焦磷酸测序检测食品中鼠伤寒沙门氏菌

根据鼠伤寒沙门氏菌的特异序列,分别设计扩增引物和测序引物,建立焦磷酸测序检测鼠伤寒沙门氏菌的方法。针对鼠伤寒沙门氏菌设计特异性扩增引物,对目标片段进行PCR扩增,然后制备单链模板,并利用测序引物进行焦磷酸测序。测序结果表明,6株不同来源的鼠伤寒沙门氏菌均可以扩增出碱基序列为TACAACCGGA GTGCACATTA ATCCCGCAGC的基因片段,而30株阴性对照菌株均未得到扩增。进行BLAST比对表明,该序列与GenBank中鼠伤寒沙门氏菌的碱基序列100%匹配。焦磷酸测序法是一种快速、准确的检测方法,可用于食品中鼠伤寒沙门氏菌的快速检测。     

沙门氏菌快速增菌培养的实验研究

用改良的沙门氏菌增菌培养基与02快速增菌培养基,比较研究了鼠伤寒沙门氏菌、伤寒沙门氏菌、甲型副伤寒沙门氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌及纽因吞沙门氏菌的增殖能力。以OD值测定菌量,改良法较02法增长1.43—3.97倍。尤其是对鼠伤寒沙门氏菌和伤寒沙门氏菌的菌量增殖较多,生长速度较快,分别为02法的3.97和3.7倍。改良法可适合于这两种菌的增殖培养,其次是纽因吞沙门氏菌和乙型副伤寒沙门氏菌的培养,但对甲型副伤寒沙门氏菌和猪霍乱沙门氏菌的增长欠佳。改良的增菌培养基尚有抑制葡萄球菌和大肠杆菌生长的作     

淋病诊断试剂盒的研究

本文叙述了试剂盒的制备和考核的全过程,试剂盒用6个国际标准株、46个淋球菌临床株、32株不动杆菌和51株非淋球菌临床株对其敏感性、特异性进行了考核,并同革兰氏染色法和细菌培养法作了平行对比试验,结果表明本试剂盒具有敏感(O.3亿/ml)、特异(100%)、快速(3min)的特点.三种方法的比较研究证明革兰氏染色法的准确率为95.6%,培养法和试剂盒的准确率均为100%;与培养法的符合率革兰氏染色法为95.6%,试剂盒为100%.     

PCR技术检测食源性致病菌的研究进展

食源性致病菌的检测技术是食源性疾病预防与控制的关键环节。PCR是近年来广泛应用于食源性致病菌快速检测的方法之一。在食源性致病菌中,用于PCR检测的靶基因包括各种毒力基因、酶基因及特异性鉴别基因。这些靶基因的发现推动了食源性致病菌PCR快速检测的发展。     

伤寒杆菌特异性抗原的检测与单克隆抗体的应用

<正>一、概述 伤寒病在发展中国家仍然是一个严重的公共卫生问题。近年来,我国局部地区相继发生伤寒暴发流行,强度大、持续时间长、患者病情重、并发症多、伤寒症状不典型,加之出现耐氯霉素的M1型菌株,这就给临床诊断以及预防、治疗和控制疾病带来了新的困难。伤寒病的早期、快速、特异和     

轮状病毒乳胶试剂盒的研制

用轮状病毒Ａ群单克隆抗体研制出轮状病毒抗原乳胶凝集试剂盒,并与轮状病毒ＥＬＩＳＡ试剂盒进行了比较。试验结果表明,轮状病毒抗原乳胶凝集试剂盒具有较高的特异性（９８７％）和敏感性（８６８％）,与ＥＬＩＳＡ试剂盒比较无显著性差异（Ｐ＞０１）,且操作简便快速、成本低廉     

丙型肝炎病毒实验诊断技术的研究进展

目前,世界各国医学界均在积极探索非甲非乙型肝炎病毒的病原。随着分子克隆技术及特异性丙肝病毒抗原的出现,使特异性丙肝检测手段迅速发展,各种类型的诊断试剂盒不断推出,并在敏感性和待异性方面均有明显提高,日趋发展为简便、快速、可靠的方法。本文特就有关丙肝分子生物学及实验诊断技术的研究进展作一综述。     

禽大肠杆菌、肠炎、鼠伤寒、鸡白痢及鸡伤寒沙门菌多重PCR方法的建立及应用

【背景】大肠杆菌病和沙门菌病是最常见的家禽细菌性疾病,给养禽业造成严重经济损失。另外,禽大肠杆菌和沙门菌也是重要的人畜共患病原菌,可通过禽类及其产品传播给人类,对人类健康造成严重威胁。加强禽大肠杆菌和沙门菌的快速鉴别检测,对养禽业和公共卫生都具有重要意义。【目的】建立禽大肠杆菌、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌、鸡白痢沙门菌和鸡伤寒沙门菌的多重PCR检测方法。【方法】通过比较分析确定禽致病性大肠杆菌、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌、鸡白痢沙门菌和鸡伤寒沙门菌的特异靶标基因,设计5对特异性引物,通过条件优化建立多重PCR方法,分析该多重PCR方法的特异性、敏感性及可靠性。【结果】该方法能特异性地鉴定禽致病性大肠杆菌、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌、鸡白痢沙门菌和鸡伤寒沙门菌,每个PCR反应的最低检出限分别为103 CFU细菌和100 pg基因组DNA。临床分离菌株检测显示,多重PCR与传统血清学方法结果一致。【结论】建立的多重PCR方法能够快速鉴别禽致病性大肠杆菌和不同血清型沙门菌,对禽大肠杆菌病和沙门菌病的流行病学调查及临床检测具有重要意义。     

