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相似文献
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1.
分离到1株高产果胶酶菌株,经形态,生理以及生化指标鉴定,确认为枯草杆菌(Bacillus subtilis)并命名为枯草杆菌18。发酵液用90%硫酸铵沉淀,透析后的粗酶经CM-52柱层析,收集酶峰,再过ShephadexG-100得到部分纯化酶。该酶最适PH9.0,在PH9-11稳定,最适反应温度60℃,50℃加热50min保存60%酶活,60℃加热50min酶活则保存10%,酶的等电点(pI)4  相似文献   

2.
扩展青霉PF868变株发酵液经硫酸铵盐析和Sephadex-G-200及Sepharose4B柱层析纯化,获得纯化倍数为32.4的酶粉。该酶分子量为23442Dal,酶学特性表明:该酶的最适作用温度为32℃,50℃保温30min仍保留50%酶活性,最适pH为9.0,作用pH稳定范围在7.0-10.0之间,Ca^2+和Mg^2+对酶有激活作用,Fe^2+,Cu^2+和Mn^2+酶活力有抑制作用。  相似文献   

3.
地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)B.L JF-1d三级发酵的发酵液经离心去菌体,(NH4)2SO4分段盐析,透析后进行Sephadex G-100柱层析得粗酶制剂。比活力从1878U/mg提高到6795U/mg,酶活力回收率为35.3%。该酶水解酷蛋白的最适反应温度为55℃,最适pH为10.5,具有较高的热稳定性,对SDS有较强的耐受性。  相似文献   

4.
乳酶克鲁维酵母β—半乳糖苷酶的分离纯化及性质研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
乳酸克鲁维酵母经高压破壁后的粗提液,其β-半乳糖苷酶比活力为5.56u/mg.经硫酸铵沉淀,丙酮沉淀,PAPMA-Aepharose 4B柱层析后,乳糖酶比活力达370u/mg,纯化了66.2倍,SDS-PAGE鉴定为一条带,分子量85000Da。酶作用的最适pH在6.4-6.8之间,最适温度40℃,50℃保温15min酶活丧失90%,以邻硝基苯-β-半乳糖苷为底物的米氏常数为2.78mmol/L  相似文献   

5.
杨依军  李多川 《菌物系统》1997,16(4):300-306
嗜热真菌Thermomyes lanuginosusA236在液体培养基中50℃下静止培养14天,粗提酶液经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Toyopearl离子交换层析、Butyl-Toyopearl疏水层析,SephacrylS100凝胶过滤和FPLCMonoQ离子交换层析,得到了凝胶电泳均质的葡萄糖淀粉酶。酶促反应产物经TLC分析为葡萄糖,证明纯化的酶葡萄糖淀粉酶(EC3.2.1.3)。SDS-P  相似文献   

6.
枯草芽孢杆菌(Bacillus Subtilis)B135工程菌能产生抗氧化型碱性蛋白酶,粗酶经硫酸铵分级沉淀,CM-52层析,Sephadex G-100层析,得到凝胶电泳均一样品,比活达到1700U/mg,是粗酶比活的7.69倍.该酶在60℃时酶活力最高,最适pH为10.2,在50℃时,温浴10min后,酶活降低到原来的50%.该酶受1M H_2O_2作用20min后,仍保持96%的酶活  相似文献   

