应用~3H-胸腺嘧啶核苷测定血淋巴细胞转化的方法

本文介绍了应用微量血液测定DNA合成的方法:0.1毫升肝素抗凝血液灌入3毫升含PHA的Fagle’s生长培养液中,培养54小时后注入~3H-TdR 0.6微居里,再培养16小时,吸弃上清液,沉淀用生理盐水洗涤两次,5％三氯醋酸洗一次。然后沉淀加0.5毫升5％三氯醋酸置90℃水浴15分钟,离心后吸取上清液0.2毫升加到5毫升闪烁液中进行测量。闪烁液配方:PPO 3克,POPOP 0.4萘克、110克、二氧六环1000毫升。10例健康人血平均~3H-TdR掺入率为10.8％。     

~3H-TdR测定人胚造血组织的功能

关于人胚胎时期的造血组织已有许多研究,其造血功能随胎龄不同有着特殊的时相变化。我们从动物实验得知,胚肝是旺盛的造血器官,利用标记化合物的参入证明胚肝细胞的造血功能是非常活跃的。但是对人类造血细胞的生理特性和代谢功能特性了解得仍不     

哇巴因对人血管内皮细胞死亡和钠泵α1、β1,亚单位表达的影响

目的：研究钠泵抑制剂哇巴因（ouabain）对人血管内皮细胞死亡的影响及其作用机制。方法：以脐静脉内皮细胞系ECV304为靶细胞,应用MTT实验检测哇巴因对细胞生长的作用 采用Hoechst33342/PI双荧光染色、透射电镜和DNA琼脂糖凝胶电泳等分析细胞死亡特征,半定量RT-PCR法检测钠泵α1和β1亚单位mRNA的表达。结果：哇巴因以浓度和作用时间依赖的方式抑制ECV304细胞生长。10μmol/L哇巴因作用24 h,引起细胞坏死 0.1μmol/L哇巴因作用24～48 h,细胞明显脱落,细胞间连接丧失,细胞出现染色质凝集、分布于核膜内缘、DNA裂解等凋亡特征。哇巴因能明显上调ECV304细胞钠泵α1亚单位mRNA的表达,下调β1亚单位mRNA表达,且两者均呈时间依赖性。结论：哇巴因能诱导人血管内皮细胞ECV304死亡,其上调钠泵α1亚单位表达、下调β1亚单位表达,可能与亚单位介导信号传递、降低细胞黏附有关。     

~3H-酪氨酸与大鼠离体黄体细胞的结合

用孕马血清促性腺激素和hCG处理25—28d龄未成年雌性大鼠,造成超排卵并形成黄体,取hCG处理后7d的黄体制备黄体细胞。将黄体细胞与~3H-酪氨酸一起孵育(24℃,45min)后,~3H-酪氨酸能与黄体细胞特异结合,~3H-酪氨酸浓度为7.5μmol/L时达到饱和,在4℃孵育10min条件下仍有~3H-酪氨酸的结合。用哇巴因抑制酪氨酸向细胞内的转运后,~3H-酪氨酸的特异结合依然存在,放线菌酮也不能影响~3H-酪氨酸结合。这些结果证明,酪氨酸能与黄体细胞特异结合,并提示酪氨酸的结合位点存在于细胞膜上。     

自制的人尿红细胞生成素活力测定 Ⅰ、多血小鼠红细胞~(59)Fe掺入法

红细胞生成素(Erythropoietin,以下简称EPO)是高等动物及人类造血活动中一个十分重要的生理调节因子。在临床研究中,EPO活力测定有助于对各种原因引起的贫血或多血症的鉴别诊断;在红系造血祖细胞体外培养研究中,EPO是一个不可缺少的刺激因子。因此EPO活力测试在临床血液病和实验血液学研究中都是一个重要的、有应用价值的研究课题。     

