草鱼生长激素单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及鉴定

用经草鱼生长激素(gcGH)免疫的BALB/c小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(Sp2/O-Ag14)融合,经3次克隆化培养和ELISA筛选,得到7株阳性杂交瘤细胞株,其中2株为强阳性。交叉试验表明,这些杂交瘤细胞株所分泌的单克隆抗体(McAb)同大鳞大马哈鱼生长激素(sGH)、大鳞大马哈鱼促性腺激素(sGTH)及牛生长激素(bGH)均不起反应。小鼠腹水McAbs滴度高达1:1280000。受体-gcGH-McAb夹心试验表明,McAb确与有活性的gcGH有特异反应。用间接ELISA方法可检测到浓度为0.125#g/ml的gcGH。     

分泌抗脊髓灰质炎 Ⅱ型病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞系

许多年来细胞生物学家进行了很多有关细胞杂交的实验研究,将具有不同遗传特性的两种动物细胞进行融合,形成一种新的杂交细胞,用来进行特定基因在染色体上的定位、基因表达以及动物细胞其它遗传特性的变化等方面的研究。为了观察免疫球蛋白产生的遗传控制,许多实验室进行了小鼠骨髓瘤细胞与其它细胞系之间相互融合的试验。在这样的研究中,Khletr和Milstein 1975,1976)证明,培养的小鼠骨髓瘤细胞能够同用羊红血球免疫了的动物脾细胞发生融合,从中选择出少量的杂交瘤细胞,它可在体     

狂犬病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞系的建立

Wikter于1978年首先建立了狂犬病毒单克隆抗体(McAb),并用它发现了狂犬病毒株的抗原差异,而国内尚未见到有关狂犬病毒单克隆抗体的研究报道。为此,在建立快速检测狂犬病毒抗原和抗体的基础上又进行了狂犬病毒单克隆抗体的研究。 将感染狂犬病毒aG株(我国狂犬疫苗生产毒种)后发病的BALB/c乳鼠脑病毒免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0融合。融合率为95.7％(401/419),阳性克隆占26.8％。经克隆化     

乙型脑炎病毒单克隆杂交瘤抗体细胞系的建立及其应用于抗原性比较

本文建立了13侏乙脑单克隆抗体杂交瘤细胞系,对其中6株进行了特性研究,结果表明该6株中3株为乙脑病毒种特异性抗体,3株为乙脑病毒亚组特异性抗体。以免疫荧光技术对12株国内外分离的乙脑病毒进行了抗原性比较,结果表明我国分离的大多数病毒株间无明显的抗原性差异,但个别近年来分离的病毒侏如云南的Y-M60,福建的NY,湖南的X8103株与1949年北京分离的P_3株即目前用于灭活疫苗生产的病毒株间有一定的差异。我国的大多数病毒株与日本的中山(NaK)株则有明显的差别。此外,并发现2株单克隆抗体对我国的全部野病毒株有高滴度的强荧光反应而对14-2减毒株仅有十分微弱反应,甚至无反应。以上结果提示乙脑不同病毒株间存在抗原性差异,但是否有免疫保护上的抗原性差异尚待进一步研究。     

我国首次建立的植物病毒株系特异性杂交瘤细胞系在北京通过鉴定

<正> 中国农业科学院蔬菜研究所建立的“分泌马铃薯Y病毒株系特异性的单克隆抗体的杂交瘤细胞系”,于1984年12月29日在农牧渔业部科技司召开的鉴定会上通过鉴定。由北京农业大学裘维蕃教授等15位有关学科的专家组成的评委会认为,上述杂交瘤细胞系是国内首次建立的植物病毒株系特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞系,它所制备的单克隆抗体可用于马铃薯Y病毒株系的快速而准确的诊断。在马铃薯无病毒种薯生产中淘汰带病毒种薯、茎尖脱毒和抗病育种中将得到广泛的应用。并将对免疫学、植物病毒学和抗病育种等学科领域产生一定     

博尔纳病病毒抗原免疫的杂交瘤细胞系的评价

目的评价博尔纳病病毒(BDV)抗原免疫的杂交瘤细胞系的产生抗体能力与抗体特异性。方法随机抽取2株由BDV抗原免疫的杂交瘤细胞系H1和H2,通过体内和体外方法制备单克隆抗体,通过间接免疫荧光、免疫印迹和间接酶联免疫吸附3种试验方法对制备的抗体进行特异性鉴定及效价测定。结果杂交瘤细胞系H1和H2可以产生一定效价的单克隆抗体,并对BDV的P24和P40抗原具有特异性。结论由杂交瘤细胞系H1和H2产生的单克隆抗体可以用于检测BDV特异性抗原。     

