在烫伤条件下VEGF对大鼠皮肤eNOS基因表达的影响

目的:探讨大鼠烫伤愈合过程中VEGF对皮肤组织eNOS基因表达的影响。方法:采用了大鼠深II度烫伤模型,分别以VEGF和阿西替尼(VEGF抑制剂)干预,观察大鼠烫伤后愈合过程的组织学变化,PCR检测创面eNOS基因的表达。结果:肉眼观察VEGF组大鼠创面最早愈合,对照组大鼠愈合速度其次,阿西替尼组创面愈合最晚;HE染色结果显示伤后第2、8、21天VEGF组炎性细胞浸润程度、新生毛细血管数量均高于对照组和阿西替尼组,PCR结果显示烫伤后第2、8天VEGF组的eNOS基因的表达明显上调,且同时间点与对照组比较有统计学意义(P0.05)。结论:VEGF可诱导烫伤创面eNOS基因的表达,增加血管生成重要因子NO的生成,有利于创面愈合。     

清得佳凝胶治疗烧伤创面的生物学作用

目的探讨清得佳凝胶治疗烧伤创面的效果及其意义。方法采用家兔皮肤创伤模型,将每只家兔的背部烧伤区域用2种不同颜色的记号笔分成二组:A组(n=9):为实验组(6个部位):常规方法清洁、消毒创口,使用清得佳凝胶涂抹;B组(n=9):为对照组(6个部位):使用常规的无菌敷料覆盖包扎创口。实验于第3、5、7、9天分别取各组皮肤组织进行切片,作组织病理学及免疫组织化学观察。结果1.HE观察结果:烧伤后第3天,A组与B组皮肤烧伤创面结构变化不明显;烧伤后第5天,A组表皮细胞变性坏死程度减轻,成纤维细胞增生,水肿减轻,而B组表皮细胞变性坏死减轻程度不明显,结缔组织胶原纤维变性坏死程度没有得到明显的改善;烧伤后第7天,A组表皮细胞生长良好,真皮组织水肿基本消失;而B组表皮细胞变性坏死程度开始出现减轻,可见部分上皮增生;烧伤后第9天,A组上皮及结缔组织结构基本接近正常,创面愈合情况较好。而B组以上结构出现改变,但愈合状况不是很理想,真皮组织轻、中度水肿,有少量的炎性细胞浸润。2.转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)的表达:烧伤后第3天和第5天,A组成纤维细胞胞浆中可见一些棕黄色颗粒,TGF-β1表达较强;B组成纤维细胞胞浆中未见或少见棕黄色颗粒,TGF-β1无表达或表达很弱。烧伤后第7天和第9天,A组成纤维细胞胞浆中可见密集分布的棕黄色颗粒,TGF-β1表达强;B组成纤维细胞胞浆中可见少量的棕黄色颗粒,TGF-β1表达弱。结论清得佳凝胶是一种烧伤创面良好的外用药,能清除创面坏死组织,有利于烧伤创面愈合。     

rh-GH在促进大鼠创面愈合中的作用研究

目的:通过在大鼠背部创面周围局部注射rh-GH(重组人生长激素,Recombinant Human Growth Hormone)来调控创面局部GH(生长激素,Growth Factor)水平,观察GH在创面愈合中的作用,并对其可能机制进行进一步研究。方法:在SD大鼠背部制作创面,创周定期注射不同浓度rh-GH,观察并分析创面愈合速度差异;选取rh-GH的最适浓度进行创周注射并定期取材,以Western-Blot检测创周组织中GH蛋白水平,并以RT-PCR检测创周组织中EGF(表皮生长因子,Epidermal Growth Factor)、FGF(成纤维细胞生长因子,Fibroblast Growth Factor)、VEGF(血管内皮细胞生长因子,Vascular Endothelial Growth Factor)的表达变化。结果:三个注射不同剂量rh-Gh的实验组大鼠创面平均愈合时间由快至慢依次为16.5±1.5天、17.1±2.9天、18.5±1.5天,与注射生理盐水的对照组平均愈合时间21.7±2.3天相比均明显增快,差异有统计学意义(P0.05)。创缘组织中GH的Western-Blot结果显示对照组GH水平在创面形成初期升高,但伤后4天开始GH表达水平即逐渐下降,而rh-GH注射组的GH水平在创面形成后逐渐升高,并维持GH在高表达水平。检测创周组织中EGF、FGF、VEGF的RNA转录水平,PCR结果显示实验组各生长因子的基因转录水平在伤后2天起即明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:1.创伤初期创面周围组织中GH表达水平呈现一过性升高然后逐渐下降的过程;2.创面周围注射rh-GH可以提高组织中GH水平,并减少创面愈合时间;3.GH可以提高皮肤组织中EGF、FGF、VEGF水平,间接促进创面上皮化,加快创面愈合。     

