新生、成年和老年小鼠尾壳核、皮层运动区与脊髓中某些递质氨基酸含量的研究

用本实验室改进的超微量 DANS 反应-聚酰胺薄膜层析-荧光方法测定了新生、成年和老年小鼠尾壳核、皮层运动区和脊髓的递质氨基酸:GABA、牛磺酸、甘氨酸、谷氨酸、天冬氨酸和丙氨酸。实验结果表明,不同年龄小鼠中枢神经系统不同部位的“抑制性”和“兴奋性”递质氨基酸的含量不同:(1)尾壳核的“抑制性”递质 GABA 含量随年龄的增长而增加。在发育过程中“兴奋性”递质天冬氨酸、谷氨酸也显著升高,而“抑制性”递质牛磺酸含量却显著降低。老化时除 GABA 继续升高外,所测定的其他递质氨基酸皆无显著变化。(2)皮层运动区的“抑制性”递质牛磺酸和甘氨酸含量在发育过程中是降低的,而“兴奋性”递质谷氨酸显著升高。在老化时只有“抑制性”递质 GABA 继续升高。(3)脊髓的“抑制性”递质 GABA 和牛磺酸含量在发育过程中显著降低,而“兴奋性”递质天冬氨酸含量却显著升高。(4)由新生到成年,尾壳核、皮层运动区和脊髓的“抑制性”与“兴奋性”递质氨基酸总量的比值是降低的。成年小鼠的此比值近似于1,新生小鼠此比值(?)1。而老年小鼠的脊髓此比值<1。新生小鼠尾壳核的高比值可能在生物化学上反映了其在发育期的功能特点。     

在毫微升生物液体试样中二十二种氨基酸的同时测定

用~(14)C—丹磺酰基化作用和薄层层析法,同时测定了血管球及肾小管液毫微升试样中22种单一氨基酸、牛磺酸、5—羟基色髌及r—氨基丁酸。含有全部其它成分的每一种氨基酸混合物的校准曲线,在含量为5.7×10~(-13)至1.145×10~(-11)摩尔范围内,有极好的线性,回归系数都大于0.95。用丹磺酰基化作用仔细地校准,该法测定小于10~(-12)摩尔的氨基酸时,能有很高的再现性。     

新生、成年和老年小鼠大脑皮层突触小体神经递质氨基酸含量的比较研究

用DANS反应-薄膜层析-萤光方法测定了蔗糖密度梯度超离心制备的不同年龄小鼠大脑皮层突触小体中递质氨基酸的含量。实验结果表明:(1)不同年龄小鼠每克皮层组织中突触小体蛋白质含量不同。新生——5.68、成年——21.37、老年——19.14毫克/克脑组织湿重。(2)递质氨基酸含量以毫微克分子/克脑组织湿重表示时,GABA含量在发育期升高,到老年期又降低;牛磺酸含量由新生到老年期持续下降;谷氨酸、天冬氨酸含量在发育期升高,到老年期无明显变化。(3)突触小体中“抑制性”递质氨基酸总量与“兴奋性”递质氨基酸总量的比值(GABA Tau Gly/Glu Asp)随年龄增长而明显降低,成年的比值趋近于1。新——3.39、成年——1.06、老年——0.79。(4)老年小鼠皮层突触小体的蔗糖梯度区带明显分成两层。即除P_2B层外,出现明显的P_2B′层,其GABA、谷氨酸、天冬氨酸含量与P_2B层相比,分别降低24.2%(P<0.05)、50.4%(P<0.001)和44%(P<0.001)。     