大林姬鼠体内流行性出血热病毒的分离与鉴定

本文报告用A-549细胞从5份流行性出血热(EHF)免疫荧光(IF)阳性的中国东北林区的大林姬鼠鼠肺中分离出两株与EHF相关的病原体,现已稳定传至第10代。用第8代感染细胞制成滴片标本,经IF染色检查,细胞浆内有特异性颗粒荧光。并对其中一株(A54)进行了系统鉴定,经特异性阻断试验、过     

环磷酸鸟苷(cGMP)单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及其特性的鉴定

<正> 自从1975年单克隆抗体技术建立以来,已被应用在各个生物学领域中,国内外都尚未建立抗cGMP单克隆抗体的杂交瘤细胞株。我们为了获得更纯,特异性更高的抗cGMP抗体,对此项工作进行了探索,已筛选出能分泌抗cGMP抗体的杂交瘤细胞株,并进行了初步鉴定;现将工作简报如下: 用琥珀酰环磷酸鸟苷(ScGMP)与牛血清白蛋白相连后的化合物(ScGMP-BSA)为抗原免疫BALB/c小鼠,每月一次,共四次,最后一次为尾静脉连续注射三天,第四天将免疫     

产生抗登革热Ⅰ型病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用登革热Ⅰ型病毒(夏威夷株)兔疫的小白鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,获得7个产生抗登革热Ⅰ型病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞系,这些杂交瘤细胞上清液及小鼠腹水抗体均用间接兔疫荧光法检测,其中3个杂交瘤细胞系产生的抗体对登革热Ⅰ型病毒具有型特异性。     

抗TPO单克姓抗体杂交瘤细胞系的建立

用合成肽TPO作抗原,经腹腔免疫Bal b/c小鼠,鼠抗血清效价为1：1000,ELISA间接法测定的P／N值为3。取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞（SP2／10）在PEG作用下进行融合,细胞融合率达91％。通过ELISA筛选并经过3次亚克隆,获得了1株能分泌抗TPO抗体的单克姓杂交瘤细胞株,P／N值均高于8。     

分泌抗马铃薯Y病毒单克隆抗体的大鼠杂交瘤细胞系的建立及抗体稳定性测定

用大鼠的骨髓瘤细胞系(1R983)与经马铃薯Y病毒(PVY)免疫的大鼠(LOU／c)脾细胞融合,建立了3类分泌抗该病毒株系特异性单克降抗体(McAB)的杂交瘤细胞系。其一对 PVYn具有特异性反应,其二对PVYo。具有特异性反应;其三对PVY n和PVYn。均产生反应。经用ELIAA双抗体夹心法和ELlsA间接法检测,上述(McAb)同TMv、CMV、TEV,AMV、 TuMV、PLRV,PVX七种植物病毒均不产生交叉反应。对上述杂交瘸纲胞系和McAb的生 物学特性及理化特性进行了鉴定。     

分泌抗2b型福氏志贺氏菌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

志贺氏菌属是肠杆菌科中抗原关系较复杂的菌群之一,属内外不同菌间血清学交叉反应较普遍,以致难以应用现代免疫学技术进行快诊。单克隆抗体技术的出现,为制备高度特     

分泌抗—人甲胎蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系建立成功

<正>当前在临床上甲胎蛋白(AFP)已被确认为一种特异性较强的肿瘤标志物,并从基础上也研究了它的胚胎发育及癌变过程中基因表达、生物合成和分子构型的演变。抗—AFP单克隆抗体对原发性肝癌的临床诊断及上述基础研究都有重要的意义。     