7.
豆壳过氧化物酶的分离纯化及其性质研究   总被引:30,自引:2,他引:28  
从豆壳抽提液经硫酸铵分级沉淀,DEAE-SephadexA-50离子交换层析,ConA-Sepharose4B亲合层析和Bio-GelP-60凝胶过滤,纯化了豆壳过氧化物酶(soybeanhulper-oxidase,ShP).纯化酶的比活力为7077U/mg,在SDS-PAGE上显示出一条蛋白质带.ShP分子量为38000,等电点为3.9;ShP为一含血红素的糖蛋白,含糖量为18.7%,光谱学分析揭示,在406nm处有一典型的Soret带,在510nm和640nm处有特征吸收峰.酶反应的最适pH在4.0附近,最适温度为45℃;在pH2.5~12.0之间较稳定,75℃,保温60min,酶活力残余68%,ShP是一种良好的耐酸碱、耐热过氧化物酶.动力学分析求得ShP的表观Km(愈创木酚)为1.62mmol/L,表现Km(H2O2)为0.34mmol/L.在所测定的化学试剂中,N-3、CN-、Fe3+、Fe2+和Sn2+对酶有较强烈的抑制作用,而重金属离子Ag+、Hg2+、Pb2+、Cu2+、Cr3+以及SDS和EDTA对酶活力无显著影响  相似文献   

8.
Metylomonassp.GYJ3菌的甲烷单加氧酶(MMO)粗酶提取液经DEAE-SepharoseCL-6B阴离子交换层析、SephadexG-100凝胶过滤层析和DEAE-TSKgelHPLC分离纯化出MMO还原酶组分.经HPLC分析,纯度大于95%,纯化倍数为4.4,加入至MMO羟基化酶和调节蛋白B的体系中表现比活为228nmol环氧丙烷每分钟毫克蛋白.SDS-PAGE电泳表明还原酶由一种亚基组成,分子量42kD.ICP-AES测定还原酶的Fe含量为1.83molFe每mol蛋白.UV-Vis光谱表明还原酶除280nm蛋白质特征峰外在460nm有最大吸收峰,且A280nm/A460nm为2.50,与其它黄素一铁硫蛋白相似,推测还原酶可能含一个FAD辅基和Fe2S2中心.在厌氧条件下,还原酶能够和NADH作用,UV-Vis光谱分析表明还原酶460nm处特征吸收峰消失,说明在MMO催化过程中还原酶接受NADH的电子.DEAE-SepharoseCL-6B阴离子交换层析分离出调节蛋白B,部分纯化的调节蛋白B的分子量大约在20kD,它能够提高MMO比活性40倍,MMO还原酶和调节蛋白B单独存在时不具有MMO  相似文献   

9.
蚕豆种子粗提液经乙醇-氯仿混合物处理、丙酮沉淀、DEAE-纤维素层析和Sepharose6B层析,获得比活性为2852单位mg-1蛋白的超氧物歧化酶.经聚丙烯酰胺凝胶电泳证明酶已纯化到均一程度.该酶对KCN和H2O2敏感,说明它为Cu,Zn-SOD.酶分子量和亚基分子量分别为31000和14400,说明它是由两个相同亚基组成。该酶在70℃以下和在pH5—9条件下稳定.紫外区最大吸收峰为273.5nm。  相似文献   

10.
海枣曲霉β—木糖苷酶的提纯和性质   总被引:1,自引:0,他引:1  
从海枣曲霉麦麸培养物抽提液中,通过聚乙二醇6000-磷酸钾缓冲液双水相分离,相继用Sephadex G-100凝胶过滤、DEAE-Sephadex A-50离子交换柱层析、羟基磷石吸附层析、DEAE-Sephadex A-50离子交换层析、SE-Sephadex C-50离子交换层析以及最适温度为65℃,在pH3.5-6.5之间稳定,酶保温30分钟时的半失活温度(t1/2)为68℃。酶的分子量为9  相似文献   

