基因工程酶法生产谷胱甘肽的工艺研究

研究了前体氨基酸和辅因子对基因工程酶法生产谷胱甘肽(GSH)的影响.实验考察了不同浓度的前体氨基酸和不同的镁离子浓度对于重组大肠杆菌酶法生产GSH产量的变化.实验结果表明,当L-Glu 60 mmol·L-1;Gly 50 mmol·L-1;L-Cys 15 mol·L-1;Mg2+ 80 mmol·L-1为酶法生产谷...     

氨基酸的简易制备方法

1　目的　学习从人的头发中制备氨基酸的原理和方法 ,验证细胞和生物体中含有氨基酸。2　原理　在氨基酸溶液中 ,当ｐＨ达到氨基酸的等电点时 ,氨基酸的溶解度最低 ,析出结晶。3　材料、用具、试剂　人的头发、烧杯 ( 1 0 0ｍｌ)、石棉网、玻璃棒、三角架、漏斗、定性滤纸、精密 ｐＨ试纸、表面皿、活性碳、浓盐酸、氨水、铁架台。4　方法、步骤、结果1 )制备氨基酸溶液 :将 1 0 0 ｇ人的头发放入烧杯(甲 ) ,加入 50ｍｌ浓盐酸。　　 2 )将装有毛发和浓盐酸的甲烧杯置于垫有石棉网的三角架上 ,用酒精灯加热 ,同时用玻璃棒搅拌 ,至毛发全部溶…     

肝硬化时血浆氨基酸的改变

<正> 肝脏是体内氨基酸代谢的中心器官,除支链氨基酸(BCAA)亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)、缬氨酸(Val)以外,几乎所有的氨基酸均主要在肝脏进行降解代谢。当肝脏发生疾患时,体内氨基酸代谢出现紊乱,血浆游离氨基酸发生显著改变。这已为许多临床及氨基酸研究的结果所证实。     

贮存条件对血清游离氨基酸浓度的影响

测试氨基酸血样以去蛋白血滤液保存此血清保存好,尤以低温(-50℃)保存最佳。血清在4℃、-10℃和-50℃下保存都不能保证氨基酸分析结果准确可靠,而去蛋白血滤液在-10℃下保存一周基本能保持氨基酸的稳定性,在-50℃下保存更好,保存一周所有氨基酸基本保持不变,贮存到二个月时,仅有4种氨基酸(苯丙、胱、精和羟脯氨酸)有变化,变化幅度也较小,因此,作为测试氨基酸血样应去蛋白后在-10℃以下的低温条件下保存为宜。     

利用非经典分泌蛋白质实现脂肪酶A的分泌表达

【目的】以枯草芽孢杆菌脂肪酶A(Lipase A)为报告蛋白,尝试利用4种非经典分泌蛋白质及其前50个氨基酸作为分泌信号以实现其分泌表达。【方法】我们扩增了脂肪酶A的编码基因和非经典分泌蛋白质的编码序列,构建了8种针对脂肪酶A的分泌表达载体,并转化至枯草芽孢杆菌WB800菌株,通过测定重组菌株的酶活、利用蛋白质电泳和免疫印迹等技术检测脂肪酶A的分泌情况【结果】以Pdh A的氨基酸序列和Sod A、Eno的前50氨基酸序列作为分泌信号的重组菌株较好的实现了脂肪酶A的分泌表达。【结论】部分非经分泌蛋白质的编码基因或其前50个氨基酸序列能够引导脂肪酶A分泌至细胞外。     

五步蛇蛇毒磷脂酶A_2的纯化及部分性质

经Sephadex G-75和QAE-Sephadex A-50离子交换层析等方法,从湖南产五步蛇(Agkistrodon acutus)蛇毒中纯化一种均一的酸性磷脂酶A_2。SDS-PAGE测得分子量为15.8kD,按氨基酸残基计算其分子量为14.352kD,IEF-PAGE测得等电点为5.32。氨基酸组份分析表明磷脂酶A_2分子由128个氨基酸残基组成,富含Asp和Glu,不含中性糖。PLA_2酶活性的最适温度为45℃,最适pH为8.5左右,没有抗胰蛋白酶的活性,具一定的热稳定性。K~+、Ca~(++)和Na~+离子激活,而Cd~(++)、Sn~(++)、Cu~(++)、Li~+、Hg(++)、Zn~(++)、Fe~(++)和Co~(++)离子可抑制或完全丧失酶活力。手工微量顺序分析测得PLA_2分子N-末端氨基酸为Leu。此酶对小白鼠的LD_(50)至少大于10mg/kg(ip)。     

要素膳及其氮源问题

<正> 早在本世纪40年代,曾证实采用纯氨基酸混合物可代替食物蛋白以维持氮平衡,50年代末曾以氨基酸、葡萄糖、玉米油、矿物质与维生素配制一种化学组成明确膳,至60年代后期生产一种名为Vivonex的商品要素膳。要素膳系以要素形式的氨基酸或氨基酸与低聚肽混合物作为氮源的膳食,其能源采用葡萄糖、蔗糖及/或低聚糖、糊精,另加多种维生素、矿物质及少量提供必需脂肪酸的脂肪,但     

