胞浆型磷脂酶A2介导弱氧化修饰低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡

探讨弱氧化修饰低密度脂蛋白(MM-LDL)能否诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡以及胞浆型磷脂酶A₂(cPLA₂)在此过程中的作用.MTT法测定细胞存活率;相差显微镜、荧光显微镜和流式细胞仪检测细胞凋亡;³H-花生四烯酸(³H-AA)预标法测定PLA₂活性;蛋白质印迹检测cPLA₂磷酸化;激光共聚焦显微镜检测单个细胞内钙离子浓度的变化.结果表明,MM-LDL(100～300 mg/L)作用后的HUVECs呈现凋亡典型的形态特征,凋亡率随MM-LDL浓度的增加而上升.MM-LDL能引起胞内钙离子浓度增加,cPLA₂的活化及磷酸化.15 μmol/L AACOCF₃和5 mmol/L EGTA在抑制cPLA₂活性的同时,部分抑制MM-LDL诱导的HUVECs凋亡.加入外源性AA(50 μmol/L)能逆转AACOCF₃引起的凋亡抑制.结果提示,cPLA₂参与了MM-LDL诱导HUVECs凋亡的信号传递.     

土贝母苷甲对人脐静脉内皮细胞凋亡和肿瘤诱导的血管生成的影响

研究了土贝母苷甲(下称苷甲)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelialcells,HUVECs)凋亡和肿瘤诱导的血管生成的影响.包括:MTT法检测苷甲对HUVECs生长的影响;荧光显微镜观察苷甲作用下HUVECs的形态变化;流式细胞术分析苷甲对HUVECs周期及凋亡的影响:聚碳酸酯膜小室(Transwell model)趋化运动模型检测苷甲对HUVECs运动能力的影响;鸡胚绒毛尿囊膜(chick embryochorioallantoic membrane,CAM)试验检测苷甲对人鼻咽癌细胞(humannasopharyngeal carcinoma CNE-2Z cells,CNE-2Z)诱导的CAM血管生成的影响;免疫组化法检测苷甲对BALB/c裸小鼠Lewis肺癌组织微血管密度(microvessel density,MVD)和血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)和血小板源生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)表达的影响.苷甲明显抑制HUVECs的生长,其抑制效果与剂量和作用时间相关,苷甲作用HUVECs 24、48,72 h其IC50值分别为24.2、21.4、17.9 μmol/L;苷甲作用下HUVECs发生周期阻滞,呈现典型的凋亡特征,20.0 μmol/L苷甲作用12、24、36 h HUVECs的凋亡率分别为11.4%、20.8%、25.3%;20.0 μmol/L苷甲处理HUVECs 24 h,对细胞迁移抑制率为58.4%;苷甲抑制CNE-2Z细胞诱导的CAM血管生成,并与剂量相关;苷甲应用后瘤组织MVD明显减少,VEGF、bFGF、PDGF表达下调.苷甲有明显的抑制血管生成活性,其抑制血管生成作用与诱导血管内皮细胞凋亡,抑制其运动能力,下调VEGF、bFGF和PDGF的表达有关.     

二苯乙烯苷抑制过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡

目的:研究二苯乙烯苷(TSG)对过氧化氢(H2O2)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的保护作用。方法:运用四甲基偶氮唑盐还原法(MTT法)和流式细胞术筛选建立细胞凋亡模型的H2O2合适浓度以及检测不同浓度TSG对H2O2诱导HUVECs的增殖率和凋亡率;Hoechst33258染色观察细胞凋亡形态。结果:MTT及流式法筛选300μmol/L为H2O2作用于细胞的最适凋亡浓度。MTT和流式结果显示,与H2O(2300μmol/L)损伤组比较,10μmol/L与100μmol/LTSG预处理组细胞的增殖率增加(P<0.05),凋亡率显著降低(P<0.01);Hoechst33258染色观察TSG能降低H2O2诱导的细胞凋亡,使细胞凋亡数减少。结论:TSG能抑制H2O2诱导的HUVECs凋亡,从而起到保护血管内皮细胞的作用。     