清肛洗剂治疗湿热下注型低位单纯性肛瘘术后临床观察

目的观察清肛洗剂促进低位单纯性肛瘘术后创面愈合的临床疗效。方法将我院收治的低位单纯性肛瘘患者100例,按随机数字表法分为治疗组50例和对照组50例,两组患者均行肛瘘切除术。治疗组患者于术后第2天开始便后用清肛洗剂熏洗坐浴,对照组患者于术后第2天开始用1∶5000高锰酸钾液熏洗坐浴,分别记录术后第1、3、7、10天两组患者的创面疼痛、创面渗液积分情况,术后第14、21天统计创面愈合率及术后创面愈合时间。结果术后第3、7、10天,两组患者的创面疼痛、创面渗液积分比较,差异均有显著统计学意义(P0.05);术后第14、21天,两组创面愈合率比较,差异有显著统计学意义(P0.05);用药后第28天,两组治愈率比较,差异有显著统计学意义(P0.05)。两组创面愈合时间比较,差异有显著统计学意义(P0.05)。结论肛瘘术后应用清肛洗剂熏洗坐浴能有效减轻创面疼痛,减少渗液,促进肉芽组织生长,加快创面愈合。     

联合应用NGF 和胰岛素对糖尿病大鼠烫伤创面表皮干细胞的影响

目的:通过局部联合应用神经生长因子和胰岛素对糖尿病大鼠深II度烫伤创面表皮干细胞标记物β1整合素和角蛋白19(K19)表达的影响,探讨神经生长因子和胰岛素联合应用于糖尿病烫伤创面治疗后对创面愈合的影响。方法:雄性wistar大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病模型60只,1月后在大鼠背部造成深II度烫伤。将大鼠随机分为糖尿病对照组(B)、胰岛素治疗组(C)、神经生长因子治疗组(D)、神经生长因子联合胰岛素治疗组(E),每组15只。另取15只正常雄性wistar大鼠作为正常对照组(A)。观察伤后3、7、11、15、21 d各组创面愈合情况,检测创面β1整合素和角蛋白19(K19)的表达并计算创面愈合率。结果:E组创面愈合率自第7天起较A、B、C、D组增加,为[(25.33±2.32)%,(P<0.05)];A、C、D组创面愈合率较B组增加分别为[(22.51±1.78)%,(16.68±1.95)%,(18.29±1.70)%,(P<0.05)]。E组整合素β1和角蛋白19(K19)表达自伤后第7至21天各时相点显著增加,(P<0.05)。结论:糖尿病大鼠深II度烫伤创面局部联合应用神经生长因子和胰岛素可促进表皮干细胞的增殖与分化从而加速创面的愈合。     

