宫颈癌患者HPV16/18型病毒感染及阴道菌群观察

目的 探讨宫颈癌与人乳头瘤病毒(HPV)感染高危型HPV(HPV16/18)表达及阴道菌群的关系。 方法 回顾性分析我院2018年1月-2020年1月收治的37例宫颈癌患者的临床资料,将其设为宫颈癌组。纳入同期于我院治疗的43例宫颈上皮内瘤变(CIN)患者的临床资料设为CIN组。比较两组基础资料(年龄、绝经情况、孕次、产次、HPV16/18阳性表达、阴道菌群、饮食卫生习惯和家族遗传史)差异,并对有差异信息进行赋值,以多因素Logistic回归模型分析宫颈癌发生的危险因素。 结果 经单因素分析,两组患者年龄、绝经情况、孕次和产次比较,差异无统计学意义(P>0.05);宫颈癌组HPV16/18阳性、阴道菌群失调、饮食卫生习惯较差以及存在家族遗传史患者数显著多于CIN组(P结论 宫颈癌发生危险因素较多,临床应针对存在危险因素的患者加强监测并给予相应干预从而降低宫颈癌发生风险。     

HPV16+治疗性无佐剂蛋白疫苗—HPV16Z- Hsp65-E6/E7的构建、表达及纯化工艺研究

目的：研制针对我国宫颈癌高危相关的HPV16型的治疗性无佐剂蛋白疫苗。方法：应用PCR技术自我国山西宫颈癌高发现场分离到的毒株-HPV16z中获得E6/E7转化基因片段,自卡介苗菌株中克隆获得Hsp65基因片段,对E6/E7基因片段定点突变修饰,构建pET28a-Hsp65-E6/E7表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达融合蛋白,并研究重组蛋白的纯化方案和工艺。结果：成功构建pET28a-Hsp65-E6/E7重组表达载体,E6/E7突变位点正确,融合蛋白在亲和层析柱上正确复性和初步纯化,经阴离子交换色谱纯化后蛋白纯度达到95%。结论：该研究为无佐剂治疗性重组蛋白疫苗Hsp65-E6/E7的进一步功能研究奠定了基础。     

新型RNAi 载体抑制HPV16E6 基因在人宫颈癌细胞Caski 中的表达

目的:利用自行构建的一种基于Semliki森林病毒的新型RNAi载体pSFV-RNAi Ready,验证将其用于短期高效沉默HPV16E6基因的效果。方法:以HPV16E6为靶标基因,设计并构建基于pSFV-RNAi Ready的重组质粒,分直接电击转染和病毒颗粒共培养两种方式转入人宫颈癌细胞株Caski,RT-PCR、Western blot检测HPV16E6表达水平。结果:重组质粒对HPV16E6沉默效果优于常规RNAi质料载体,接近化学合成小RNA,抑制率可高达90%以上,10天后效果仍然存在;结论:新型RNAi载体pSFV-RNAi Ready可较好地应用于特异高丰度靶基因的表达抑制,有望用于未来的科学研究或治疗应用。     

新型RNAi载体抑制HPV16E6基因在人宫颈癌细胞Caski中的表达

目的：利用自行构建的一种基于Semliki森林病毒的新型RNAi载体pSFV-RNAi Ready,验证将其用于短期高效沉默HPV16E6基因的效果。方法：以HPV16E6为靶标基因,设计并构建基于pSFV-RNAi Ready的重组质粒,分直接电击转染和病毒颗粒共培养两种方式转入人宫颈癌细胞株Caski,RT-PCR、Western blot检测HPV16E6表达水平。结果：重组质粒对HPV16E6沉默效果优于常规RNAi质料载体,接近化学合成小RNA,抑制率可高达90%以上,10天后效果仍然存在;结论：新型RNAi载体pSFV-RNAi Ready可较好地应用于特异高丰度靶基因的表达抑制,有望用于未来的科学研究或治疗应用。     