雷公藤单体T10对Aβ1-42所致PC12细胞凋亡的抑制作用

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是发病率最高的中枢神经系统退变性疾病.目前AD的病因不清,亦无有效的防治手段,其重要的原因是尚无适宜的AD模型.因此,本实验首先建立了PC12细胞系β淀粉样蛋白(p-amyloid,Aβ)细胞损伤模型,在此基础上,探讨了中药免疫抑制剂雷公藤单体T10对细胞的保护作用及其机制.首先用不同浓度的Aβ(5×10、5×10-3、5×10-2、5×10、5、50 μmol/L)与PC12细胞共孵育48 h,用MTT法检测细胞存活率.选取Aβ致使细胞存活率降低的浓度(0.5、5、50 μmol/L)与PC12细胞共孵育48 h,通过流式细胞仪检测凋亡细胞百分比.用1×10-11mol/L的T10预孵育PC12细胞48 h后,加入50μmol/L Ap共孵育48 h,亦用流式细胞仪检测凋亡细胞百分比,激光共聚焦显微镜检测细胞内钙离子浓度变化.结果显示,Aβ的浓度存50μmol/L时可使细胞存活率降低至55.1%,凋亡细胞比例显著增加,而1×10-11mol/L的T10可明显降低50 μmol/L Aβ诱导的PC12细胞死亡.50 μmol/L Aβ可促进PC12细胞胞外钙离子内流,1×10-11mol/L的T10对Ap诱导的胞外钙离子内流有抑制作用.这些观察结果表明T10对Ap导致的PC12细胞损伤具有明显的保护作用,其机制可能与抑制Aβ诱导的胞内钙离子浓度升高和细胞凋亡有关.     

CGRP抑制AngⅡ诱导HUVECs的损伤及其ERK1/2信号通路

目的:探索降钙素基因相关肽(CGRP)对经血管紧张素Ⅱ (AngⅡ)损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用且CGRP与细胞外信号调节激酶(ERK1/2)的关系.方法:不同浓度的CGRP、AngⅡ处理体外培养的HUVECs,噻唑蓝比色法检测HUVECs活力;流式细胞仪分析HUVECs凋亡率及其增殖指数;显微镜观察HUVECs的形态学变化;Western blot检测p-ERK1/2的表达.结果:AngⅡ (0.1-100 nmol/L)浓度依赖性降低HUVECs的活力,而CGRP (0.1-1000 nmol/L)浓度依赖性增加HUVECs的活力;HUVECs增殖指数PI值受AngⅡ、CGRP及PD98059(ERK1/2抑制剂)影响;AngⅡ孵育HUVECs在第10min时ERK1/2磷酸化水平可达到最大;CGRP能抑制AngⅡ诱导的HUVECs内ERK1/2磷酸化水平;CGRP8-37(CGRP受体拮抗剂)可部分减弱CGRP抑制ERK1/2磷酸化水平作用;PD98059(ERK1/2抑制剂)作用下,ERK1/2磷酸化水平显著降低,但是对细胞内总ERK1/2水平表达无明显影响.结论:CGRP可抑制AngⅡ对HUVECs的损伤作用,可能与CGRP抑制信号通路ERK1/2有关.     

喷托维林对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

[目的]研究枸橼酸喷托维林对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响。[方法]采用不同浓度(60、75和90μmol/L)的枸橼酸喷托维林处理HepG2细胞48 h,应用MTT(噻唑蓝)法测定细胞的增殖活性,再检测乳酸脱氢酶(LDH)活性,Hoechst 33258染色法检测细胞的凋亡情况。[结果]枸橼酸喷托维林能以浓度依赖的方式抑制HepG2细胞的增殖。对照组与处理组之间LDH活性比较均无显著性差异(P0.05)。而75μmol/L枸橼酸喷托维林处理48 h能够显著诱导HepG2细胞凋亡。[结论]枸橼酸喷托维林可显著抑制肝癌HepG2细胞增殖,这与其诱导细胞凋亡途径有关。     