Cu(C6H9N3O2)2Cl2对小麦的生态毒理效应

以冬小麦为实验材料,比较研究了(1)不同浓度配合物对小麦生长的影响;(2)相同浓度的CuC l2、配体C6H9N3O2和配合物Cu(C6H9N3O2)2C l2对冬小麦种子萌发、苗期生长及其保护酶活性的影响。结果表明:与对照相比,(1)不同浓度新配合物对小麦生长具有不同程度的抑制作用,随着浓度的增高抑制作用逐渐增大;(2)CuC l2、配合物Cu(C6H9N3O2)2C l2对小麦种子总淀粉酶活性、蛋白酶活性、萌发率、生长势、根长、株高、总生物量均具有显著的抑制作用,配合物Cu(C6H9N3O2)2C l2的抑制作用小于CuC l2,而配体C6H9N3O2对上述生物学参数具有促进作用;(3)CuC l2、配合物Cu(C6H9N3O2)2C l2处理引起膜脂过氧化,显著的提高了幼苗的M DA浓度,导致SOD、POD、CAT活性降低,CuC l2的抑制作用大于配合物Cu(C6H9N3O2)2C l2,而配体C6H9N3O2处理对SOD、POD、CAT活性的提高有促进作用。上述结果说明C6H9N3O2对CuC l2生理胁迫具有保护作用,结合态的Cu2 (配合物Cu(C6H9N3O2)2C l2)的毒性显著的降低。在此基础上探讨了配合物抑制小麦生长发育的生物学机制。     

微生物谷氨酰胺转胺酶对大鼠创伤愈合作用的实验研究

本文研究了微生物谷氨酰胺转胺酶对大鼠创伤的促愈合作用。建立大鼠背部刀割伤模型,用创面照像、透明膜描记扫描记录伤后第5、10、15、20 天创面面积,计算创伤愈合率;并用注水法测量伤腔容积,同时观测肉芽组织再生及其总蛋白、氨基已糖和己糖醛酸的含量变化情况。结果实验组创面愈合时间平均为18.1天,较对照组平均缩短了2-3天(P<0.05);创伤愈合率显著提高(P<0.05或P<0.01);伤腔容积明显缩小(P<0.05);实验组肉芽干湿重较对照组显著增加(P<0.05),肉芽中蛋白质、氨基已糖和己糖醛酸含量增加显著(P<0.05)。结果显示谷氨酰胺转胺酶具有促进大鼠皮肤创伤愈合的作用,其作用机理可能是促进肉芽组织中蛋白质,氨基多糖和胶原的合成有关。     

蝇蛆油促进大鼠皮肤机械损伤愈合作用及机制研究

目的:本文拟研究蝇蛆油对皮肤机械损伤的治疗作用及作用机制。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、蝇蛆油组和重组牛碱性成纤维细胞生长因子(rb-bFGF)凝胶组,制作大鼠皮肤机械性损伤模型,在不同时间点采集样本,检测创面愈合率、创面愈合时间、血管内皮生长因子(VEGF)含量、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平,并检测组织中胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ、血小板衍生因子(PDGF)和细胞角蛋白19(CK19)表达情况。结果:模型组大鼠创面愈合时间为29.5±2.6 d,而蝇蛆油创面愈合时间为22.4±2.8 d,存在显著差异(P0.01)。VEDF含量在模型组和给药组均随着创面愈合时间增加,给药组在第1 d即显著高于模型组(P0.01),并在第21 d达到最大值(2051.5±148.2 ng/L)。模型组大鼠创面组织中MDA含量为6.47±0.92 nmo L/mg,SOD含量为7.52±3.21 U/mg,而蝇蛆油给药组大鼠创面组织中MDA含量为3.42±0.83 nmo L/mg,SOD含量为21.32±2.94 U/mg,存在显著差异(P0.01)。进一步研究发现,与模型组比较,蝇蛆油给药组大鼠创面组织中胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ、PDGF和CK19含量均显著升高(P0.01)。结论:蝇蛆油能够促进机械性损伤皮肤创面愈合,其作用机制可能是通过促进血管生成,抗氧化损伤,促进胶原生成,诱导干细胞形成,从而促进创面愈合。     

