黄芩苷对肺癌细胞A549增殖和迁移的作用研究

肿瘤恶化的根本原因是肿瘤细胞的过度增殖和转移,黄芩苷作为一种黄酮类天然药物,对保护血管功能、抑菌、消炎等都具有良好的效果。本研究观察不同浓度黄芩苷对体外培养人肺癌A549细胞的增殖和迁移的作用,探讨黄芩对肿瘤细胞转移的调控作用,以期开发黄芩苷作为肿瘤抑制药物的重要潜能。将0μm/L、20μm/L、40μm/L、60μm/L、80μm/L和100μm/L的黄芩苷处理细胞6 h,采噻唑蓝(MTT)、Tranwell小室迁移、显微形态观察等细胞学方法检测不同浓度的黄芩苷对细胞增殖和迁移的影响。结果显示,与对照组相比,不同浓度的黄芩苷均能抑制肺癌细胞的增殖和迁移,且抑制作用呈剂量依赖效应,80μm/L和100μm/L的黄芩苷能显著抑制肺癌细胞的增殖效率(p0.01)。我们得出这样的结论,黄芩苷对肺癌细胞的增殖和迁移具有抑制作用,且抑制效果与药物使用剂量正相关,黄芩苷对于肿瘤治疗效果的研究具有重要意义,有望成为高效抑制肿瘤发生的候选药物。     

淫羊藿苷对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖、凋亡及迁移的影响

观察淫羊藿苷对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖、凋亡及迁移的影响。B16细胞经不同浓度的淫羊藿苷处理后,采用MTT法检测其对B16细胞增殖的影响,Hoechst 33258染色法观察B16细胞形态的变化,Annexin VFITC/PI双染法检测B16细胞凋亡率,Western blot检测细胞内Bax,Bcl-2和Caspase-3蛋白表达的改变。同时,细胞划痕实验及Transwell小室迁移实验检测淫羊藿苷对B16细胞迁移能力的影响。与对照组相比较,淫羊藿苷能明显抑制B16细胞的增殖,且具有浓度依赖性。B16细胞形态由树突状变为固缩圆球状,染色质凝集,细胞凋亡率升高,相关蛋白Bax和Caspase-3的表达升高,Bcl-2的表达降低。另外,淫羊藿苷对B16细胞的迁移能力也具有明显抑制作用,并呈现浓度依赖性。由此可知淫羊藿苷能有效抑制B16细胞的增殖,诱导细胞凋亡,降低细胞迁移能力。     

水通道蛋白AQP4对肺癌细胞增殖的影响

为了研究水通道蛋白AQP4对肺癌细胞增殖的影响及分子机制,本研究在肺癌细胞A549中,转染AQP4的si RNAs后,采用CCK-8试剂盒检测肿瘤细胞的增殖能力,采用Western blotting方法检测CCND1的蛋白水平,采用Real-time PCR方法检测CCND1的m RNA水平。研究表明,在肺癌细胞A549中,敲降AQP4的表达可以显著抑制肿瘤细胞的增殖能力,同时下调细胞周期蛋白CCND1的m RNA和蛋白水平。因此,AQP4可能成为肺癌治疗的潜在靶点。     

基于PTEN-PI3K-AKT信号通路探讨竹节参总皂苷抑制人肺腺癌A549细胞增殖和转移的机制

目的:竹节参是人参属植物,和人参成分相似,前期研究其对肺癌具有一定的抑制作用,但作用机制不清,因此,本项目拟研究竹节参皂苷对人肺癌细胞系A549增殖、迁移和侵袭能力以及PTEN-PI3K-AKT信号通路的影响。方法:CCK8法测定不同浓度和不同作用时间的竹节参皂苷对A549存活率的影响,划痕实验测定细胞迁移能力,Transwell小室测定细胞的侵袭能力,ELISA试剂盒测定培养基上清中MMP-2和MMP-9水平的变化。Western blot测定PTEN、P-PI3K和P-Akt表达的变化。结果:竹节参皂苷对A549细胞增殖具有明显的抑制作用,呈浓度和时间依赖关系,与对照组比较具有统计学差异。同时,竹节参皂苷可以浓度依赖性的抑制细胞侵袭和转移,以及MMP-2和MMP-9细胞因子的分泌。Western blot结果表明竹节参皂苷可促进PTEN蛋白表达,抑制P-PI3K和P-Akt蛋白表达,采用PTEN的特异性抑制剂SF1670证实竹节参皂苷通过抑制PTEN发挥作用。结论:竹节参皂苷可抑制肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭,以及分泌蛋白MMP-2和MMP-9表达,其作用机制可能是通过调控PTEN抑制PI3K和Akt磷酸化,从而发挥抗癌作用。     