人心脏型脂肪酸结合蛋白快速检测试剂盒的临床验证性研究

目的评价H-FABP快速检测试剂盒对急性心肌梗死(AMI)的早期诊断效果。方法比较H-FABP、CK、CK-MB和cTnT四种心肌标志物在AMI发作后6 h内的敏感性、准确性和时效性;比较H-FABP快速检测试剂盒对AMI患者和非AMI患者诊断的特异性。结果 H-FABP快速检测试剂盒的检测结果与临床诊断结果符合率为100%;在AMI发作后6 h内,H-FABP的敏感性和准确性优于CK、CK-MB,与cTnT相当。8例肾衰竭患者100%显示阳性,心源性疾病中主动脉关闭不全有1例(2.44%),房间隔缺损有2例(4.88%)显示阳性。结论 AMI发作后6 h内,H-FABP快速检测试剂盒对其具有较好的诊断价值。     

鼠伤寒沙门氏菌外膜蛋白诱导BALB／C小鼠免疫保护的实验研究

本实验采用超声破碎、ＴｒｉｔｏｎＸ－１００处理和超速离心技术提取了鼠伤寒沙门氏菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａｔｙｈｉｍｕｒｉｕｍ,ＳＴＭ）的外膜蛋白（Ｏｕｔｅｒｍｅｍｂｒａｎｅｐｒｏｔｅｉｎｓ,ＯＭＰｓ）,其中脂多糖（ＬＰＳ）的含量约为５％。ＯＭＰｓ经ＳＤＳ—ＰＡＧＥ显示１０余条蛋白带。对ＯＭＰｓ诱发ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠产生典型的迟发型变态反应（ＤＴＨ）进行了检测。经腹腔免疫的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠用５００ＬＤ５０鼠伤寒沙门氏菌（５０１１５）攻击,１００％可得到保护;用５００ＬＤ５０伤寒杆菌（Ｅ６８６）攻击     

猪链球菌2型荚膜基因PCR快速检测方法的建立及试剂盒的研制

根据猪链球菌2型的荚膜基因2H序列设计一对引物,成功地扩增了荚膜基因,并建立了检测猪链球菌2型的PCR方法。用ScaI进行确认,获得了与预期大小一致的389bp和300bp的两个片段。然后对该方法的敏感性、特异性进行了研究。结果表明,敏感程度可达10个细菌;对其他细菌PCR检测结果均呈阴性,表明建立的猪链球菌2型荚膜基因的PCR检测方法,其特异性和敏感性均很高,可作为猪链球菌病快速诊断的方法。在建立PCR方法的基础上,研制成试剂盒,并对试剂盒的特异性、敏感性和稳定性进行了研究。     

基因芯片技术检测3种肠道病原微生物方法的建立

目的:建立一种运用多重PCR和基因芯片技术检测和鉴定伤寒沙门氏菌、痢疾杆菌和单核细胞增生利斯特菌的方法。方法:分别选取伤寒沙门氏菌染色体ViaB区域中编码调控Vi抗原表达的基因(vipR)、痢疾杆菌编码侵袭质粒抗原H基因(ipaH)和单核细胞增生利斯特菌溶血素基因(hlyA)设计引物和探针,探针3'端进行氨基修饰,下游引物标记荧光素Cy3。在优化的PCR和杂交反应条件下,进行三重PCR扩增,产物与包括3种致病菌特异性探针的基因芯片杂交。在评价基因芯片的特异性和灵敏度之后,对临床样本进行检测。结果:只有3种目的致病菌的PCR产物在相应探针位置出现特异性信号,其他阴性细菌均无信号出现;3种致病菌的检测灵敏度均可达到103CFU/mL;检测30例临床样本的结果与常规细菌学培养结果一致。结论:所建立的可同时检测伤寒沙门氏菌、痢疾杆菌和单核细胞增生利斯特菌的基因芯片方法快速、准确,特异性高,重复性好,为3种肠道致病菌的快速检测和鉴定提供了新方法和新思路。     

细菌生理特性快速检测试剂盒研制

选取各代谢途径中利用某些特定碳源,如蔗糖、葡萄糖、甘露醇等95种碳源作为测试碳源,分别加入96孔酶标板中.选用指示剂噻唑兰(MTT)来鉴定细菌利用特征碳源情况.同时选取不同种类和不同浓度的抗生素,不同起始pH、不同NaCl浓度加入96孔酶标板中,测定细胞是否生长,可以快速地获得该菌的抗生素耐受性谱.试验还从指示剂浓度、培养基的固化、接菌浓度、观察时间等方面对试剂盒进行优化,得到一种最佳的试剂盒鉴定系统BiobiqA(碳源利用谱)和BiobiqB(生理抗性谱).用模式菌株对试剂盒进行测试和验证,结果表明,试剂盒具有操作简便、结果准确、节省成本、节约时间等优点,可以进行细菌生理特性的快速检测.     