11.
以对硝基苯糖苷基为底物,测定了慈菇的12种糖苷酶,其中α-甘露糖苷酶、α-和β-半乳糖苷酶活力较高;经硫酸铵分级沉淀,SephadexG-150分子筛层析,ConASepharose4B亲和层析,DEAE-SepharoseCL-6B离子交换层析,从慈菇抽提液纯化了α-半乳糖苷酶。纯化酶的比活提高1072倍,活力回收15.6%,在圆盘聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS-PAGE上均显示1条蛋白质带,在α-半乳糖苷酶浓度为150mU/ml的溶液中测不到其他糖苷酶的活力。慈菇α-半乳糖苷酶的分子量用SephadexG-100凝胶过滤柱测定或在SDS-PAGE上测定均为60kD,酶反应的最适pH在5.8附近,最适温度为60℃。该酶分解对硝基苯基-α-半乳糖苷的K_m值为3.7×10 ̄(-4)mol/L,V_m值为2.1×10 ̄(-4)mol/L。银离子、汞离子显著抑制酶活力,D-半乳糖和密二糖均竞争性地抑制该酶水解对硝基苯基α-D-半乳糖苷的活力,根据Dixon作图求得其K_i值分别为0.92×10 ̄(-3)mol/L和1.98×10 ̄(-3)mol/L。2-脱氧-D-半乳糖和L-岩藻糖为酶活力的非竞争性抑制剂。化学修饰  相似文献   

12.
Meylomonas sp.GYJ3菌的甲烷单加氧酶(MMO)粗酶提取液经DEAE-Sepharose CL-6B阴离子交换层析,Sephadex G-100凝胶过滤层析和DEAE-TSKgel HPLC分离纯化出MMO还原酶组分,经HPLC分析,纯度大于95%,纯化倍数为4.4,加入至MMO羟基化酶和调节蛋白B的体系中表现比活为228nmol环氧丙烷每分钟毫克蛋白,SDS-PAGE电泳表明的酶由  相似文献   

13.
产碱性纤维素酶的嗜碱芽孢杆菌SHY8-5725发酵液经絮凝预处理后,采用混合盐析方法沉淀酶,盐析收率可达95%以上,所制得酶粉CMCase可达500u/g以上。酶的最适pH为8.0和10.5,稳定pH范围为4~12;最适温度为45℃(pH9.0,10min)稳定温度范围为50℃(pH9.0,30min)以下;洗衣粉中各种表面活性剂和助剂对CMCase基本无影响,酶的底物特异性表明,该碱性纤维素酶主  相似文献   

14.
圆弧青霉碱性脂肪酶的分离纯化和特性   总被引:3,自引:0,他引:3  
圆弧青霉突变株PG37 发酵液经离心、硫酸铵盐析、疏水层析、阴离子交换层析和凝胶过滤分离纯化得到了比活性为每毫克蛋白质5 200 u 的碱性脂肪酶, 纯化倍数16 .5 , 得率33.2% , 在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)上均呈现单一蛋白质条带。SDSPAGE 和凝胶过滤分别测得酶的分子量为27.5 kD和29 kD, 表明该酶以单体形式存在。N末端10 个氨基酸的序列测定结果为ATADAAAFPD, 与已知的碱性脂肪酶的N 末端序列没有同源性。酶学特性研究结果表明, 该酶的最适作用温度为25 ℃, 在30 ℃以下稳定,40 ℃处理20 min 仅残留30 % 酶活性;pH 稳定范围在6.5~10.5 , 最适pH 为10 .0 。低浓度的碱性蛋白酶对PG37 碱性脂肪酶活性的影响较小, 可同时添加在洗涤剂中。  相似文献   

15.
用正丁醇抽提,硫酸铵分级沉淀,DEAE-纤维素和SephacrylS-200柱层析,从南方鲇(Silurus meridionalis Chen)肠粘膜中提取出碱性磷酸酶(AKP)。提纯倍数为39.50倍,比活为68.35μ/mg蛋白,提取酶液经PAGE和SDS-PAGE只呈现一条区带。该酶的分子量为132140,N末端氨基酸为门冬氨酸,最适pH为10.10,7.5>pH>11.5时不稳定,最适温度为40℃左右,对热不很稳定,以磷酸苯二钠为底物其K_m值为1.72×10~(-3)mol/L。Mg~(2+)、Mn~(2+)为该酶的激活剂,KH_2PO_4、L-CyS、ME、DFP、EDTA-Na_2为抑制剂。选用KH_2PO_4和DFP作抑制类型的判断,结果表明,KH_2PO_4属竞争性掏剂,其抑制常数为2.3mmol/L;DFP为非竞争性抑制剂,抑制常数为1.05mmol/L。  相似文献   