红色诺卡氏菌细胞壁骨架对肺癌细胞的抗癌作用及机制

前人研究发现红色诺卡氏菌细胞壁骨架(N-CWS)具有较好的抗癌活性,然而其对肺癌的抗癌作用机制尚不清楚。本研究旨在揭示N-CWS对肺癌细胞的抗癌作用及机制。通过平板克隆形成实验测定N-CWS对人肺腺癌细胞系A549菌落形成的影响,发现N-CWS可按照浓度依赖性方式降低A549细胞的菌落形成能力(p0.05)。通过5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)法测定N-CWS对肺癌细胞增殖能力的影响,发现N-CWS可按照浓度依赖性方式降低EdU阳性细胞比例(p0.05)。通过Transwell小室和伤口愈合实验评估N-CWS对肺癌细胞侵袭和迁移能力的影响,发现N-CWS以A549浓度依赖性方式降低细胞的侵袭和迁移数量及伤口愈合百分比(p0.05)。通过qRT-PCR和Western blotting检测N-CWS对A549细胞E-cadherin、IL-6和MMP-9表达的影响,发现N-CWS以浓度依赖性方式上调了A549细胞的E-cadherin mRNA和蛋白表达(p0.05),但以浓度依赖性方式下调了IL-6和MMP-9的m RNA和蛋白表达(p0.05)。本研究证实红色诺卡氏菌细胞壁骨架可按照浓度依赖性方式降低肺癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力,其抗癌机制与上调E-cadherin和下调IL-6和MMP-9有关。     

基于网络药理学探究芍药苷治疗糖尿病视网膜病变的机制

本研究通过体外实验与网络药理学相结合的方法分析芍药苷治疗糖尿病视网膜病变的相关作用机制。制备高糖环境下视网膜血管内皮细胞的体外模型,探究芍药苷对糖尿病视网膜病变的保护作用;从TCMSP、 UniProt、 PubChem、 PharmMapper、 SwisstargetPrediction、 GeneCards、 OMIM、 DrugBank、 TTD数据库获取芍药苷和糖尿病视网膜病变的作用靶点,使用韦恩图获取核心靶点;基于STRING数据库,采用Cytoscape构建蛋白质-蛋白质相互作用网络和“药物-靶点-疾病”网络;应用DAVID数据库对核心靶点进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析,并用AutoDock软件将芍药苷与核心靶点进行分子对接验证。体外实验结果显示,芍药苷能显著抑制视网膜血管内皮细胞的增殖,降低其迁移能力并减少管腔形成长度。网络药理学结果显示共获取芍药苷治疗糖尿病视网膜病变的核心靶点154个,其中度值较高的靶点包括VEGFA、 IL6等。GO功能共富集到705个GO条目,主要涉及细胞对药物的反应、血管内皮细胞迁移的调节、细胞增殖的调节等生物过程;KEGG通路富集...     