伤寒Vi-rEPA结合疫苗在小鼠中的免疫原性研究

以伤寒Vi多糖疫苗及结合物含量分别为20％、40％、60％的伤寒Vi-rEPA结合疫苗经皮下免疫小鼠后眼眶采血分离血清,用ELISA法测血清抗体浓度。血清抗体分析表明,伤寒Vi多糖疫苗和伤寒Vi-rEPA结合疫苗均有良好的免疫原性,但伤寒Vi-rEPA结合疫苗的免疫原性优于伤寒Vi多糖疫苗;伤寒Vi多糖疫苗无加强免疫应答效应,而伤寒Vi-rEPA结合疫苗有加强免疫应答效应;不同高分子结合物含量的伤寒Vi-rEPA结合疫苗免疫小鼠,其结合物含量为40％、60％的伤寒Vi-rEPA结合疫苗比结合物含量为20％的结合疫苗具有更好的免疫原性,而前二者的免疫原性无显著性差异。     

孔雀石绿的快速检测产品评价研究

孔雀石绿是国家明令禁止添加在水产品中的化合物,但仍有不少商贩在违规使用,孔雀石绿快速检测试剂盒是目前监管水产品流通市场的重要产品。为了评价孔雀石绿的快速检测产品,制备4个不同水平(0、1、2和4μg/kg)隐色孔雀石绿的盲样,对5个不同厂家的孔雀石绿快速检测试剂盒进行评价研究。本次研究不仅从产品的性能指标、与参比方法一致性分析对产品做出评价,而且同时考察了各产品的样品前处理操作难易程度、检测时间与检测成本、辅助仪器设备、结果判定以及适用性等。结果表明：本次评价的孔雀石绿快检产品的特异性总体较好,其中1个厂家产品整体水平较高,有3个厂家产品假阳性率≤15%,可见市面上的孔雀石绿快检试剂盒质量参差不齐。建议必须建立出厂评价验收制度,在市售水产品中孔雀石绿的快检产品采购前,对产品做出综合有效评价,确保产品质量。     

CTAB结合DNA凝胶回收试剂盒提取食用菌DNA

目的:为探索从食用菌子实体中快速分离和纯化DNA的方法.方法:以三种栽培的食用菌为材料,采用CTAB结合DNA凝胶回收试剂盒进行基因组DNA的分离和纯化.结果:与对照相比,结合法提取DNA样品的电泳条带更规则、清晰,并且DNA的酶切效率显著高于对照.结论:该结合法是一种快捷、高效提取纯化食用菌子实体DNA的方法.     

两种检测生鲜乳中β-内酰胺酶方法的比较

采用Unisensor试剂盒法和杯碟法对22份来自不同奶站的生鲜乳中β-内酰胺酶进行了检测,指出了两种方法各自的优点和缺点。β-内酰胺酶检测过程中,两种方法应配合使用,简便、快捷的Unisensor试剂盒法可以做现场及快速检测,杯碟法可以对Unisensor试剂盒法的检测结果进行确证。     

II型猪圆环病毒检测试剂盒的研制

猪圆环病毒(Porcine circovirus, PCV)属圆环病毒科圆环病毒属成员[1]。PCV分两种血清型,即PCV 1 和 PCV 2,其中 PCV 1 由 Tischer 等[2] 于1974年检测到,对猪没有致病性;PCV 2 可引起部分断奶仔猪和育肥猪的断奶仔猪多系统综合征( postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)[3]。目前,该病呈世界分布,给养猪业造成巨大的经济损失。本研究通过分析已发表的 PCV 2的基因序列,找出 PCV 2 的特异性片段,研制了检测PCV 2的试剂盒。检测临床疑似病料,结果表明该试剂盒使用方便、快速、敏感、特异,符合国内的养殖场…     

一种基于数字免疫原理的伤寒沙门菌高灵敏度检测方法

目的 设计一种基于数字化免疫显色原理的检测方法,实现伤寒沙门菌的高灵敏度快速检测.方法 以伤寒沙门菌为检测对象,选取氨基磁珠对目标细菌进行富集,以偶联特异性抗体的量子点对目标细菌进行特异性荧光标记;设计制作反应腔室,在液相条件下完成对目标细菌的富集和特异性荧光标记;通过荧光显微成像和荧光特征自动提取,实现对目标细菌的"...