利用RAPD—PCR检测三种白僵菌及球孢白僵菌种内变异

采用ＰＣＲ－ＲＡＰＤ技术研究了球孢白僵菌２株野生型多孢株及其各１株单孢分离株的ＲＡＰＤ扩增片段的多态性,比较了彼此间的相似率。结果显示,相似率在６３．６－９９．３％之间变化很大,表明各分离子间的基因组ＤＮＡ已发生变化。     

球孢白僵菌种内比较线粒体基因组学分析

【目的】明确球孢白僵菌种内线粒体基因组的分化程度。【方法】从GenBank下载已知的球孢白僵菌6个菌株线粒体基因组序列,详细分析基因组的组成结构,比较外显子区、内含子区和基因间区的碱基变异情况,分析菌株间的系统发育关系。【结果】球孢白僵菌不同菌株的线粒体基因组大小为28.8–32.3 kb,都有14个常见的核心蛋白编码基因、2个rRNA基因和25个tRNA基因,具有很强的共线性关系。但是,不同菌株含有的线粒体内含子数目存在差异(2–5个/菌株),在cox1、cox2和nad1基因中表现出内含子插入/缺失多态性,这是导致线粒体基因组大小变化的主要因素。对外显子、内含子和基因间区的碱基变异情况进行分析,发现内含子和基因间区相对变异较大,而外显子区相对变异较小。系统发育分析发现,这些球孢白僵菌菌株以很高的支持度聚在一起,具有相同内含子分布规律的菌株也具有较近的聚类关系。【结论】本研究首次报道球孢白僵菌因内含子数目不同、插入缺失突变和单核苷酸变异等在线粒体基因组上表现出较大程度的遗传分化,为认识真菌种内线粒体基因组分化提供了新的证据。     

球孢白僵菌固态罐发酵产孢培养的研究

建立了一套两升圆柱体玻璃发酵罐的固态通风培养装置及通风系统。以球孢白僵菌Bb371为生产菌,培养基220g(82％麸皮 4．5％黄豆粉 4．5％玉米粉 9％稻壳)作为生产原料,接种30ml,23℃培养温度下,分阶段调节通风量和空气湿度,培养5d,产孢量可达到116亿／g干培养基。     

球孢白僵菌对温室蚜虫的侵染生物学

研究了球孢白僵菌在不同浓度、施菌方式、温度和相对湿度下对温室蚜虫的侵染力以及接种后对蚜虫的侵染速率。结果表明,高(109个孢子.mL-1)、中(108个孢子.mL-1)、低(107个孢子.mL-1)3个浓度剂量对蚜虫都有较强的致病力,且浓度越大,蚜虫的死亡率越高,死亡时间越提前。用浸渍法和孢子浴法接种蚜虫,6 d的累积死亡率分别为100%和31.1%。在测试的3个温度(22、26、30℃)中,26℃时蚜虫侵染力最强,第3天出现死亡高峰,第5天时累积死亡率就达到100%,明显高于22、30℃的处理。相对湿度越大,球孢白僵菌的致病力越强,蚜虫死亡速度越快。在温湿度组合中相对湿度为95%时,温度对白僵菌的侵染力几乎无影响,但影响发病速度,相对湿度低于95%时,26℃的侵染力始终高于22和30℃时的侵染力。通过接种后不同时间段用0.2%百菌清处理蚜虫测定该菌株的侵染速率,结果表明接种后24 h是该球孢白僵菌有效侵染蚜虫的关键时期。     

球孢白僵菌数量性状的典型相关分析

来源不同的球孢白例僵菌株的生物学性状（培养特征、产孢量、菌落生长速率及孢子萌发中时）、生态学性状（毒力、水分活性、紫外照射活率、水浴活率）及生物化学性状（草酸水平、蛋白酶产量、几丁质酶产量、葡萄糖苷酶产量、酯酶及脂肪酶产量）经观察测定,共得到１５个指标。对不同性状圾其组合进行典相关分析,结果表明生物学性状与生态学性状的相关主要为产一与菌株毒力及孢子水浴活率之间的相关生物学与生物化学性状间的相关主要     