MiR-425对血管平滑肌细胞增殖迁移的作用及分子机制

目的探讨miR-425对人主动脉平滑肌细胞增殖迁移的作用及潜在的分子机制。方法实时定量RT-PCR(qRT-PCR)检测人主动脉平滑肌细胞(human aortic smooth muscle cells, HASMCs)中miR-425的表达水平。转染miR-342inhibitor改变HASMCs中内源性miR-425的表达,采用CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖及周期的变化,Transwell检测细胞迁移能力;Western blot检测PTEN、PI3K、p-AKT/AKT、MMP-9的蛋白表达水平。结果血管紧张素Ⅱ(angiotensionⅡ,AngⅡ)可时间及剂量依赖性地促进HASMCs中miR-425的表达。转染miR-425 inhibitor可抑制AngⅡ对HASMCs的促增殖作用,并抑制细胞迁移,同时细胞中PI3K、p-AKT/AKT及MMP-9的蛋白水平显著降低,PTEN水平显著升高。结论沉默miR-425可通过调控PTEN/PI3K/AKT信号通路抑制人主动脉平滑肌细胞的增殖及迁移,提示miR-425可作为血管重构的一个潜在诊疗靶点。     

曲古霉素A抑制肺癌细胞增殖的分子机制

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A(trichostatin A,TSA)对人非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞增殖抑制作用及机制.方法:以不同剂量TSA(0.1μM,0.5pM和1μM)处理A549细胞.MTT法检测细胞增殖情况,碘化丙啶(PI)染色结合流式细胞仪检测细胞周期,Westem blot法检测P21蛋白表达,流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位和细胞凋亡.结果:TSA剂量依赖性抑制肺癌A549细胞增殖,表现为细胞周期阻滞于G2/M期,同时P21蛋白表达增高;此外,TSA还可以剂量依赖性的促进A549细胞凋亡,伴有线粒体膜电位下降.结论:TSA促进NSCLCA549细胞周期阻滞和凋亡,从而抑制其增殖.     

DADS对DJ-1核定位高表达人白血病HL-60细胞的影响（英文）

最近研究表明,DJ-1在许多肿瘤中过表达,而且DJ-1的核表达与肿瘤的生物学行为有关.本文主要研究二烯丙基二硫(DADS)对DJ-1核定位高表达人白血病HL-60细胞生物行为学的影响,阐明DJ-1在细胞核内的功能,为临床诊断及治疗过程提供一个潜在的治疗靶点.通过基因转染技术建立核内高表达HL-60细胞株(DJ-1/HL-60),利用软琼脂集落形成实验、 MTT法、间接免疫荧光细胞化学实验、硝基蓝四氮唑(NBT)还原比色实验评估HL-60细胞的增殖与分化,DJ-1核定位过表达促进HL-60细胞的增殖并抑制其分化. Transwell迁移侵袭小室实验表明DJ-1核定位过表达可以促进HL-60的迁移和侵袭能力. Western blot结果表明DADS具有抑制HL-60细胞中核内DJ-1蛋白表达的能力.说明DJ-1核定位高表达具有促进HL-60细胞增殖和迁移侵袭及抑制HL-60细胞分化的作用,DADS可以诱导DJ-1核定位高表达HL-60细胞分化及抑制迁移侵袭, DJ-1核定位高表达可减弱DADS抑制HL-60细胞增殖的作用.     

TMEM16A在上皮细胞中的表达和调控

TMEM16A(tranmenbrane protein 16A)作为一种已知的钙激活氯离子通道(calcium-activated chloride channel,CaCC)在机体中广泛表达,并介导多种重要的生理功能。在上皮细胞中,TMEM16A可以通过多级反应介导细胞的膜电位变化和液体分泌。此外,在多种炎症相关的上皮组织疾病如囊性纤维化、哮喘和急性胰腺炎中均发现TMEM16A表达上调的现象,调节TMEM16A的表达和通道活性可能是炎症治疗的一种潜在策略。研究TMEM16A在上皮细胞中的表达和调控机制,对阐明TMEM16A的生理病理功能具有重要意义。该文就上皮细胞中TMEM16A的研究进展进行综述。     

