抗体捕捉ELISA法检测特异性IgM在流行性乙型脑炎诊断中的应用

用抗体捕捉ELISA法(Mac ELISA)检测了临床疑似流行性乙型脑炎病人109例,75例阳性,阳性率为68.8％。经与血凝抑制试验和2-ME处理试验进行比较,结果MacELISA查出的75例阳性中,血凝抑制试验和2-ME处理试验也阳性者54例,阴性者21例,说明本法较常规方法敏感。有6例病人在发病第1天就可测到IgM抗体。第一周的阳性检出率为83.8％。对正常人、其它疾病病人和类风湿因子阳性者的血清测试结果均为阴性。 本试验底物采用3,3′,5,5′-四甲基联苯胺(TMB)代替OPD,使方法的敏感性提高4～8倍。用NaN_3终止反应能保持蓝色数月不变,视差明显,易于肉眼观察。     

检测脊髓灰质炎IgM抗体捕捉法ELISA的建立及其在早期快速诊断中的应用

首次建立了用于脊髓灰质炎快速、分型诊断的血清IgM抗体捕捉法ELISA。检测了52例疑似病人,IgM阳性率为76.9％(40/52),而粪便病毒分离率仅为44.2％(23/52),前者的阳性检出率明显高于后者。做病毒分型诊断结果,与分离病毒中和试验定型的总符合率为92.86％(39/42)。检测601例来自全国各省的脊灰疑似病人血清,其阳性率波动于13％～92.3％,平均为61.1％。阳性率与收集血清的病日相关,发病0～3天收集者,阳性检出率为69.5％,4～25天者为64％,26～54天者为52％,55天以上者则未能检出。本检测方法需时1.5天,简便、敏感、特异,重复性良好,适用于脊灰的早期快速诊断。对其实用性进行了讨论。     

用细胞培养的流行性乙型脑炎病毒抗原做ELISA检测特异的IgG抗体

用C6/36细胞增殖流行性乙型脑炎(乙脑)病毒制备抗原,用ELISA法检测乙脑IgG抗体,可获得满意结果。用此法检测了河南,海南地区不同年龄人群的253份血清标本,阳性检出率为55.6％(141/253)。与血凝抑制法(HI)相比较,HI的阳性率仅37.1％(93/253)。两种方法的抗体滴度呈正相关r=0.88。用ELISA检测,乙脑抗体与登革病毒抗原有一定交叉,但滴度平均有16倍差异。本方法重复性良好,具有特异、敏感、简便的特点。可用于乙脑的诊断、流行病学调查和疫苗效果的考核。     

乙型脑炎病毒（JEV）ELISA检测方法的建立

目的建立猪乙型脑炎病毒（JEV）抗体ELISA检测方法。方法培养BHK21细胞,接种JEV病毒,制备BHK21正常抗原和JEV特异抗原,滴定酶结合物和抗原最佳工作浓度,并进行精密性、敏感性、稳定性、特异性实验。结果正常、特异抗原和酶结合物最佳工作浓度分别为0.2μg/mL、10μg/mL和1∶20000;正常、特异抗原批内变异系数分别为8.3%和6.4%,批间平均变异系数分别为9.7%和11.5%;检测灵敏度为1∶1280;与猪瘟病毒（CSFV）、猪细小病毒（PPV）均无交叉反应。稳定性试验相对偏差小于25%。结论建立的ELISA方法重复性、稳定性好,特异性、敏感性强。可用于猪JEV抗体的检测。     

ELISA检测流行性乙型脑炎病毒的研究——Ⅲ.联合应用微量细胞培养和ELISA法鉴定临床标本中流行性乙型脑炎病毒

临床疑似流行性乙型脑炎(简称乙脑)病人的血浆和脑脊液共41份,接种C6/36(白纹伊蚊纲胞系)培养后,用ELISA双夹心法检测培养液中乙脑病毒(JEV),其中16份(血浆和脑脊液各8份)为阳性,阳性率为39.5％。14份阳性标本按种小白鼠脑内后均出在典型症状而死亡,取脑组织作中和试验鉴定,表明14份病毒标本均为JEV。8例血浆病毒阳性者中7例血清IgM抗体阳性。说明本法检出的JEV是特异性的。可用于病毒的特异性快速鉴定。     

流行性乙型脑炎病毒E蛋白主要抗原域的原核表达与间接ELISA检测方法的初步建立

重组质粒pET-E转化宿主菌BL21,经1.0mmol/LIPTG诱导,外源基因以包含体的形式获得高效表达。通过Westernblotting检测证明表达产物具有良好的抗原性。以纯化后表达产物作为诊断抗原包被酶标板建立了检测JEV抗体的间接ELISA方法。结果表明,抗原的最佳稀释度为1:2000,血清的最佳稀释度为1:200,待检血清阳性标准初步定为:OD490nm>1.2,且待检血清与阴性血清的OD490nm比值大于2。     