利用~(13)C同位素示踪方法测定O_3对水稻C固定和迁移的影响

本研究设置2个臭氧浓度处理,即空气对照(CK,臭氧浓度约4～10 nL·L-1),臭氧浓度升高处理(O3,8 h平均浓度为110 nL·L-1),利用13C同位素示踪的方法,模拟研究了臭氧浓度升高对水稻碳固定和迁移的影响。结果表明:臭氧浓度升高后减少了植株对13C的固定,两次标记时臭氧处理下植株总的13C固定分别比对照处理低37.8%和20.0%;臭氧浓度升高处理1个月和2个月后叶片的13C分配相对于对照而言分别提高了47.3%和37.5%;而臭氧处理则降低了茎和根中的碳分配;臭氧浓度升高后叶的库强有明显的提高,而根的库强则明显降低,茎的库强虽有所降低但不明显;臭氧处理1个月和2个月后植株叶片的相对吸收能力分别比对照显著提高了48.5%和93.3%,臭氧处理下根的相对吸收能力则显著降低。     

人红细胞生成素受体胞外区克隆及序列测定

人红细胞生成素受体 (h EPOR)是人红细胞生成素的作用配体 ,其胞外区是 h EPO的作用域 ,它的克隆、表达对两种分子的相互作用机制以及 EPO类似物 (新型造血药物 )的筛选都有十分重要的意义。以人胎肝为材料 ,通过对其总 RNA的提取 ,利用 RT- PCR方法扩增 h EPOR的胞外区基因和跨膜区基因及推导相应的氨基酸残基排列 ,结果与国外文献报道相比较从而检验其正确性。     

测定粒单系集落刺激因子的~3H-TdR掺入的微量培养方法

在小鼠骨髓细胞体外微量液体培养中,通过观察DNA合成时~3H-TdR掺入量的变化,来测定粒单系祖细胞的增殖状态。实验结果表明:此方法具有培养周期短,操作较简单,节省培养材料和被测样品量少等优点。在与体外半固体琼脂CFU-GM培养法相配合中,能正确反应出被测样品对粒单系祖细胞的增殖状态和增殖能力。     

~3H-硝硫氰胺在血吸虫体内分布的放射自显影的研究

硝硫氰胺有较好的杀血吸虫效果,研究它在虫体内的分布,对探讨其杀虫机制有一定意义。 ~3H-硝硫氰胺O_2N—(?)—NH—(?)—NCS比放射性强度为1.9居里/毫克分子,制成储存丙酮溶液1毫居里/毫升。放化纯度在99％以上。 用两只感染血吸虫尾蚴约1 1/2月的小白鼠,按80毫克/公斤给予非氚标记的硝硫氰胺加500微居里氚标记硝硫氰胺,一次灌胃完毕。后分别在灌药两小时及24小时后断头处死,从其肝内取出已肝移的     

离子对反相HPLC测定人红细胞PRPP合成酶活性

红细胞PRPP合成酶是红细胞内核苷酸代谢的关键酶,它参与嘌呤核苷酸的从头合成与补救合成途径,催化ATP与5-磷酸核糖（R5P）反应生成PRPP与AMP,而PRPP则是嘌呤嘧啶核苷酸合成途径的一个关键性中间产物．Stocchi等[1]采用离子对反相高效液相色谱法（IPrHPLC）测定红细胞内ATP,ADP．AMP含量,曾获得满意的谱峰分离效果．Sakuma等[2]应用rHPLC法测定了正常人及痛风等患者红细胞的PRPP合成酶活性,我们将Sakuma等的测酶技术与IPrHPLC法相结合,改用单液等度洗脱,达到了操作简便和灵敏、准确的要求．1材料和方法1．1试剂…     

人红细胞封闭影泡的分离及其封闭度的测定

五十年代,Teorell等证实红细胞影泡在等渗条件下能“再封闭”,此后,封闭影泡就成为研究生物膜结构与功能的不对称性及细胞膜对介质的通透性等问题的重要材料。近几年来,红细胞影泡作为一种携带药物或核酸的载体,已初步应用于医药临床或遗传工程技术,受到人们的重视。关于封闭影泡的制备和性质Schwoch和Passow已有评述。他们提出影泡是不均一的。为了分离纯化影泡制剂,Bodemann曾采用蔗糖梯度离心法。我们考虑到蔗糖的渗透压效应,改用葡聚糖作介质,对按Steck方法制     