DADS对DJ-1核定位高表达人白血病HL-60细胞的影响

最近研究表明,DJ-1在许多肿瘤中过表达,而且DJ-1的核表达与肿瘤的生物学行为有关. 本文主要研究二烯丙基二硫（DADS）对DJ-1核定位高表达人白血病HL-60细胞生物行为学的影响,阐明DJ-1在细胞核内的功能,为临床诊断及治疗过程提供一个潜在的治疗靶点. 通过基因转染技术建立核内高表达HL-60细胞株（DJ-1/HL-60）,利用软琼脂集落形成实验、 MTT法、间接免疫荧光细胞化学实验、硝基蓝四氮唑( NBT)还原比色实验评估HL-60细胞的增殖与分化,DJ-1核定位过表达促进HL-60细胞的增殖并抑制其分化. Transwell迁移侵袭小室实验表明DJ-1核定位过表达可以促进HL-60的迁移和侵袭能力. Western blot结果表明DADS具有抑制HL-60细胞中核内DJ-1蛋白表达的能力. 说明DJ-1核定位高表达具有促进HL-60细胞增殖和迁移侵袭及抑制HL-60细胞分化的作用,DADS可以诱导DJ-1核定位高表达HL-60细胞分化及抑制迁移侵袭, DJ-1核定位高表达可减弱DADS抑制HL-60细胞增殖的作用.     

细柱五加茎中6种化合物体外对人肺癌细胞株A549的生长抑制作用

目的:观察细柱五加茎中6个化合物对人肺癌细胞株A549的抑制作用.方法:从细柱五加茎中提取得到16-α-羟-19-贝壳杉烷酸、16αH,17 - isovaleryloxy - ent - kauran - 19 - oic acid、贝壳杉烷酸苷A、紫丁香苷、松柏苷、刺五加苷D等6个化合物,采用MTT法测定其对人肺癌细胞株A549的生长抑制.结果:发现化合物16-α-羟-19 -贝壳杉烷酸、16αH,17 - isovaleryloxy - ent - kauran - 19 - oic acid、贝壳杉烷酸苷A、紫丁香苷、松柏苷对人肺癌A549细胞均具有不同程度的抑制作用,与空白对照相比具有显著性差异(P＜0.05).刺五加苷D对人肺癌A549细胞的增殖抑制率与其浓度成负相关,随着浓度的增加细胞生长抑制率不断降低.结论:6个化合物呈现不同的体外抗肿瘤作用,为细柱五加茎中的抗肿瘤活性成分.     

TGIF2调控胶质瘤细胞的增殖和迁移

目的探讨TGIF2在胶质瘤中的表达及其对A172胶质瘤细胞增殖和迁移的影响。方法原位杂交技术检测TGIF2 mRNA在小鼠胚胎不同时间点脊髓中的表达;用GSE16011数据库和中国人临床样本检测TGIF2在胶质瘤样本和非癌脑组织中的表达水平;利用shRNA技术下调A172胶质瘤细胞TGIF2的表达后,分别通过CCK-8分析、划痕试验、凋亡蛋白检测研究TGIF2对胶质瘤细胞增殖、迁移和凋亡的影响。结果原位杂交显示,TGIF2 mRNA特异性表达在小鼠E11.5和E13.5脊髓的室管膜区域;TGIF2 mRNA在胶质瘤样本中的表达显著高于非癌脑组织;沉默TGIF-2的表达能显著抑制A172细胞的增殖和迁移能力,促进细胞凋亡。结论 TGIF2mRNA在胶质瘤中高表达;TGIF2可以增强细胞的增殖和迁移能力,抑制细胞凋亡,可能是脑癌诊疗的一个潜在的靶点基因。     

RGD肽对肺癌A549 细胞增殖侵袭能力的影响及其机制研究

目的:研究RGD肽对肺癌A549细胞增殖凋亡及侵袭迁移的影响,并探讨其作用机制。方法:不同浓度RGD肽处理肺癌A549细胞后,MTT检测肺癌细胞的增殖能力,流式细胞仪检测肺癌细胞凋亡及周期分布,Transwell检测其迁移及侵袭能力的变化,Western blot检测RGD肽对肺癌A549细胞MMP2、MMP9的表达水平影响。结果:当RGD肽浓度增加至50 mg/L时,肺癌A549细胞增殖明显受到抑制,且这种抑制作用呈剂量依赖关系;RGD肽组A549细胞G0/G1期细胞比例增高,细胞凋亡率由(6.1±0.1)%增至(15.2±0.5)%;在迁移和侵袭试验中,RGD肽组A549细胞的穿膜细胞数分别由123±10和43±10降至45±5和18±5;RGD肽组A549细胞MMP2、MMP9表达水平显著降低。结论:RGD肽对肺癌A549细胞的增殖有明显抑制作用,并促进其凋亡,可能与RGD肽改变其周期分布有关,RGD肽可明显抑制A549细胞的迁移及侵袭,可能与其下调MMP2、MMP9的表达相关。     