植物中氨基酸的生理作用

氨基酸是一类带有氨基(—NH_2)或亚氨基(—NH)的有机酸的总称,是细胞的重要组成部分,在植物生命活动中担负着各种生理作用。近年来,在研究氨基酸对植物生长发育的影响方面取得了一些进展。水分生理中的作用植物在干旱胁迫下可通过渗透调节作用来维持细胞一定的含水量和膨压势,从而维持细胞的正常功能。当水势下降时要保持膨压不变,     

无机离子和有机溶质对α-淀粉酶热稳定性的影响

长期以来,如何提高酶蛋白的热稳定性是分子生物学、生物工程学、化学工业等所关注的重要研究课题之一。分析了多种无机离子、糖和氨基酸对枯草杆菌液化型α-淀粉酶热稳定性的影响以及它们的共存效应,获取了一些对相关研究领域具有理论参考和实际应用价值的实验结果。在无机盐中,1mmol/L的钙离子或50mmol/L的钠离子能显著地提高该酶的热稳定性;酸性氨基酸和碱性氨基酸表现出相反的结果：酸性氨基酸具有明显的增强作用,碱性氨基酸却使之降低;随着糖浓度的增加（0～1000mmol/L）,该淀粉酶的热稳定性呈线性增高;当钠离子或钾离子与某些氨基酸或糖类共同存在时,对该淀粉酶的热稳定性表现出了明显的协同作用。试图通过检测酶蛋白分子荧光强度改变来反映该酶的热稳定性变化,其结果是：随着温度的改变,酶蛋白的荧光强度的衰减与残余酶活性之间显示了良好的相关性。从而说明热环境使酶蛋白分子的螺旋结构发生变化而失活,某些溶质的存在可能是通过作用于蛋白质分子的立体结构而影响该酶的热稳定性。     

基于H~距离对P53肿瘤抑癌基因的研究与应用（英文）

为了更深入的研究P53肿瘤抑癌基因,首先我们基于扩展的碱基表C={D,A,C,O,G,T,P}分别获得了加法运算和乘法运算,然后根据密码子集C~3={XYZ},定义了汉明距离d_H,继而通过加权和改进的汉明距离提出了H~*距离.进一步地,我们定义了密码子的外积和H~*内积.此外,也获得了DNA序列间的H~*距离d_(H~*)和H~*内积X_1Y_1Z_1,X_2Y_2Z_2).我们选取了9种与P53肿瘤抑癌基因相关的人类癌症基因序列,并分析了他们的代数结构,获取了如下结果:当0≤d_H≤1,我们发现它对任意的氨基酸突变位置没有任何影响,而d_(H~*)和(X_1Y_1Z_1,X_2Y_2Z_2)对氮基酸突变位置是敏感的,如d_(H~*),当氨基酸第一位碱基突变时,0.75≥d_(H~*)≥0.25;当氨基酸第二位碱基突变时,3≥d_(H~*)≥1;当氮基酸第三位碱基突变时,0.08≤dH_(H~*)≤0.25;如X_1Y_1Z_1,X_2Y_2Z_2,当氮基酸的第一位或第三位碱基突变时,X_1Y_1Z_1,X_2Y_2Z_2值都大于0;而当氮基酸第二位碱基突变时,-2≤X_1Y_1Z_1,X_2Y_2Z_2≤4,但其中65.22%都小于或等于0,且氨基酸的理化性质都发生了变化.同时,我们也可认为当X_1Y_1Z_1,X_2Y_2Z_2)小于或等于0时,第二位碱基将发生变化.通过以上的分析结果可知,较之于汉明距离,H~*距离及其内积更有利于研究氨基酸的理化性质.这些研究结果不仅有助于更深入的研究基因突变的密码子编码的氨基酸性质,也为人类癌症的预防与控制提供了一些参考.     

番茄花粉特异表达的高赖氨酸蛋白基因(tsb)的克隆与特性分析

赖氨酸是人和单胃动物必需的八种氨基酸之一,食物蛋白中的必需氨基酸种类不全或数量不足,都会影响其它氨基酸的利用.玉米等主要禾谷类作物由于缺少赖氨酸,种子蛋白利用率还不到50%.在长期以玉米为口粮的地区,人们往往患有营养不足或糙皮病.     