新生、成年和老年小鼠大脑皮层突触小体神经递质氨基酸含量的比较研究

用DANS反应-薄膜层析-萤光方法测定了蔗糖密度梯度超离心制备的不同年龄小鼠大脑皮层突触小体中递质氨基酸的含量。实验结果表明:(1)不同年龄小鼠每克皮层组织中突触小体蛋白质含量不同。新生——5.68、成年——21.37、老年——19.14毫克/克脑组织湿重。(2)递质氨基酸含量以毫微克分子/克脑组织湿重表示时,GABA 含量在发育期升高,到老年期又降低;牛磺酸含量由新生到老年期持续下降;谷氨酸、天冬氨酸含量在发育期升高,到老年期无明显变化。(3)突触小体中“抑制性”递质氨基酸总量与“兴奋性”递质氨基酸总量的比值(GABA Tau Gly/Glu Asp)随年龄增长而明显降低,成年的比值趋近于1。新生——3.39、成年——1.06、老年——0.79。(4)老年小鼠皮层突触小体的蔗糖梯度区带明显分成两层。即除P_2B 层外,出现明显的P_2B' 层,其GABA、谷氨酸、天冬氨酸含量与P_B 层相比,分别降低24.2%(P<0.05)、50.4%(P<0.001)和44%(P<0.001)。     

用DANS反应-聚酰胺薄膜层析-荧光扫描法测定大白鼠脑中氨基酸

本文介绍采用改进的DANS反应一聚酰胺簿膜层析一荧光扫描方法,分离了22种氨基酸,并对大鼠脑中六种氨基酸进行了超微量测定,此法简便、灵敏。     

荧光胺的合成和应用

近几年来,在蛋白质化学研究中,分析微量化的重要方面之一是使用荧光方法。在氨基酸、多肽、蛋白质测定中,荧光胺(Fluorescamine)可与游离的氨基反应,产生荧光的物质,借此测定的灵敏度可提高达10~(-12) 克分子。荧光胺在柱层析、薄层层析中都可用来测定氨基酸和多肽;也有用作抗体荧光标记的荧光试剂。此试剂已有Hoffman-La Roche公司生产出售,由于此试剂价格昂贵,因而很多实验室都不能普遍使用。本实验室使用国内的现有试剂,参照了有关的方法尝试合成该试剂,现已初步合成。合成的试剂与进口的Hoffman-La Roche公司的产品作了比较,基本符合。并且就此试剂在溶液     

青霉素和苯巴比妥钠对小鼠全脑切片积聚~3H-GABA的影响

本文应用同位素示踪、脑片离体培育和侧脑室注射的方法,在体外和体内研究了惊厥剂青霉素和抗惊厥剂苯巴比妥钠对小白鼠全脑切片积聚~3H-GABA的影响。结果表明:(1)在含6.70—13.40×10~(-4)mol/L的苄青霉素钾(PG)100μl或19.60—39.20×10~(-4)mol/L的苯巴比妥钠(PhB)50μl的培育液(2ml)中,小鼠全脑切片对~3H-GABA的积聚作用明显降低(P<0.05)。6.70×10~(-4)mol/L的PG100μl和39.20×10~(-4)mol/L的PhB50μl同时注入培育液(2ml)时,脑片对~3H-GABA的积聚比PG单独试验时稍有升高。(2 )小鼠侧脑室注射20μl的 3.35×10~(-2)mol/L的PG可引起强烈的惊厥,脑片上的~3H-GABA积聚减少(P>0.05);脑室内注射10μl的3.88×10~(-2)mol/L的PhB能抗惊厥,也使~3H-GABA在脑片上的积聚减少(P>0.05);脑室内同时注射PG和PhB,使~3H-GABA在脑片上的积聚恢复正常。以上结果提示:青霉素可通过竞争突触后膜和神经末梢上的GABA受体,阻断GA-BA的突触后抑制效应及抑制GABA释放,显示惊厥作用;苯巴比妥钠也可和突触后膜上的GABA受体结合,产生GABA样作用或激活GABA受体,起抗惊厥作用。     

苦荞胰蛋白酶抑制剂的纯化及特性研究

利用固相胰蛋白酶亲和色谱及离子交换色谱,从苦荞种子中分离纯化了三个具有抑制胰蛋白酶活力的组份(BTI-Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ)。经聚丙稀酰胺凝胶等电聚焦测定,三种抑制剂的等电点为6.87,6.7,5.14。根据Sephadex G-75凝胶过滤,SDS-PAGE测定,以及由当量抑制比值和氨基酸组份的推算,它们的分子量范围分别为5200-5700(Ⅰ),5500—6000(Ⅱ),5000—5600(III)。三者对胰蛋白酶的抑制常数分别为2.12×10~(-8),4.78×10~(-9),1.22×10~(-8)。氨基酸分析结果表明,它们均含有很高的极性氨基酸。在酸性条件下,它们均具有很高的热稳定性。化学修饰的结果表明,它们活性中心的氨基酸残基为Lys。     