重组蛋白rLj-112对人非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其机制研究

该文研究了重组蛋白r Lj-112对人非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其作用机制。采用MTT(四甲基偶氮唑蓝)法检测r Lj-112对人非小细胞肺癌A549细胞增殖的影响,采用Transwell方法检测r Lj-112对A549细胞迁移和侵袭的影响,Hoechst和吉姆萨染色的方法检测r Lj-112对A549细胞凋亡的影响;采用Western blot法检测r Lj-112对A549细胞信号通路相关蛋白质水平的影响。结果表明,r Lj-112能够抑制A549细胞的增殖,半抑制浓度IC50值为1.64μmol/L;r Lj-112能抑制A549细胞的迁移和侵袭并呈剂量依赖性;r Lj-112能诱导A549细胞的凋亡;r Lj-112处理过的细胞cleaved-caspase3蛋白质和cleaved-PARP蛋白质水平升高,证明r Lj-112通过caspase3/PARP途径执行对A549细胞的凋亡的诱导,p-AKT、p-PI3K和p-Erk1/2的水平下降,提示r Lj-112的作用方式与PI3K/AKT相关信号通路有关。     

和厚朴酚对人肺癌A2细胞增殖和凋亡的影响

本研究的目的在于研究不同浓度和厚朴酚对人肺癌A2细胞增殖和凋亡的影响,分析凋亡的可能机制。通过台盼蓝拒染法检测和厚朴酚对细胞增殖的影响,荧光显微镜下观察细胞形态的变化,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期的变化,qRT-PCR和Western blotting分别检测Bax、Bcl-2基因mRNA和蛋白表达情况。结果表明,在一定范围内,和厚朴酚对人肺癌A2细胞增殖有抑制作用且呈时间和剂量依赖性,其作用人肺癌A2细胞24 h、48 h和72 h的IC50值分别为44.03 nmol/L、26.51 nmol/L和19.54 nmol/L。不同浓度的和厚朴酚作用人肺癌A2细胞48 h后,细胞出现明显的凋亡特征,早期凋亡细胞增多,且G1期和G2期细胞减少,S期细胞增多。与对照组相比,Bax mRNA和蛋白表达均显著升高(p0.05),Bcl-2mRNA和蛋白表达均显著降低(p0.05)。本研究表明一定浓度范围的和厚朴酚能抑制人肺癌A2细胞增殖,诱导细胞凋亡且呈时间和剂量依赖性,并可上调Bax基因表达,下调Bc L-2基因表达。     

沙棘总黄酮抑制肺癌A549增殖和迁移作用及机理

为探究三种沙棘总黄酮(TFH)对非小细胞肺癌A549细胞增殖及迁移的影响,并探讨其分子作用机制,选择不同浓度的西藏沙棘(Hippophae tibetana Schlecht)、中国沙棘(H.rhamnoides L.subsp.sinensis Rousi)、肋果沙棘(H.neurocarpa)总黄酮作用于A549细胞。通过MTT检测细胞相对活力,平板克隆形成实验及软琼脂克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞仪AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡比例。选择效果最佳的西藏沙棘总黄酮应用细胞划痕实验及Transwell实验分析该化合物对肺癌细胞迁移侵袭能力的影响。Western blot检测MMP9、E-cadherin等侵袭迁移相关蛋白表达。敲低E-cadherin基因检测沙棘总黄酮对细胞迁移能力的影响。结果显示,三种沙棘总黄酮均对A549细胞系具有增殖抑制作用,抑制作用依次为:西藏沙棘中国沙棘肋果沙棘。西藏沙棘总黄酮可显著性抑制非小细胞肺癌A549细胞侵袭迁移能力(P0.05)。实验组中MMP9、MMP2、TGF-β、N-cadherin表达水平显著降低,E-cadherin表达水平上调。我们发现在A549细胞中敲低E-cadherin,西藏沙棘总黄酮可逆转迁移增加。以上研究表明西藏沙棘总黄酮对肺癌A549增殖抑制作用具有明显的优势,且西藏沙棘总黄酮可明显抑制肺癌A549细胞的侵袭迁移能力,并可能与下调细胞中的TGF-β抑制MMP9表达并阻止肺癌EMT有关。     

