HeLa细胞端粒酶最适反应条件及活性重建

端粒是真核细胞染色体末端的重复ＤＮＡ序列 ,其生物学功能是防止染色体ＤＮＡ降解、末端融合、非正常重组和染色体的缺失[1] .由于存在“末端复制问题” ,随着老化人体细胞端粒重复序列长度不断缩短 ,但在生殖细胞中由于端粒酶的存在 ,端粒序列并不缩短 .端粒酶是由蛋白质和ＲＮＡ构成的核蛋白 ,是依赖ＲＮＡ的ＤＮＡ聚合酶 ,在ＤＮＡ3’端合成端粒重复序列[2 ] .研究表明 ,在 85 %～ 95 %的人肿瘤细胞中可以检测到端粒酶的活性[3 ,4 ] ,而在正常体细胞中除生殖细胞和造血干细胞等极少数细胞中存在端粒酶活性外 ,均检测不到端粒酶活性 ,这…     

肿瘤治疗研究的新热点──端粒酶活性的抑制

端粒是染色体末端由ＤＮＡ和蛋白质组成的特殊结构,其ＤＮＡ部分由富含Ｇ的简单重复序列构成,在真核细胞其重复单位为５＇ＴＴＡＧＧＧ３＇。端粒对于维持染色体的稳定性有重要作用。由于ＤＮＡ聚合酶只能沿５＇→３＇方向合成ＤＮＡ,随从链的５＇端ＲＮＡ引物去除后无法填补。因此,端粒长度将随着复制次数增多而逐渐缩短。端粒酶的存在解决了这一"末端复制问题"。端粒酶是一种特殊的逆转录酶,它以自身的ＲＮＡ为模板合成端粒重复序列。有许多研究表明,端粒酶在肿瘤发生过程中起重要作用。因此．端粒酶活性的抑制成为当前肿瘤治疗研究…     

端粒酶研究的若干进展

端粒酶是一种ＲＮＡ依赖的ＤＮＡ聚合酶。它的生物学功能在于以自身的ＲＮＡ为模板,合成端粒序列,解决了线性染色体的末端复制问题,维持了染色体的稳定性。本文介绍一些新进展：如端粒酶蛋白的ｃＤＮＡ已被克隆;端粒酶活性检测中出现误差的可能原因;端粒酶活性的调控因子ＴＲＦ１及新发现的ＴＲＦ２;端粒酶活性同肿瘤诊断及预后间的关系;端粒酶的激活同肿瘤发生间的关系;反义核酸抑制端粒酶活性的可能性及其可能发生的问题等。     

端粒酶是干扰素抗肿瘤的新靶点

端粒酶(telomerase)是一种具有逆转录活性的核糖核蛋白酶.端粒酶的异常活化是细胞永生化和肿瘤形成的关键步骤. 端粒酶活性与细胞周期及细胞凋亡调控密切相关;端粒酶由端粒酶逆转录酶、端粒酶RNA、端粒酶相关蛋白质组成,端粒酶逆转录酶是端粒酶活性的决定性组分.干扰素(interferon)是一种具有抗病毒、抗增殖、抗肿瘤和免疫调节等功能的细胞因子;近年研究表明,干扰素通过相关信号转导途径而调节端粒酶活性,诱导细胞凋亡,为肿瘤的生物治疗提供了新思路;但干扰素与端粒酶活性相关的抗肿瘤机制研究尚不充分. 本文综述干扰素通过调节端粒酶逆转录酶转录因子的表达和相互作用而抑制端粒酶活性、调节细胞周期并诱导细胞凋亡等抗肿瘤作用机制.     

