个核,该核在担子中进行一次有丝分裂形成纵向排列的2个子核,担子发育停止,同核子实体不产生担孢子;具有可亲和交配型的两个同核体菌丝经过质配形成异核体菌丝,异核体菌丝双核,具有锁状联合,能形成异核子实体,异核子实体的原担子中具有2个核,这2个核经过核配融合为1个二倍核,二倍核在担子中进行减数分裂形成4个单倍子核,4个子核分别进入4个担孢子中,随着担孢子继续发育,其中的单核再进行一次有丝分裂,成熟担孢子为双核,但这2个核是同质的。单核菌丝和双核菌丝都能产生粉孢子,且产生的粉孢子均为单核。     

大丽轮枝菌微菌核形成能力的遗传*

带有硝酸盐利用缺陷型遗传标记的大丽轮技菌Verticilliumdahliae黑色菌核型和白色菌丝型菌株在25℃下配对培养,形成野生型融合菌落带,对融合带的分生孢子后代进行遗传分析的结果表明,融合带中的异核体表现不稳定,分布不均匀。微菌核遗传因子可随亲本细胞质在异核体中的运动和交换而发生迁移。     

米曲霉原生质体融合及杂合二倍体的形成

采用混合酶液处理纤维素酶高产苗株３０４２_Ｎ－２（天冬酰胺缺陷型“Ａｓｎ^－”）及蛋白酶高产菌株３０４２_Ｎ－１９（蛋氨酸缺陷型“Ｍｅｔ^－”）的营养菌丝,获得原生质体,以ＰＥＧ为助融剂进行融合处理,成功地获得了米曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｏｒｙｚａｅ）原生质体的营养互补融合。将异核体菌落的菌丝转接到合有０．１％樟脑的新鲜ＭＭ上,２５℃诱导培养７─１５天,挑取绿色角变菌落的孢子,将其转接到ＭＭ上能迅速生长,经孢     

球孢白僵菌混菌培养的遗传学分析

放线酮抗性及34℃耐受性不同的球孢白僵菌两营养亲和单孢株经混合培养,能够形成异核体。在分生孢子形成的单倍化过程中,异核体中的染色体或其片段发生连续丢失,至少经4代准性循环,遗传性状才会趋于相对稳定。遗传标记及RAPD分析表明,异核体中染色体的丢失并非随机的,重组株的遗传性状表现为倾向选择,即子代主要只表现为某一母株的遗传性状,另一亲本型性状被完全抑制或其遗传物质被丢失。混合比例不同、培养介质不同可影响准性生殖过程及倾向选择频率。混菌培养有利于优良性状的保持。     

细脚拟青霉不同菌株间的菌丝联结现象观察及其毒力测定

用 Giemsa 染色观察了细脚拟青霉(Paecilomyces tenuipes)803和1401菌株间的菌丝联结现象,观察了菌丝、孢子的细胞核数目。孢子均是单核,菌丝细胞有1—2个核,多数为单核,菌丝尖端有1—6个核。毒力测定结果表明:能形成异核体的亲和单孢子菌株组合803-17和1401-9、803-3和1401-8的混合培养物毒力与未经培养的相同菌株组合的菌丝体混合物毒力显著不同。在讨论申提出这种差异的原因是:在 Sm 液体培养中,混合接种803-17和1401-9、803-3和1410-8,经11天的混合培养后,混合培养物中形成了与核体亲本菌丝(803-17、1401-9、803-3、1401-8)毒力显著不同的异核菌丝体(803-17×1401-9)、(803-3×1401-8)。     

大丽轮枝菌微菌核形成能力的遗传

带有硝酸盐利用缺陷型遗传标记的大丽轮技菌Verticilliumdahliae黑色菌核型和白色菌丝型菌株在25℃下配对培养,形成野生型融合菌落带,对融合带的分生孢子后代进行遗传分析的结果表明,融合带中的异核体表现不稳定,分布不均匀。微菌核遗传因子可随亲本细胞质在异核体中的运动和交换而发生迁移。     

基于担孢子形成过程四分体随机分离规律揭示草菇的有性生活史

本研究观察了草菇担子上着生担孢子的类型、担孢子细胞核数量,扩增了单孢菌株交配型A因子特异序列,基于减数分裂后四分体随机分离进入担孢子的遗传规律,分析了异核担孢子和同核(或单核)担孢子的比例。研究结果表明,草菇担孢子中异核担孢子的比例平均为7.14%,同核或单核担孢子的比例平均为92.86%。单核或同核的担孢子萌发后需要质配形成异核体才能完成有性生殖,交配方式类似异宗配合;异核担孢子萌发直接形成异核菌丝,其有性生殖类似同宗配合。     

球孢白僵菌种群野生菌株异核现象的分子验证*

球孢白僵菌28S rRNA基因D11域由于一内含子的存在与否,引起这一区域的扩增产物有两种片段类型(约520bp及120bp),将此作为分子标记分析了球孢白僵菌的117个菌株,发现17%菌株的扩增产物为双片段类型,即为异核体。异核体在不同种群中的分布频率因地理生态条件而异。单孢分离分析表明,异核体的分离频率约为35%。RAPD检测结果说明异核体在准性循环中发生了不同程度的遗传交换及遗传重组。球孢白僵菌异核体在继代培养中极不稳定。