泛素偶联酶2C促进肺癌细胞增殖和迁移与抑制细胞衰老

泛素偶联酶2C与多种肿瘤细胞的增殖密切相关,但其与肺癌发生和发展的关系尚不明确。 本研究以肺癌A549细胞为材料,通过RT-PCR、Western印迹、免疫荧光、SA-β-Gal细胞衰老染色、细胞划痕和Trans-well实验,阐明UBE2C与肺癌细胞的增殖、衰老和迁移能力的关系。结果显示,UBE2C在肺癌细胞中的表达明显高于正常细胞。利用基因修饰技术瞬时过表达或靶向沉默UBE2C后,在肺癌A549细胞中,UBE2C的mRNA和蛋白质水平显著增加3.5倍或减少0.5倍,显著促进或抑制细胞增殖,进而减少或增加细胞的凋亡率。过表达UBE2C后,显著抑制细胞衰老;但沉默UBE2C后,则增加细胞衰老。此外,过表达UBE2C后,下调转移相关基因E-钙黏着蛋白的mRNA和蛋白质表达水平,且上调波形蛋白基因的表达水平,进而促进肺癌细胞的迁移。但靶向敲除UBE2C后,上调E-钙黏着蛋白,同时下调波形蛋白表达水平,进而抑制肺癌细胞的迁移。本研究的开展将明确UBE2C在肺癌中的作用及其机制,为以UBE2C为靶点,提高病人生存期提供了理论基础。     

白皮杉醇对子宫内膜癌HEC-1A细胞增殖、迁移和侵袭的影响

本研究旨在考察白皮杉醇(piceatannol, PIC)对子宫内膜癌细胞HEC-1A的初步抗肿瘤作用。分别通过CCK-8实验、平板克隆形成实验、流式细胞术、划痕损伤修复实验和Transwell小室实验检测不同浓度的PIC对HEC-1A细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响。Western blot实验检测细胞增殖相关蛋白和侵袭迁移相关蛋白的表达水平。结果显示，与空白组相比，PIC能显著抑制HEC-1A细胞增殖、克隆形成能力、诱导其凋亡并减少细胞迁移距离和侵袭细胞数(P<0.01),下调p-Akt、p-Erk1/2、p-p38MAPK、β-catenin、CD44和Slug蛋白的表达水平，上调E-cadherin蛋白的表达水平(P<0.01)。综上所述，PIC呈浓度依赖性抑制子宫内膜癌HEC-1A细胞的增殖、迁移与侵袭，其机制可能与抑制AKT/ERK/MAPK信号通路和影响Wnt/β-catenin信号通路和上皮-间质转化标志物的改变有关。     

新型大豆异黄酮磺酸酯抑制血管平滑肌细胞增殖活性研究

为了寻找对血管平滑肌细胞异常增殖有较强抑制作用的化合物,本文用MMT法考察新型大豆苷元磺酸酯体外抑制血管平滑肌细胞增殖活性.结果表明:该大豆苷元磺酸酯对血管平滑肌细胞增殖在10-7 mol/L时有抑制作用(P＜0.05),该浓度下的抑制率为56.06％,与先导化合物大豆苷元相比活性提高约1000倍.构效关系研究表明,大豆苷元经苯磺酸酯修饰,改变分子的空间结构、分子的可极化率从26.51增加到54.12,改变了药物的电荷分布,更有利于药物通过细胞膜到达靶标和与靶标更精确作用而导致药物药理作用大大增强.药理实验与构效关系研究初步表明,该大豆苷元磺酸酯有进一步研究价值.