端粒酶抑制剂在肿瘤治疗中的进展

端粒是真核细胞染色体末端含有ＴＴＡＧＧＧ重复结构的复合体 ,有防止染色体降解丢失 ,端端融合和重组建作用 ,端粒酶是一种逆转录酶 ,以自身ＲＮＡ为模板 ,逆转录维持染色体的稳定。目前肿瘤组织端粒酶检出率约 85 - 90 %,而正常组织或良性肿瘤端粒酶检出率〈5 %,说明端粒酶与恶性肿瘤密切相关。端粒酶抑制剂作为新的抗肿瘤策略正成为肿瘤研究的热点 ,现就端粒酶抑制剂在肿瘤治疗中的研究状况做一简单概述。1、阻断端粒酶ＲＮＡ的模板作用对端粒酶活性的抑制1. 1反义核苷酸、反义肽苷及硫代反义核苷酸对端粒酶活性的抑制端粒酶ＲＮＡ序列中…     

以端粒酶为靶点的药物设计和基因治疗策略

端粒亦称端区,位于真核细胞染色体末端,随细胞分裂而脱失,缩短至一定程度时体细胞死亡,癌细胞因具有合成端粒的端粒酶而获永生。端粒酶亦称端聚酶,为一含ＲＮＡ的核糖核蛋白,在９０％的癌细胞中过表达,成为肿瘤治疗的新靶点。以端粒酶为靶点的药物设计策略包括端粒酶ＲＮＡ和编码蛋白质的基因以及编码端粒结合蛋白基因的操作。另外,染色体转移、诱导分化、细胞周期调节及常规药物筛选亦为重要的策略。其中针对端粒酶ＲＮＡ模     

人端粒酶RNA基因的克隆与鉴定

以人血基因组ＤＮＡ为模板,合成两段２０个寡聚核苷酸为引物,经过ＰＣＲ扩增,得到４８０ｂｐ的片段,克隆到ｐＭＤ１８－Ｔ载体中,经电泳、酶切、ＰＣＲ鉴定后测定序列。序列分析表明氙克隆的人端粒酶ＲＮＡ（ｈｕｍａｎ ｔｅｌｏｍｅａｓｅ ＲＮＡ,ｈＴＲ）基因含有４８０ｂｐ,包括约４５０ｂｐ的编码模板区主序列和约３０ｂｐ的上游调控区序列,其中模板区的１１个核苷酸（５’－ＣＵＡＡＣＣＣＵＡＡＣ－３’）合成端粒亚     

人端粒酶催化亚基(hTERT)基因及其表达调控

端粒酶是一种核糖核蛋白复合物 ,能引起染色体的末端结构端粒的完全复制。端粒作为一种保护性结构 ,是由短的重复ＤＮＡ序列组成。在人体中这种序列为ＴＴＡＧＧＧ ,其平均长度为 5～ 1 5ｋｂ[1] ,细胞每经过一次分裂端粒缩短 50～ 2 0 0ｂｐ ,这种分子侵蚀作用使得细胞的分裂次数有了生理限制 ,从而限制了体细胞的寿命。一种逃避这种限制的机制是端粒酶的激活 ,因为端粒酶能弥补端粒的缩短 ,因此端粒酶被认为与细胞的永生化、肿瘤发生和细胞衰老密切相关。近来 ,组成人端粒酶复合物的 3个主要成分已被鉴定。人端粒酶ＲＮＡ成分 (ｈＴＲ)提…     

端粒酶缺乏影响高增殖器官的发育

近年来对体外单个细胞和单细胞生物的研究表明，端粒酶缺乏可致细胞衰老、死亡，而端粒酶活性增强是肿瘤细胞增殖过度的原因，但端粒酶对哺乳动物整体的细胞生长和生存的影响未进行研究。有鉴于此，汉城国立大学的Ｌｅｅ等对一种缺乏端粒酶ＲＮＡ的小鼠进行连续传代，研究...     

肾癌组织中端粒酶活性的测定与分析

端粒酶 (Ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ)是一种核糖核蛋白 ,依赖酶分子中的ＲＮＡ模板 ,通过逆转录合成染色体末端的端粒。近年来研究证实 ,端粒酶与细胞衰老及细胞分裂过程密切相关 ,尤其在恶性肿瘤组织中活性异常高。因此通过测定肿瘤组织、癌旁细胞及脱落细胞等端粒酶活性 ,可用于癌症的临床诊断、疗效观察、愈后及病理机制的研究。国外已经有对肾癌组织的端粒酶活性进行测定但都为定性 ,国内未见报道。本实验采用ＴＲＡＰ -ＥＬＩＳＡ技术对肾癌组织中端粒酶活性进行定量检测 ,现将结果报告如下。1　材料与方法1 1　样本来源 :组织标本均来自白…