16.
胞外青霉素酰化酶的纯化及部分理化性质   总被引:1,自引:0,他引:1  
巨大芽孢杆菌产胞外青霉素酰化酶发酵液经硫酸铵分级抽提及Sephadex G-100、羟基磷灰石、DEAE-纤维素DE52等层析步,提纯了青霉素酰化酶,得到电泳均一的酶制剂,纯酶比活力约为25U/mg蛋白,纯化49倍,活力回收58%,经PAGE及SDS-PAGE测知该酶不含亚基,其分子量约为140kD。该酶最适pH为9.0,最适温度47℃,用底物NIPAB测活,其Km值为6.2×10^-4mol/L  相似文献   

17.
从碱性污泥中分离到一株产碱性纤维素酶活力较高的耐碱性芽胞杆菌,所产的酶为单一的羧甲基纤维素酶,其专一性底物为羧甲基纤维素钠,酶的最适反应PH为9.0,在PH7-10.0范围内较稳定,酶作用的最适温度为55℃,在50℃时较稳定,在60℃处理,10、30、60和90分钟后,残余酶活分别为91.5%、72.0%、36.6%和10.3%。Co^2+,EDTA对酶促反应有明显的促进作用,Hg^2+,Ag^2  相似文献   

18.
南方鲇碱性磷酸酶的分离纯化及部分性质的研究   总被引:13,自引:0,他引:13  
用正丁醇抽提,硫酸铵分级沉淀,DEAE-纤维素和Sephacryl S-200柱层析,从南方鲇(Silurus meridionalis Chen)肠粘膜中提取出碱性磷酸酶(AKP)。提纯倍数为39.50倍,比活为68.35μ/mg蛋白,提取酶液经PAGE和SDS-PAGE只呈现一条区带。该酶的分子量为132 140,N末端氨基酸为门冬氨酸,最适pH为10.10,7.5>pH>11.5时不稳定,最  相似文献   

19.
麻蝇幼虫肠道蛋白酶BGP的分离纯化及性质   总被引:1,自引:0,他引:1  
棕尾别麻蝇幼虫肠液经SDS-PAGE后,X光片显影,呈现两条蛋白酶活性带.IEF后,两条蛋白酶活性带的等电点分别为pH7.7和6.8.麻蝇幼虫肠液经55%~75%硫酸铵沉淀,以及连续两次制备等电聚焦,分离纯化出等电点约为pH7.7,分子量约为35kD的蛋白酶BGP.该酶能分解酪蛋白和类胰蛋白酶专一底物Bz-Phe-Val-ArgNA,不能分解弹性蛋白酶专一底物elastin-CongoRed和类胰凝乳蛋白酶专一底物Suc(Ala)2Pro-PheNA.SBBI,Leupeptin和PMSF能强烈抑制其活性.专一底物和抑制剂的结果表明,BGP是一种类胰蛋白酶.其最适反应温度为50℃,最适作用pH为8.5.不耐高温,50℃保温30min活性急剧下降.Hg2+,Zn2+和Cu2+能抑制酶活性.Ca2+,Mg2+对酶无激活作用,EDTA无抑制作用.  相似文献   

20.
对硫磷真菌降解酶的分离纯化和性质   总被引:6,自引:0,他引:6  
刘玉焕  钟英长 《菌物系统》2000,19(3):377-382
黑曲霉Aspergillus niger Y-8在液体培养其中30℃培养5d,其菌体用超声波破碎后,经硫酸铵沉淀、DEAE-纤维素层析、Sephadex-100凝胶过滤,得到凝胶电泳均一的对硫磷降解酶,其比活为6.94,提纯倍数为13.6倍,收率为17.4%,酶作用的最适温度是50℃,最适PH为7.5,在40℃以下和PH6.0-9.0之间稳定,此酶为单亚基蛋白,凝胶过滤法测得分子量为42000,含  相似文献   

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