中华鲟精巢细胞系的建立和鉴定

为了开展中华鲟(Acipenser sinensis)种质资源保存及其精原干细胞体外培养的研究, 采用蛋白酶消化法, 对中华鲟精巢组织细胞进行原代培养, 建立了中华鲟精巢细胞系(Acipenser sinensis testicular cell line, AST), 经352d传代培养, 已稳定传至80代。中华鲟精巢细胞系形态主要呈类纤维状, 培养基为DMEM, 培养温度为25℃, 最适血清浓度为15%。正常传代的AST细胞冻存、复苏后, 经台盼蓝染色, 约(81.36±1.13)%的细胞具有活性, 复苏后细胞仍生长旺盛。染色体核型分析结果显示, 第30代中华鲟精巢细胞系染色体数目分布在142—310, 众数为264。通过RT-PCR检测发现, 在P0和P1细胞中, Sertoli细胞特异表达基因(amh和gsdf)、Leydig细胞特异表达基因(cyp17a1)和生殖细胞特异表达基因(dazl、dnd和vasa)都有表达, 且表达量与精巢中的相似; 在P15、P30和P60细胞中, 只有amh和vasa基因有微弱的表达, 说明细胞系传代到了后期, 只含有极少量的Sertoli细胞和生殖细胞。通过脂质体转染法将pEGFP-N3质粒转入AST细胞中, 可表达增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein, EGFP)。AST细胞系的建立为中华鲟种质资源的保存、精原干细胞的体外增殖与分化、基因功能等研究提供了重要的实验材料。     

禽呼肠孤病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

禽呼肠孤病毒(Avian Reovirus,ARV)属呼肠孤病毒科的禽群,广泛分布于鸡群中,能从健康鸡和许多发病鸡体内分离到。已知与ARV有关的疾病有病毒性关节炎、溃疡性肠炎、慢性呼吸道病、心肝病损、肉鸡矮小综合症、蓝翅病等。ARV的存在给养鸡业造成了严重的危害。本试验利用淋巴细胞杂交瘤技术在国内首次建立了8株分泌ARV单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞,并对ARV4个毒株的抗原性进行了比较。 选用ARV的FDO株,在鸡胚原代成纤维细胞上增殖,免疫用和检测用病毒分别经差速离心和密度梯度离心纯化。按常规方法对6～8周龄BALB/c小鼠进行长程和短程(脾内直接注射)免疫,免疫鼠脾脏细胞与Sp2/0细胞胞以5:1的比例进行融合,克隆化培养和筛选后,从两次融合的70个阳性孔中获得C61、C74、     

小鼠杂交瘤细胞系的建立及抗兔IgG单克隆抗体的应用

经三次免疫一次细胞融合,得到分泌抗兔IgG的杂交癌细胞克隆27个。细胞融合率100％,阳性孔率4％。经筛选和克隆化培养建立了杂交瘤细胞系3C8E4和6A3H6,其免疫球蛋白分别为IgG2a和IgG3。3C8E4腹水抗体滴度超过1：1024000。 3C8E4除和兔IgG有反应外,还和人与马IgG有反应;6A3H6只和兔IgG有反应,与其它七种动物和人lgG无交叉反应。经用过碘酸盐法将3C8E4 Mab和辣根过氧化物酶标记,制得酶标抗体,当使用浓度为1：10000时,其OD>2．0。用该酶标记抗体ELISA法检测植物病毒PVX、PVY、TEV和 TuMV效果良好。     

可调控表达甲型流感病毒M2蛋白的哺乳动物细胞系的建立与鉴定

甲型流感病毒M2蛋白是一种具有离子通道功能的跨膜蛋白,其氨基酸序列非常保守,可用于流感通用疫苗的研究。为了构建可调控的稳定表达甲型流感病毒M2蛋白的哺乳动物细胞系,首先应用PCR方法从含有流感病毒PR8株第七节段全长基因的质粒中扩增得到M2基因。将该片段亚克隆到真核表达载体pcDNA5/FRT/TO上,用BamHⅠ和NotⅠ双酶切鉴定正确后将重组质粒与表达Flp重组酶的pOG44质粒共转染Flp-In T-REx-293细胞,使目的基因整合到宿主细胞染色体。筛选具有Hygromycin B抗性的细胞株。在该细胞的培养基中加入四环素以诱导目的基因表达,48 h后通过间接免疫荧光方法检测到M2蛋白的表达。共得到16株高表达M2蛋白的重组细胞株,这些细胞株在传10代后仍能稳定表达目的蛋白。未加四环素诱导的细胞没有检测到M2蛋白,说明四环素调控系统严格控制着目的基因的表达。今后,该细胞系可用于流感病毒M2蛋白的功能研究、流感候选疫苗的免疫学评价以及流感病毒减毒活疫苗的研制。