球孢白僵菌的侵染特性及应用研究进展

球孢白僵菌是一种重要的虫生真菌,具有致病力强、侵染范围广、安全无污染等优点,其制剂可作为一种真菌类杀虫剂应用于农林业害虫的防治,也可用于人工生产中药材僵蚕。本文综述了球孢白僵菌的培养性状、侵染特性、应用生产和存在的问题,并提出了发展对策,为球孢白僵菌的进一步开发应用提供参考。     

胞外蛋白酶和脂酶活性作为球孢白僵菌毒力指标的可靠性分析

通过测定17株不同来源球孢白僵菌(Beauveria bassiana)的胞外蛋白酶活性(PU,μmol·ml~(-1)·min~(-1))和脂酶活性(LU,μmol·ml~(-1)·h~(-1))及其对血黑蝗(Melanoplussanguinipes)的毒力,分析用酶活性作为毒力指标的可靠性.结果表明,菌株间毒力和酶活性差异较大,LT_(50)的变化范围为5.27~16.89d,PU和LU分别为0.47~3.37×10~(-2)和0.00~56.75.将PU与LU分别对接种后各日累计死亡率及LT_(50)进行回归分析,发现各菌株PU与其毒力相关显著,但LU却与毒力相关不显著.对接种后7d的死亡率,PU可表达其变异的67%,也是最大表达率.因此,PU可作为大量菌株初筛的参考性毒力指标,但应谨慎使用,不能以PU测定完全取代常规的毒力测定.脂酶活性不宜作为所试菌种的毒力参考指标.     

球孢白僵菌毒素的分离、毒力检测及结构鉴定

用吸附法从球孢白僵菌(Beauveria bassiana)1003-V的代谢产物中分离出导致昆虫患病的毒素粗提物(以下简称毒素),并对其进行了毒力检测.结果表明,该毒素对白纹伊蚊(Aedes albopictus)幼虫有明显毒性;对棉铃虫(Heliothis zea)幼虫口服毒性较弱,血腔注射毒性较强;仅对革兰氏阳性细菌有抑菌作用.对草地夜蛾(Spodoptera frugiperda)Sf-21细胞株的毒力测定结果表明,毒力回归方程为y=2.03 2.39x,半致死浓度是0.01751%,其95%可信极限为0.01517%~0.0202%.高压液相色谱和红外光谱分析表明,该毒素含有三种在结构和性质上非常相近的物质.     

球孢白僵菌种群野生菌株异核现象的分子验证*

球孢白僵菌28S rRNA基因D11域由于一内含子的存在与否,引起这一区域的扩增产物有两种片段类型(约520bp及120bp),将此作为分子标记分析了球孢白僵菌的117个菌株,发现17%菌株的扩增产物为双片段类型,即为异核体。异核体在不同种群中的分布频率因地理生态条件而异。单孢分离分析表明,异核体的分离频率约为35%。RAPD检测结果说明异核体在准性循环中发生了不同程度的遗传交换及遗传重组。球孢白僵菌异核体在继代培养中极不稳定。     

白僵菌不同菌株DNA扩增图谱与其来源的相关性分析

采用RAPD技术对28个不同来源的球孢白僵菌菌株的DNA指纹图谱进行了测定。菌株间显示了DNA图谱的多态性,但系统聚类分析结果表明,其多态性与菌株的原寄主和原采集地之间未表现出相关性。     

不同培养基质上球孢白僵菌孢子与菌丝多糖含量的变化

球孢白僵菌Beauveria bassiana(Balsamo)Vuellemin是重要的害虫生防真菌(Feng et al.,1994),其制剂在常温下长期储存是有效应用的技术瓶颈。由于菌体内源营养(如糖类)的积累是一个可控指标, 通过工艺调节内源营养积累可改善孢子的生理状态,有助于增强孢子贮存稳定性(冯明光和应盛华, 2002)。有关生防真菌孢子中糖类的研究多集中于单糖、双糖以及糖醇(Hallsworth&Magan,1994),多糖的报道仅见于芽生孢子内的糖原及其代谢的检测(Lane&Trinci,1991),不同基质对培养物多糖总量的影响还未见诸报道。本文简要报道在不同培养基质上培养的球孢白僵菌菌丝和孢子多糖的测定结果, 并就三种多糖提取方法进行了比较。     