蔗糖-葡萄糖双功能酶传感器的研究

结合蔗糖转化酶(INV)酶管与葡萄糖氧化酶(GOD)-葡萄糖变旋酶(MUT)双酶电极构成一种新的蔗糖传感器。该传感器可以分别用于蔗糖及葡萄糖的测定。蔗糖经酶管作用产生α-D-葡萄糖,再用COD-MUT双酶电极定糖。若是样品中蔗糖和葡萄糖共存,比较样品流经不同路径(Ws和Wg)时传感器的响应值,可以排除葡萄糖对蔗糖测定的干扰。传感器的最适pH和温度范围分别为:5.0—6.5和30—40℃。在稳态法实验中,传感器的线性范围为:2.5×10~(-4)—5×10~(-3)mol/L。传感器的重复性很好,CV<1％。该传感器在用于测定发酵培养基(含葡萄糖)的蔗糖含量,平均回收率为97.9％。传感器与糖度计法测定的相关系数为0.997。传感器至少可以稳定使用8天以上。     

新疆伊犁五个少数民族的近亲结婚

1983年4月至1984年5月,对新疆伊犁哈萨克自治州五个民族的近亲结婚情况进行了调查。调查的婚姻数为维吾尔2553起,哈萨克1079起,回1235起,锡伯1222起,蒙古446起。近亲结婚率与平均近交系数分别为:维吾尔——8.23％与 46.74×10~(-4),回——8.10％与45.07×10~(-4),锡伯——4.66％与24.93×10~(-4),哈萨克——2.87％与11.31×10~(-4)。蒙古——0.45％与 2.80×10~(-4)。解放以来,维吾尔族与回族的近亲结婚率有上升趋势,而锡伯族的则有下降趋势。各族近亲结婚中大部分为亲表亲结婚,但堂亲结婚在维吾尔族的近亲结婚中竟占26.18％,在回族中也占16.00％。1303名近亲结婚子女中的七岁前死亡率(12.89％)及先天性缺陷与遗传性疾病发生率(2.99％)显著高于6370名非近亲结婚子女的相应值(7.65％及0.38％)。     

X-线离体照射人体淋巴细胞诱发的染色体畸变:剂量-效应关系的研究

本文研究了180千伏X-线离体(in vitro)照射人体淋巴细胞诱发染色体畸变的剂量-效应关系。全血样本在离体条件下(恒温37±0.5℃)接受不同剂量(0—465拉特)照射。用微量血培养技术培养48—56小时,观察和分析的中期细胞均为受射后的第一次有丝分裂。按WHO的标准识别各类染色体畸变,用最小二乘方作泊森方差和加权迴归分析,对实验资料配以4个剂量-效应关系模式:Y=a_1 b_1D,Y=a_2 c_2D~2,Y=a_3 b_3D c_3D~2和Y=b_4D~n。结果表明,双着丝点体最适于配二次多项式,a_3=0(迴归线通过原点),Y=(0.52±0.18)·10~(-3)D (4.71±0.67)·10~(-6)D~2;也适于配幂函数,Y=7.10·10~(-5)D~(1.59±0.08)。双着丝点体 着丝点环同样适于配以上二个模式,分别为Y=(0.51±0.21).10~(-3)D (5.02±0.77)·     

人血清中游离氨基酸的萤光微量测定法

本文介绍用邻苯二甲醛与氨基酸产生萤光微量测定人血清中游离氨基酸含量的方法。灵敏度可测到1至0.1×10~(-9)克分子氨基酸。每次测定的血清用量为5至10微升。本法具有简单、快速、灵敏的优点。血清中其他含氨物质如脲、尿酸、肌酐和氨对测定无干扰。我国正常人血清的游离氨基酸含量,从52个人测得的平均值为2.83±0.45(S.D)毫克分子/升。此法适用于临床检验和科研。     