快速IgM抗体捕捉ELISA的建立及其在乙脑早期诊断中的初步应用

用辣根过氧化物酶标记的抗日本脑炎病毒(JEV)种特异性单克隆抗体为结合物,建立了一种快速IgM抗体捕捉酶联免疫测定法(RMAC-ELISA),并初步用于乙脑的快速诊断,取得了良好的效果。该法通过用鞣酸预处理微板,提高反应温度,在稀释液中加入PEG并提高NaCl浓度,用鸡蛋清代替牛血清白蛋白或鸡血清,用自来水代替PBS作为洗液,用快速漱洗3次代替3×5分钟洗涤,用TMBS代替OPD底物,用酶标单克隆抗体代替多克隆结合物等措施,加快了反应速度,缩短了反应时间,简化了操作步骤,提高了敏感性,保证了特异性。从微板预处理至出结果,仅需1小时。由于该法具有简便、快速、特异、敏感等特性,不仅可以用于乙脑的早期诊断及实验室研究,还有可能推广到其它的免疫学检测方法中去。     

应用IgM-ELISA法进行流行性出血热早期诊断

用IgM-ELISA法检测115份不同病日的流行性出血热(EHF)患者血清,结果表明,发病5天内可测出EHF特异性IgM抗体,阳性率达87.5％,最高滴度达10~(?),本法特异性好,敏感性高于ELISA竞争法,不需特殊设备,与免疫荧光法相比,更适合基层推广使用。     

应用抗体捕捉ELISA法测定病毒特异性IgM抗体

本文以测定麻疹IgM抗体为模型,研究了应用抗体捕捉酶联免疫吸附法(Antibody capture ELISA简称ACELISA)测定病毒性疾病特异性IgM抗体的实验条件,结果表明;用于包被的抗μ链抗体、抗原,检测抗体的剂量对所测得的标本OD值都有不同程度的影响,其中以抗原的影响最大,不同株单克隆抗体(McAb)作检测抗体效果也有差别,最佳株与多克隆抗体(PcAb)相似,以本方法测定麻疹IgM抗体的敏感性和特异性很高,并不受类风湿因子的干扰。     

用捕捉ELISA法检测类脊髓灰质炎患者血清中肠道病毒71型IgM抗体以进行早期诊断

以肠道病毒71型(EV71)感染Vero细胞制备的EV71抗原,用于IgM捕捉ELISA法检测类脊髓灰质炎(类脊灰)患者血清中EV71 IgM抗体,特异性高,敏感性及稳定性良好。154例脊髓灰质炎(脊灰)病毒IgM阴性的可疑脊灰患者血清中EV71 IgM抗体阳性检出率为14.9％(23/154)。病后第2天的标本即可测出EV71 IgM,5至12天者抗体滴度较高,病后第40天的标本尚可测出EV71 IgM。本法是EV71感染的早期快速诊断方法,可用于与脊灰的鉴别诊断。     

捕捉法ELISA检测脊髓灰质炎IgA抗体方法的建立与应用

建立了一种检测脊髓灰质炎(简称脊灰)IgA抗体的捕捉法ELISA(Aac-ELISA)。方法敏感,快速,特异,用于检测144份脊灰可疑病人的血清,IgA抗体检出率为77.8％(112/144).而这些血清的IgM抗体检出率为65.2％(94/144)。如同时检测IgM和IgA抗体,则阳性率可达91.7％(132/144)。麻痹后1～3天内IgA的检出率为76.5％(13/17),4～7天内为95％(19/20)。最长检出IgA的一例可疑病人,其血清收集于病后第59天。本方法在一部分16天后可疑病人IgM阴性血清中查出IgA阳性,故可以作为查IgM抗体诊断方法的补充,尤其适用于诊断感染后未能及时收到血清标本,IgM已经转阴而IgA抗体仍为阳性的病人。     

间接FLISA法检测钩端螺旋体特异性IgM方法的探讨

为研制钩端螺旋体（钩体）特异性IgM检测试剂,并用于早期诊断钩体病,以钩体外膜蛋白为抗原,探索间接ELISA法检测钩体特异性IgM的各项实验条件,并对钩体病患者血清标本进行检测,结果,１０５份健康人血ＩgM阴性,钩体IgM阳性血清可被特异性阻断,２－巯基乙醇破坏试验阳性,试剂存放４℃和３７℃4天的检测结果基本一致,检测临床钩体病人112份血清,IgM阳性83份,阳性率74．11％,与常规TAT法基本一致,0－7病日的阳性率明显高于MAT法,说明该法检测钩体病IgM具有特异,敏感,快速,稳定,简便等优点,对钩体病早期诊断有一定的价值。