家蚕病原球孢白僵菌的原生质体再生回复及核型分析

家蚕病原球孢白僵菌（Beauveriabassiana）原生质体的分离制备、性状及再生回复,并用脉冲凝胶电泳（PFGE）技术分析了其核型。以6mg／mLDriselase为酶解液,0.7mol／LNaCl液（pH5.8）为渗透压稳定剂,在30℃下轻轻振荡处理幼嫩菌丝1．5h,是原生质体分离的适宜条件。原生质体的无核率为26．5％,有核率为73.5％,其中单核率为53.5％。再生回复的形式可观察到三种,其培养基的渗透压稳定剂以0.7mol／L葡萄糖较为适当。球孢白僵菌至少具有6条染色体,估算大小为2.5～6.6Mb,核型大小为26.5Mb。     

球孢白僵菌胞内几丁质酶的分离纯化及性质

球孢白僵菌(Beauveria bassiana)突变株CH-1316细胞裂解液经(NH_4)_2SO_4沉淀,DEAE-纤维素层析及凝胶过滤,分离出一种几丁质酶,该酶的分子量为32000;最适pH为5.0;最适温度为40℃;最适离子强度为0.2mol/L NaCl;Hg²⁺、Fe²⁺是该酶的强抑制剂;该几丁质酶完全不水解纯的片状几丁质,脱矿几丁质也不是该酶的良好底物;该几丁质酶水解几丁寡糖,但不水解几丁二糖;对几丁五糖以上的寡糖水解速度较快,而对几丁三糖和四糖水解速度则慢得多。     

球孢白僵菌胞外壳聚糖酶的纯化和性质*

球孢白僵菌Beauveria bassiana 1316-V1的培养上清液经硫酸铵分级沉淀,Sephadex G-75凝胶过滤,Chitosan-bead亲和层析,第二次Sephadex G-75凝胶过滤, 得到电泳纯的一种胞外壳聚糖酶,比活力达到45u/mg 。此酶的分子量为36 kD; 最适酶反应温度为60℃;最适pH为4.0;最适离子强度为 0.25mol/L NaCl; 37℃以下,pH 2.0~5.0之间稳定性好; Cu2+、Hg2+、Pb2+、Ni2+ 对该酶有强烈抑制作用;Ag+、Mn2+也有较强抑制作用;Fe2+有轻微激活作用。该壳聚糖酶是一种糖蛋白,含糖约为12.6%。酶的最适底物为脱乙酰度为90%的胶体壳聚糖;也能轻微水解CMC、DEAE-Cellulose和胶体几丁质;但不能水解片状的壳聚糖和几丁质。     

赤眼蜂、白僵菌防治苹果害虫的研究

研究表明,利用松毛虫赤跟蜂防治苹果小卷叶蛾、梨小食心虫;白僵菌处理地面．防治桃小食心虫的寄生效果,均可达90％左右,防治效果优于化学农药．赤眼蜂应掌握在害虫始卵期开始放蜂．5天1次,连放4次,每亩总放蜂量12万头．白僵菌应在桃小食心虫越冬代幼虫出土始盛期和盛期各防治1次,每次每亩用菌剂(100亿孢子／g)2kg．加25％对硫磷微胶囊剂0．15kg．兑水150kg,在树冠下地面喷洒．喷后覆草是提高防治效果的关键．     

球孢白僵菌数量性状的典型相关分析*

来源不同的球孢白僵菌菌株的生物学性状（培养特征、产孢量、菌落生长速率及孢子萌发中时）、生态学性状（毒力、水分活性、紫外照射活率、水浴活率）及生物化学性状（草酸水平、蛋白酶产量、几丁质酶产量、葡萄糖苷酶产量、酯酶及脂肪酶产量）经观察测定,共得到１５个指标。对不同性状集团及其组合进行典型相关分析,结果表明生物学性状与生态学性状的相关主要为产孢量与菌株毒力及孢子水浴活率之间的相关。生物学与生物化学性状间的相关主要为产孢量与蛋白酶及草酸水平的相关;生态学与生物化学性状间的相关主要为水浴活率与草酸水平及蛋白酶产量间的相关;含培养特征的生物生态与生物化学性状的相关主要由菌落颜色、产孢量、毒力、水浴活率与蛋白酶、葡萄糖苷酶相关引起的;而不含培养特征的生物生态与生物化学性状相关主要由产孢量、毒力、水浴活率与草酸水平、蛋白酶、几丁质酶相关引起的。