人血清中游离氨基酸的萤光微量测定法

本文介绍用邻苯二甲醛与氨基酸产生萤光微量测定人血清中游离氨基酸含量的方法。灵敏度可测到1至0.1×10~(-9)克分子氨基酸。每次测定的血清用量为5至10微升。本法具有简单、快速、灵敏的优点。血清中其他含氮物质如脲、尿酸、肌酐和氨对测定无干扰。我国正常人血清的游离氨基酸含量,从52个人测得的平均值为2.83±0.45(S.D)毫克分子/升。此法适用于临床检验和科研。     

用NAG酶活性荧光测定法检测3T3细胞增殖及其应用

设计采用NAG酶活性荧光测定法检测3T3细胞增殖,本实验确立了检测3T3细胞NAG酶活性的一些实验条件,并将该方法用于bFGF的生物活性鉴定。结果:(1)3T3细胞数目在10~3-1.5×10~5之间与NAG酶活性成直线关系,且检测下限细胞数目低达10~3个细胞,表明该方法灵敏度高。(2)接种3T3细胞密度以10~3-1.5×10~3/孔(96孔培养板)为宜。(3)维持3T3细胞正常成活的最适血清浓度为0.4％—0.8％。(4)检测3T3细胞NAG酶活性以样品刺激培养48h为宜。(5)bFGF样品与标准品一样能促进3T3细胞增殖,但bFGF样品生物活性较bFGF标准品差。结论:NAG酶活性测定法能用来检测3T3细胞增殖,该方 法优于以往的细胞计数法、~3H—TdR参入法。     

大鼠海马CA1区GABA能神经元在睡眠调节中的作用

采用脑立体定位技术确定Sprague-Dawley大鼠(Rattus norregicus)双侧海马CA1区插管位置并进行核团埋管,同时安装脑电和肌电电极,用于记录大鼠皮层脑电活动和肌电活动。运用睡眠描记技术观察海马CA1区微量注射药物后对大鼠睡眠-觉醒周期的影响。发现海马内微量注射0.75μg、1.0μg的γ-氨基丁酸(GABA)后觉醒时间增加,分别为(120.7±13.3)min和(124.6±19.2)min(P0.05),睡眠时间减少,分别为(119.4±13.3)min与(115.4±19.2)min(P0.05),其中,深慢波睡眠时间(SWS2)分别减少53.3%(t=2.451,P0.05)和63.5%(t=3.367,P0.01);而微量注射1.0μgGABAA受体阻断剂荷包牡丹碱(Bic)后,睡眠时间增加(165.5±20.8)min(P0.01),觉醒时间减少(74.5±20.8)min(P0.01),其中,SWS2时间增加79.6%(t=2.600,P0.05),并可对抗GABA的促醒效应;微量注射GABAB受体激动剂氯苯氨基丁酸(Bac)对睡眠-觉醒周期无直接影响,亦不能阻断GABA的促醒效应。结果提示,GABA在海马参与大鼠睡眠-觉醒周期的调节且具有促觉醒作用,GABA对睡眠的影响主要是通过改变深慢波睡眠成分实现的,GABAA受体参与介导了这一过程。     

高效液相荧光法测定大鼠脑内氨基酸类神经递质方法的改良

目的 改良测定大鼠脑组织氨基酸类神经递质的反相高效液相色谱荧光法.方法 改良使用磷酸盐-甲醇-乙腈作为流动相,反相高效液相色谱洗脱,高丝氨酸作为内标,邻苯二甲醛柱前衍生和荧光检测器,检测大鼠大脑皮质、海马、纹状体、中脑、小脑和下丘脑6个脑区中天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺(G1n)、甘氨酸(Gly)、γ-氨基丁酸(GABA)和牛磺酸(Tau)6种氨基酸类神经递质含量.结果 6种氨基酸在20 min内洗脱完全,分离效果良好;在6.25～ 400 μmol/L浓度范围有较好的线性关系,其相关系数不低于0.99;6种氨基酸日内试验精密度范围为1.38％ ～7.59％;日间试验精密度为2.7％～8.68％;6种氨基酸回收率不低于80％.结论 改良后的反相高效液相色谱荧光法灵敏度较高、重复性好,能有效分离检测大鼠脑组织分区中氨基酸类神经递质含量.     