湿润烧伤膏对肛瘘术后造模大鼠创面修复的影响

摘要 目的：探究湿润烧伤膏（MEBO）对肛瘘术后造模大鼠创面修复的影响。方法：将45只SPF级SD大鼠随机分为模型组（Model组）、MEBO组、易孚组，每组15只。建立全层皮肤缺损开放感染模型。观察肛瘘创面组织一般情况。分别在给药第3、7、14天测定并计算创面愈合率。苏木精-伊红（HE）染色观察大鼠创面组织病理学变化。酶联免疫吸附实验（ELISA）检测各组大鼠创面肉芽组织中炎症因子指标[肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）]水平。采用碱性磷酸酶（SAP）免疫组化法对创面肉芽组织进行染色，观察表皮生长因子（EGF）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）水平。蛋白质印迹（Western Blot）法检测各组大鼠创面肉芽组织B细胞淋巴瘤/白血病-xL基因（Bcl-xl）、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因拮抗剂（Bak）蛋白表达水平，计算Bcl-xl/Bak比值。结果：与Model组相比，MEBO组大鼠创面愈合率（干预7、14 d后）、创面肉芽组织中EGF、MMP-2水平、Bcl-xl、Bak蛋白表达水平均显著升高（P＜0.05），创面分泌物和水肿评分、创面肉芽组织生长评分、创面肉芽组织中TNF-α、IL-6水平、Bcl-xl/Bak比值均显著降低（P＜0.05）。大鼠创面组织出血减少、细胞间渗出液减少，血管扩张减轻，炎性细胞浸润减轻，可见大量的新生毛细血管和成纤维细胞。结论：MEBO可能通过抑制炎症反应，改善创面微循环和促进组织再生对肛瘘术后大鼠创面修复。     

枯草芽胞杆菌喷雾剂对家兔皮肤创伤愈合的影响

目的 :观察枯草芽胞杆菌喷雾剂对家兔皮肤创伤愈合的影响。方法 :采用家兔皮肤创伤为模型 ,连续给药 6 d,第 11天测定创面面积 ,并于第 17天记录创面愈合数。结果 :枯草芽胞杆菌喷雾剂高剂量组和磺胺嘧啶银组创面面积显著小于空白对照组 ( P<0 .0 5 ) ;枯草杆菌喷雾剂的愈合率显著高于空白对照组( P<0 .0 5 )。结论 :枯草芽胞杆菌喷雾剂能够缩小家兔创面愈合 ,增加创面愈合率     

不同氧浓度下C2C12细胞的Nrf2抗氧化系统对H2O2刺激的反应*

目的:探讨不同氧浓度下小鼠骨骼肌卫星细胞系(C2C12细胞)对H₂O₂刺激反应的变化及其机制。方法:小鼠骨骼肌卫星细胞系(C2C12细胞),经培养复苏后,将细胞分为7组,每组设8个复孔,各组分别加入浓度为0.1 mmol/L、0.25 mmol/L、0.5 mmol/L、0.75 mmol/L、1 mmol/L、2 mmol/L的H₂O₂,分别作用1 h、2 h后测细胞活力,选择细胞H₂O₂刺激的最佳作用时间和浓度;C2C12细胞分为不同氧浓度组:21% O₂、12% O₂、8% O₂、5% O₂每组设8个复孔,12 h后,H₂O₂作用1 h,收集细胞;检测细胞Nrf2蛋白荧光和蛋白表达量,测定Nrf2和抗氧化酶SOD1、SOD2、CAT、NQO-1、HO-1、GPX-1 的mRNA表达量及细胞ROS水平。结果:选择H₂O₂作用时间相对较短的1 h和浓度0.5 mmol/L作为本实验的H₂O₂刺激条件。与21%O₂组相比,12%O₂组细胞Nrf2蛋白荧光增强,Nrf2 的mRNA和蛋白表达以及抗氧化酶SOD1、SOD2、CAT、NQO-1、HO-1、GPX-1的 mRNA表达均显著增加(P＜0.05或P＜0.01),细胞 ROS水平明显降低(P＜0.01);8%O₂组仅GPX-1 mRNA显著增加(P＜0.05),其他指标变化不大;5%O₂组细胞 Nrf2 mRNA和蛋白表达以及抗氧化酶SOD1、SOD2、NQO-1、GPX-1的 mRNA表达均明显降低(P＜0.05或P＜0.01),细胞 ROS水平则明显升高(P＜0.01)。结论:不同氧浓度下C2C12细胞中Nrf2介导的抗氧化系统对H₂O₂刺激反应不同,12 h的12% O₂浓度可促进C2C12细胞Nrf2的抗氧化作用,而5% O₂浓度的严重低氧则作用相反。     