收缩活动促进新生大鼠培养心室肌细胞的~3H-亮氨酸掺入和细胞生长

本工作应用培养的新生大鼠心室肌细胞,以~3H-亮氨酸掺入、细胞直径和细胞体积为指标,观察了收缩活动对心肌蛋白质合成速率及细胞生长的影响。在含10％血清的培养介质中,常钾搏动组的心肌细胞(CMC)的~3H-亮氨酸掺入显著高于高钾停搏组的心肌细胞(QMC),24h的掺入量分别为1229±29与1076±60cpm/10~5细胞(每组n=5,P<0.01),CMC掺入为QMC的114.2％。QMC组细胞直径和体积分别为15.14±0.42μm和1842±123μm~3,而CMC组为16.82±0.64μm和2495±210μm~3,分别比前者高11.1％和35.5％(P<0.01,每组n=6)。这些变化随培养时间的延长更趋明显,但两组间的细胞数目并无显著差异(P>0.05)。上述结果表明:收缩活动本身能促进心肌细胞蛋白质合成和细胞生长。     

人红细胞带3蛋白胞质段的克隆及其表达

人红细胞带3蛋白胞质段(cytoplasmic domain of band 3, cdb3)起着将膜与膜骨架、细胞内环境相联系的重要作用. 以带3蛋白全长基因为模板,用PCR方法扩增出cdb3片段,克隆至pRSET表达质粒上,转化大肠杆菌BL21(DE3). 转化菌经诱导表达出较高含量的cdb3蛋白,纯化后,测得对醛缩酶有抑制活性.     

测定浮游植物光合作用速率的~(14)C方法

如何提高测定浮游植物光合作用速率的准确性,一直是一个引起讨论的问题。放射性同位素法(~(14)C法)虽然被认为是比较好的方法,但其在国内尚未得到广泛地应用。我们在实验中发现,用一般直接制样技术的     

人红细胞生成素受体的研究进展

人红细胞生成素受体(hEPOR)是位于相对成熟阶段人体红系祖细胞表面的跨膜蛋白,它能专一性结合人红细胞生成素(hEPO),将促进细胞生长、增殖和分化的信号传导到膜内,该过程涉及了hEPOR自身及部分相关蛋白的磷酸化.hEPOR具有一些与其功能相关的保守结构,它的氨基酸序列与鼠EPOR(mEPOP)高度同源.EPOR因为膜外R129C突变或结合特定蛋白质而具有组成型活性.EPOR还与红白血病等多种血液病密切相关.     

La~（3＋）与人红细胞相互作用的细胞电泳研究

用细胞电泳的方法研究了Ｌａ３＋与人红细胞表面的相互作用,并与Ｃａ２＋等金属离子进行比较。结果表明,Ｃａ２＋对红细胞表面ｚｅｔａ电位影响很小,而Ｌａ３＋能使红细胞的ｚｅｔａ电位明显减小,甚至使ｚｅｔａ电位从负转变为正。Ｃｕ２＋对红细胞ｚｅｔａ电位的影响比Ｌａ３＋还强。     

麝的数量估计方法

麝(Moschus moschiferus Linnc)是著名的药用动物。摸清它们的数量,对于合理利用这项资源,具有重要的意义。本文介绍一种简易估计它们的数量的方法。 依生境不同,选取样方,进行数量调查。例如,我们曾选取了两块样方,计阴暗针叶林一块,面积为9.7公顷及高山栎林一块,面积为4.9公顷(调查面积曾用1:500,000的林班图进行核对)。每块样地观察了6次。求出平均每次的单位面积数量(只/次),作为相对数量的指标。观察时间皆在早晨7:30—9:30。观察者4—6人,人员固定。准确纪录所遇见的只数及其发现地点,填入平面图中。分析全部结果,确定样地的实际数量。本例所求得的单位面积数量为0.04±0.01只(见表1)。