不同年龄大鼠大脑皮层神经元胞体与胶质细胞递质氨基酸含量的比较研究

用非连续 Ficoll-蔗糖密度梯度超离心方法分离幼年、成年和老年大鼠大脑皮层的神经元胞体和胶质细胞。观察到以幼年大鼠为材料分离得到的神经元胞体和胶质细胞纯度高;而以成年、老年大鼠为材料分离得到的神经元胞体和胶质细胞则有少量污染。用 Dans 反应-聚酰胺薄膜层析-荧光方法测定神经元胞体和胶质细胞中的 GABA、甘氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、牛磺酸含量。发现:(1)幼年与成年大鼠神经元胞体的递质氨基酸含量少于胶质细胞中的含量。老年大鼠的这种差异不显著。(2)由幼年到成年,胶质细胞中的牛磺酸含量显著下降,而神经元胞体中的牛磺酸含量无显著变化。(3)由幼年到成年,神经元胞体与胶质细胞中的“抑制性”与“兴奋性”递质氨基酸总量的比值皆下降50%左右。本文讨论了神经元胞体和胶质细胞的分离纯度及这两类细胞的“抑制性”与“兴奋性”递质氨基酸含量比值的年龄特点。     

微波消解-石墨炉原子吸收光谱法测定大鼠组织中的微量硒

目的:建立微波消解石墨炉原子吸收光谱法(GFAAS)测定大鼠组织中的微量硒的检测方法.方法:采用微波消解法处理样品,用硝酸作为消解剂进行微波消解;采用氯化钯则作为基体改进剂来测定样品中的微量硒.结果:最佳灰化温度为900℃,原子化温度为2500℃;脑组织和肺组织的相对标准偏差(RSD)分别为2.83％和3.05％,样品加标回收率为97％～105％.结论:该方法用于检测大鼠组织中的硒含量,操作简便、快速、准确度好、结果满意,能够适用于生物体内多种组织器官中硒含量的测定与分析.     

人类胎儿和肝癌甲种胎儿蛋白(AFP)物理化学性质的比较

本文比较了胎儿AFP和肝癌AFP的物理化学性质,所测指标未发现本质差异。实验测得紫外吸收峰在278毫微米,消光系数E_(1厘米)~(1%)5.20±0.06。分子量71000左右。等电聚焦观察到AFP至少有两种形式,pI值分别为4.7和5.25±0.05。75.5℃热失活动力学参数:失活速度常数k7.29x10~(-5)秒~(-1),活化能E~≠95.4千卡/克分子,活化热焓ΔH~≠94.7千卡/克分子,活化自由能ΔF~≠27.2千卡/克分子,活化熵ΔS~≠193卡/度·克分子。分子量为71000的AFP分子可能由一条多肽链组成,二硫键对维持其免疫化学活性起重要作用,溴化氰裂解可得到分子量不等的七个多肽片段。     

蓖麻β-半乳糖苷酶的纯化及其基本性质

蓖麻籽黄化苗中存在高活性β-半乳糖苷酶。经硫酸铵分级分离、DEAE-纤维素离子交換层析、Sephadex G-100、CM-Sephadex和DEAE-Sephadex层析纯化。活性收率为6.4％,纯化倍数达107倍。纯化了的酶经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示单一蛋白带,SDS-PAGE显示两条蛋白带,其相应分子量分别为3.25×10~4和2.94×10~4。用Sephadex G-200分子筛层析法测得分子量为6.7×10~4。综合上述结果推测该酶是由两个不同的亚基构成。以邻硝基苯酚-β-半乳糖苷为底物测得该酶的表观Km为5.9×10~(-3)mol/L。最适pH和最适温度分别为4.5和50℃。酸碱稳定区域在pH4.6—7.5之间。不同浓度缓冲液以及不同种类缓冲液、不同金属离子对酶活性影响均进行了讨论。