Mechanisms of H2O2-induced oxidative stress in endothelial cells

Hydrogen peroxide, produced by inflammatory and vascular cells, induces oxidative stress that may contribute to endothelial dysfunction. In smooth muscle cells, H₂O₂ induces production of O₂⁻ by activating NADPH oxidase. However, the mechanisms whereby H₂O₂ induces oxidative stress in endothelial cells are poorly understood. We examined the effects of H₂O₂ on O₂⁻ levels on porcine aortic endothelial cells (PAEC). Treatment with 60 μmol/L H₂O₂ markedly increased intracellular O₂⁻ levels (determined by conversion of dihydroethidium to hydroxyethidium) and produced cytotoxicity (determined by propidium iodide staining) in PAEC. Overexpression of human manganese superoxide dismutase in PAEC reduced O₂⁻ levels and attenuated cytotoxicity resulting from treatment with H₂O₂. L-NAME, an inhibitor of nitric oxide synthase (NOS), and apocynin, an inhibitor of NADPH oxidase, reduced O₂⁻ levels in PAEC treated with H₂O₂, suggesting that both NOS and NADPH oxidase contribute to H₂O₂-induced O₂⁻ in PAEC. Inhibition of NADPH oxidase using apocynin and NOS rescue with L-sepiapterin together reduced O₂⁻ levels in PAEC treated with H₂O₂ to control levels. This suggests interaction-distinct NOS and NADPH oxidase pathways to superoxide. We conclude that H₂O₂ produces oxidative stress in endothelial cells by increasing intracellular O₂⁻ levels through NOS and NADPH oxidase. These findings suggest a complex interaction between H₂O₂ and oxidant-generating enzymes that may contribute to endothelial dysfunction.     

离体大鼠主动脉内皮细胞氧化应激损伤模型的建立及评价

目的：建立离体大鼠主动脉内皮细胞氧化应激损伤模型,为细胞损伤及细胞凋亡的调控研究提供基础。方法：大鼠断头处死在无菌条件下开胸取主动脉,经组织块培养法后传代培养得到充足主动脉内皮细胞,接种于96孔板或爬片培养,每组设6个复孔,用于之后的各项试验检测。以不加H₂O₂的组作为对照组,以不同浓度的H₂O₂（100、200、300、400、500 μmol/L）作用于内皮细胞相同时间12 h,来筛选最佳作用浓度;依据结果以相同浓度的H₂O₂（100和200 μmol/L）分别作用不同时间（3、6、9、12及24 h）,来筛选最佳作用时间。通过免疫荧光法鉴定、细胞存活率检测、生化指标（LDH-L、NO、MDA、SOD）检测及内皮细胞凋亡指数等变化,评价及验证模型的建立。结果：对细胞内Ⅷ型胶原抗原进行免疫荧光染色后鉴定血管内皮细胞培养成功;在12 h的相同作用时间下,随着H₂O₂浓度的加大,细胞存活率呈显著下降（77.63%±5.20%~40.90%±2.10%）;相同浓度（100 μmol/L组和200 μmol/L组）随着作用时间的增加,细胞存活率呈显著递减（100 μmol/L组为86.83%±12.11%~44.26%±5.70%,200 μmol/L组为78.28%±11.98%~34.45%±5.87%）;以H₂O₂浓度为100 μmol/L作用3、6、9、12及24 h,培养液中生化指标在9 h后LDH-L与MDA呈显著递增,NO与SOD呈显著递减;在H₂O₂浓度为100 μmol/L与作用时间12 h的条件下,流式检测结果显示内皮细胞凋亡率为16.92%±2.37%,显著高于对照组2.68%±0.47%（P<0.01）; TUNEL检测内皮细胞凋亡指数为17.65%±2.36%,显著高于对照组的3.23%±0.57%（P<0.01）。结论：该方法成功建立了体外血管内皮细胞氧化应激损伤模型,探索了轻重适度的诱导细胞损伤和细胞凋亡的造模方法,可以成为开展多种血管内皮细胞损伤及凋亡调控机制研究的基础。     