棉酚对Jurkat T细胞增殖与凋亡的影响

研究棉酚(gossypol)对Jurkat T细胞增殖和凋亡的影响及可能机制.将不同浓度的棉酚作用于Jurkat T细胞,用MTS比色法检测细胞存活率;以膜联蛋白V-PE染色分析细胞凋亡;用Hoechst33342染色观察核形态:用荧光染料Mitocapture结合流式细胞术和激光共焦显微镜检测线粒体跨膜电位变化.结果显示棉酚作用Jurkat T细胞24 h、48 h、72 h,其IC50值分别为77.2μmol/L、57.3 μmol/L、23.3 μmol/L,对细胞的抑制作用与药物存在时间-剂量依赖关系;终浓度为8、16、32 μmol/L的棉酚处理24 h后的细胞凋亡率分别为5.30%、15.20%、51.19%,对照组凋亡率为3.43%;高浓度棉酚作用后大量细胞核呈现染色质固缩、核碎裂和致密浓染等凋亡特征;随着浓度增加细胞线粒体跨膜电位明显降低.研究表明棉酚能有效抑制Jurkat T细胞增殖和诱导其发生凋亡,并呈现出时间-剂量依赖关系,其诱导凋亡的作用可能依赖于线粒体途径.     

蝙蝠葛碱拮抗缓激肽引起的钙稳态改变 及细胞骨架蛋白的异常磷酸

为研究蝙蝠葛碱 (dauricine , Dau) 拮抗缓激肽 (bradykinin , BK) 诱导的 Alzheimer 样钙稳态失衡及细胞骨架蛋白异常磷酸化的作用,采用双波长荧光分光光度计测定细胞内钙离子浓度 ([Ca2+] i) ,用 MTT 法检测细胞代谢水平,用免疫组织化学方法观察 tau 蛋白表达和磷酸化 . 结果表明,Dau (3 μmol/L , 6 μmol/L) 可抑制 BK 诱导的 [Ca2+]i 升高,保护 BK 引起的神经元代谢降低,拮抗 BK 引起的 tau 蛋白异常磷酸化和聚集 . 结果提示： Dau 可拮抗 BK 诱导的 Alzheimer 样钙稳态失衡及细胞骨架蛋白异常磷酸化的作用 .     

盐酸异丙嗪对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究盐酸异丙嗪对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用不同浓度(15、23和31μmol/L)的盐酸异丙嗪处理HepG2细胞48 h,应用噻唑蓝(MTT)法测定细胞的增殖活性,检测乳酸脱氢酶(LDH)活性,Hoechst33258染色法检测细胞的凋亡情况。结果:盐酸异丙嗪能以浓度依赖的方式抑制HepG2细胞的增殖,23μmol/L盐酸异丙嗪处理48 h能够显著诱导HepG2细胞凋亡;对照组与处理组之间的LDH活性无显著性差异(P0.05)。结论:盐酸异丙嗪可显著抑制肝癌HepG2细胞增殖,这与其诱导细胞凋亡途径有关。     

姜黄素联合西达本胺通过下调AKT磷酸化和上调p53表达调控SKM-1细胞增殖和凋亡

该文探讨了姜黄素联合西达本胺对SKM-1细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。体外培养SKM-1细胞,取对数生长期细胞用于后续实验。对照组予以常规培养,实验组分别用不同浓度(1、5、10、20、40 μmol/L)姜黄素、不同浓度(0.5、1、2、4、8 μmol/L)西达本胺和不同浓度(5、10 μmol/L)姜黄素联合不同浓度(0.5、1、2、4、8 μmol/L)西达本胺处理细胞,采用CCK-8法检测各组细胞增殖活性,CompuSyn软件计算联合指数(combination index,CI),流式细胞术检测各组细胞周期分布和凋亡情况,Western blot检测各组细胞CDK2、p16、Caspase-3、AKT、p-AKT、p53和γH2A.X的蛋白表达水平。结果显示,在检测浓度范围内,姜黄素和西达本胺以时间浓度依赖性的方式抑制SKM-1细胞的生长。联合使用时,5 μmol/L姜黄素与2 μmol/L西达本胺具有协同抑制细胞增殖的作用。流式细胞术结果显示,5 μmol/L姜黄素联合2 μmol/L西达本胺组的细胞周期明显阻滞于G_0/G_1期,细胞凋亡率显著高于对照组和单独用药组。Western blot结果显示,与对照组相比,联合用药组的CDK2蛋白表达水平和p-AKT/AKT比例显著下降,而p16、Caspase-3、p53和γH2A.X的蛋白表达水平显著增高。综上,姜黄素联合西达本胺可显著抑制SKM-1细胞增殖,阻滞细胞周期,并促进细胞凋亡,其机制可能与抑制AKT磷酸化和上调p53表达有关。