鉴别杰多霉素生物合成后修饰氧化酶JadH中参与底物结合或催化的关键残基

JadH是羟化脱水双功能酶,参与杰多霉素生物合成中的聚酮后修饰反应,将2,3-dehydro-UWM6催化为dehydrorabelomycin。为了分析杰多霉素生物合成途径中后修饰氧化酶JadH结合、催化底物的关键氨基酸,构建了JadH与底物复合物的三维结构模型。利用该模型并结合JadH同源蛋白氨基酸序列比对分析,推测出JadH活性中心中可能参与底物结合或催化的关键氨基酸(R50、G51、L52、G53、F100、R221、I223、P295和G298)。通过定点突变及体外酶学实验对这些位点的突变体的催化活性进行评价,结果显示这些突变株活性均显著低于野生型,表明这9个氨基酸是JadH参与底物结合或催化的关键氨基酸。     

用日立835-50型氨基酸自动分析仪测定赖氨酸、蛋氨酸的短程序

<正> 动物体所需的十种必需氨基酸中,赖氨酸和蛋氨酸是重要的限制性氨基酸。在配合饲料,谷物良种选育及蛋白质饲料的开发利用工作中,都将高赖氨酸或高蛋氨酸做为重要指标。日立835—50型氨基酸自动分析仪测定蛋白质水解液氨基酸成份的标准程序需要72分钟,这对大量只需测定赖氨酸和蛋氨酸或两者之一的样品很不经济,既费时间,也费试剂。     

非蛋白质氨基酸的结构与功能

<正> 自然界除了组成蛋白质的20种氨基酸外,还存在许多非蛋白质氨基酸,现据统计已测分子结构的非蛋白氨基酸已多达400多种,其中在植物中发现的约有240多种、在动物中发现50多种,其余多存在微生物中,这些天然产物大都具有芳香或杂环的结构,存在于各种细胞或组织中,有的呈游离状,有的呈结合状,但并不存在于蛋白质中,它们大多数是蛋白质中存在的α-氨基酸的衍生     

要素膳及其氮源问题

<正> 早在本世纪40年代,曾证实采用纯氨基酸混合物可代替食物蛋白以维持氮平衡,50年代末曾以氨基酸、葡萄糖、玉米油、矿物质与维生素配制一种化学组成明确膳,至60年代后期生产一种名为Vivonex的商品要素膳。要素膳系以要素形式的氨基酸或氨基酸与低聚肽混合物作为氮源的膳食,其能源采用葡萄糖、蔗糖及/或低聚糖、糊精,另加多种维生素、矿物质及少量提供必需脂肪酸的脂肪,但     

AccQ·Tag法测定绿豆蛋白酶解液中氨基酸含量

采用柱前衍生高效液相色谱法(AccQ·Tag法)同时测定17种氨基酸,氨基酸浓度在10～100μmol·L-1(胱氨酸浓度在5～50μmol·L-1)时,其峰面积和氨基酸浓度的线性相关系数均在0.99以上,17种氨基酸的加标回收率在92.1%～103.7%之间,用此法测定了绿豆蛋白酶解液氨基酸的含量,取得了满意的结果。     

非蛋白氨基酸的功能与应用

<正> 非蛋白氨基酸是跟以肽键构成高分子蛋白质有所不同的一些氨基酸,它是以游离或小肽形式存在。当生物组织用乙醇溶液浸提时,不会随蛋白质沉淀,而是留在溶液之中,一般认为非蛋白质氨基酸不是构成机体结构物质,也不作能源物质。故不象蛋白质氨基酸那样,与生物机体生长发育直接相关。而且由于它含量少,发现迟,还被人们误以为     

硒代氨基酸的分析

本文介绍了用日立835-50氨基酸分析仪分析硒代氨酸(硒代胱氨酸、硒代蛋氨酸的方法,由于采用了较高浓度的盐酸水解,中性氨基酸沉淀等技术使两种硒代氨基酸实际样品的同时分析得以实现,国内未见报导。     

用835—50型氨基酸自动分析仪对羟脯氨酸的测定方法

<正> 羟脯氨酸是植物细胞壁内伸展蛋白(e×tensin)的组成成分之一,所以在细胞的生长过程中,初生细胞壁增加的同时,必然有羟脯氨酸量的变化,因此羟脯氨酸似乎可以作为植物生化与分化的一个指标。如果能用835-50型氨基酸自动分析仪来测定羟脯氨酸,那么就要比其它测定方法即省时间又准确,为此我们在用835-50型氨基酸自动分析仪测定羟脯氨酸时作了一些工作。日立835-50型氨基酸自动分析仪的氨基     

基于转录和翻译调控的氨基酸高产菌株筛选及构建策略

氨基酸的工业化生产和应用有近50年的历史。除了调味料和其他食品用途外,氨基酸还被用于动物饲料、药物和化妆品等许多领域。如今大多数氨基酸通过微生物发酵生产,极低的价格对它们在工业中的应用至关重要。通常采用挑选营养缺陷型或具有类似物抗性的菌株来筛选氨基酸生产菌。然而,因部分氨基酸生产菌的生产效率低下,限制了其工业化发展。主要梳理了营养缺陷型、氨基酸类似物和富含稀有密码子标记基因3种不同筛选方法及其实际应用,旨为高产菌株的筛选与构建提供候选方案。