黑腹果蝇white基因在H2O2影响下卷翅形成中的作用及机理

卷翅是果蝇遗传学上最常用的标记之一,但卷翅形成的具体机制还不清楚.过去的研究发现,理化刺激影响果蝇卷翅的形成.我们最近研究发现,H₂O₂处理不仅会影响果蝇的羽化率,还会使其出现卷翅现象.本研究通过改变H₂O₂浓度、果蝇培养温度和H₂O₂处理时间,探讨影响黑腹果蝇卷翅形成的具体因素,并对其超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力进行检测,探讨H₂O₂对果蝇抗氧化能力的影响.结果表明: 果蝇的羽化率与H₂O₂浓度成反比.温度、H₂O₂浓度和H₂O₂处理时间的改变均会影响果蝇翅的卷曲程度和卷翅果蝇所占的比例.其中white基因突变果蝇对这3种条件反应最明显,mini-white(white基因回复突变)果蝇却可以拯救该表型,它的反应与野生型OR相似.H₂O₂对含Cy基因的果蝇卷翅的形成也有一定的影响,可以加大果蝇翅的卷曲程度.对SOD、CAT和GSH-PX活力检测发现,H₂O₂处理会使果蝇的抗氧化能力降低.实时荧光定量PCR检测发现,H₂O₂处理会导致果蝇基因表达量发生改变.黑腹果蝇卷翅形成是一个十分复杂的过程,H₂O₂可能作为某种信号分子或是间接影响某种因子参与黑腹果蝇的卷翅形成过程.该卷翅形成过程可能与Cy基因导致的果蝇卷翅过程是同一个信号途径,两者也可能是通过不同的模式进行调控的.     

Distinct H2O2 concentration promotes proliferation of tumour cells after transient oxygen/glucose deprivation

A solid tumour undergoes ischemia/reperfusion due to deficient vascularization and subsequent formation of new blood vessels. This study investigated the effect of transient oxygen and glucose deprivation (OGD) on proliferation of C6 glioma cells. The cells were subjected to 18 h of OGD followed by reoxygenation in the presence of glucose and different extra-cellular H₂O₂ concentrations since H₂O₂ affects cell proliferation. After reoxygenation, the cellular H₂O₂ concentration was increased returning to control levels within 24 h. Within this period, increase in cell number and MTT-reduction were impaired. Regeneration was completed on the third day of reoxygenation. MTT-reduction increased faster than cell number, indicating an OGD-dependent up-regulation of protein expression. It is concluded that ischemia/reperfusion stress promotes proliferation of tumour cells. An essential factor is a distinct H₂O₂ concentration. Massive elevation as well as significant reduction of H₂O₂ concentration impairs the proliferation process.     

NO和H2O2在光/暗调控蚕豆气孔运动中的作用及其相互关系

借助表皮条分析和激光扫描共聚焦显微镜技术,对NO和H2O2在光/暗调控蚕豆(Vicia faba L.)气孔运动中的作用及其相互关系进行了探索.结果显示,光下外源NO供体硝普钠(SNP)和H2O2促进气孔关闭的效应明显大于暗中,暗中NO专一性清除剂2,4-羧基苯-4,4,5,5-四甲基咪唑-1-氧-3-氧化物(cPTIO)、一氧化氮合酶(NOS)抑制剂NG-氮-L-精氨酸-甲酯(L-NAME)和H2O2清除剂抗坏血酸(Vc)、过氧化氢酶(CAT)对气孔开度的效应明显大于光下,而且光下蚕豆保卫细胞NO和H2O2水平比暗中明显降低.上述结果表明,光/暗通过影响保卫细胞NO和H2O2的水平调控气孔运动.研究还发现,光下H2O2既诱导NO水平增加,也诱导气孔关闭,cPTIO和L-NAME有效地逆转H2O2的这些效应;光下SNP既诱导H2O2水平增加,也诱导气孔关闭,SNP的上述效应又被Vc和CAT有效逆转.这些结果表明,NO和H2O2在生成及效应上均存在明显的相互作用.另外,L-NAME显著逆转暗和光下H2O2处理对气孔关闭和NO生成的效应表明,蚕豆保卫细胞中可能存在NOS,暗和光下H2O2处理可能通过提高NOS的活性促进NO水平增加,进而诱导气孔关闭.     

Effect of hydrogen peroxide in redox status estimation using nitroxyl spin probe

A procedure for estimating in vivo redox status using EPR and a hydrogen peroxide (H₂O₂)-dependent spin probe method is described. The mechanism of decreasing spin clearance in the selenium-deficient (SeD) rat is discussed. The in vivo decay constant of the nitroxyl spin probe in the liver region of SeD rats appeared to be slightly lower that of the selenium-adequate control (SeC) group, and was significantly smaller than that of normal rats. Bile H₂O₂ levels in normal rats were significantly lower than those in SeD rats. The in vivo decay constant of the spin probe in SeD rats depended on the bile H₂O₂ level. Furthermore, H₂O₂ was detected in the bile in all SeD rats, whereas bile H₂O₂ could be detected in only half of the normal rats. It was found that the in vivo decay constant of the spin probe in normal rats also depended on whether bile H₂O₂ was detected or not. In vivo decay constants were smaller in rats subjected to the surgical operation than in the nonoperated groups. The EPR signal of the nitroxyl radical in the liver homogenate was increased by addition of H₂O₂, which was administered 30 min before the rat was killed. It appears that H₂O₂ can oxidize the hydroxylamine formed following reduction of the spin probe in the liver.     

油菜RbohB基因的克隆及逆境响应表达分析

利用RACE技术从‘陇油6号’油菜中克隆得到一个新的RbohB基因,全长2 694 bp,开放阅读框2 541 bp,编码846个氨基酸。实时荧光定量PCR分析表明RbohB基因表达受低温、高盐、H₂O₂诱导,MAPKK抑制剂U0126预处理12 h再经低温、高盐、H₂O₂诱导,与单独处理结果相比,RbohB基因表达明显降低,表明该基因在油菜适应低温、高盐、H₂O₂胁迫过程中发挥作用,U0126对该基因的转录有抑制作用。NADPH氧化酶活性受H₂O₂处理的诱导,U0126预处理12 h再经H₂O₂处理,与单独H₂O₂处理结果相比,NADPH氧化酶活性明显降低,表明MAPKK抑制剂U0126对该酶活性有抑制作用。     

Redox Cycling of Human Methaemoglobin by H2O2 Yields Persistent Ferryl Iron and Protein Based Radicals

The formation and reactivity of ferryl haemoglobin (and myoglobin), which occurs on addition of H₂O₂, has been proposed as a mechanism contributing to oxidative stress associated with human diseases. However, relatively little is known of the reaction between hydrogen peroxide and human haemoglobin. We have studied the reaction between hydrogen peroxide and purified (catalase free) human metHbA. Addition of H₂O₂ resulted in production of both ferryl haem iron (detected by optical spectroscopy) and an associated protein radical (detected by EPR spectroscopy). Titrating metHbA with H₂O₂ showed that maximum ferryl levels could be obtained at a 1:1 stoichiometric ratio of haem to H₂O₂. No oxygen was evolved during the reaction, indicating that human metHbA does itself not possess catalatic activity. The protein radicals obtained in this reaction reached a steady state concentration, during hydrogen peroxide decomposition, but started to decay once the hydrogen peroxide had been completely exhausted. The presence of catalase, at concentrations around 10 fold lower than metHb, increased the apparent stoichiometry of the reaction to 1 mol metHb: ∼20 mol H₂O₂ and abolished the protein radical steady state. The biological implications for these results are discussed.