免疫印记法检测宫颈脱落细胞中HPV16/18 E6蛋白的意义

目的用免疫印记法检测宫颈脱落细胞中人乳头瘤病毒（HPV）16/18型E6蛋白的表达,从而为探求一种简捷、无创的诊断宫颈癌及其癌前病变的新方法提供理论依据。方法采用免疫印记法（Western blot）检测112例宫颈脱落细胞标本中HPV16/18 E6蛋白的表达,并以导流杂交检测标本中HPV DNA作为对照。结果在宫颈癌组和CINII/Ⅲ组,HPV16/18 E6蛋白的表达水平（75%、67.5%）明显高于正常对照组（5%）,P（0.05;而CINI组（31.5%）与正常对照组比较,HPV16/18 E6蛋白表达的差异无统计学意义,P=0.05。结论宫颈脱落细胞中HPV16/18 E6蛋白的过度表达与宫颈癌及CINII/Ⅲ的发生密切相关;利用免疫印记法检测脱落细胞中HPV16/18 E6蛋白对宫颈鳞癌及CINII/Ⅲ的诊断及无创性筛查具有重大意义。     

MALDI-TOF-MS技术检测宫颈癌中HPV感染状态

目的:本研究拟评MALDI-TOF-MS技术在HPV分型中的实际应用效果.方法:采用MALDI-TOF-MS技术检测河南安阳地区94例宫颈癌样本中HPV感染状态,并与普通PCR方法得到的结果相比较.结果:94例宫颈癌组织中HPV感染率为92.6%,共检测到10种常见的高危型别,以16为主,其次是58和18型.样本单一HPV型别感染为主,其中16型单一型别感染占6I.7%,见多种型别和组合的多重感染.与普通PCR检测结果比较发现两种方法样本HPV(不分型)检测一致率为95.7,样本HPV16型检测一致率为93.6%.结论:MALDI-TOF-MS技术能够精确、快速、高通量的对宫颈癌中HPV进行检测和分型.     

腺病毒载体介导的HPV16E7基因沉默及其对宫颈癌CaSki细胞的影响

目的:构建利用RNA干扰技术沉默HPV16E7基因的腺病毒载体,并探讨其对人宫颈癌细胞系CaSki细胞增殖的影响,以及腺病毒载体在宫颈癌基因治疗中的可行性。方法:利用腺病毒载体介导的RNA干扰对CaSki细胞中HPV16E7蛋白的表达进行抑制。显微镜观察细胞病变情况。MTT实验用来检测腺病毒载体感染的CaSki细胞的增殖情况。结果:成功构建了用以介导CaSki细胞中HPV16E7基因沉默的腺病毒载体。腺病毒感染后的CaSki细胞发生典型病理变化,HPV16E7基因表达受到明显抑制,细胞分裂明显减慢。结论:腺病毒载体介导的RNA干扰能够特异性的沉默HPV16E7基因,抑制CaSki细胞的增殖,为腺病毒载体用于宫颈癌基因治疗的可行性提供了依据。     

人乳头瘤病毒与宫颈癌关系研究进展

宫颈癌是一种严重危害女性健康的恶性肿瘤,其发病率较高,位居女性恶性肿瘤的第二位,仅次于乳腺癌。自从1977年德国学者ZurHausen等从宫颈癌标本中发现了人乳头瘤病毒(Human papillomavirus HPV)DNA,并推测HPV感染与宫颈癌发生有关后,许多学者对HPV与宫颈癌的相关性进行了大量的研究,并证实HPV感染是宫颈癌发病的必需因素。目前,对于宫颈HPV感染检测有多种手段,其中聚合酶链反应(PCR)和捕获杂交技术在实验室中应用较广泛。在宫颈癌筛查中联合应用HPV检测和细胞学,不仅可以提高敏感性,而且还可以减少随诊频率,从而大大降低了宫颈癌的发生。     

PTEN、HPV16/18-E6蛋白和雌激素受体在宫颈腺癌中的表达及其临床意义

目的：探讨宫颈腺癌组织中抑癌蛋白PTEN、人乳头瘤病毒（HPV）16/18-E6蛋白和雌激素受体（ER）的表达及其临床意义。方法：采用免疫组织化学S-P法对65例宫颈腺癌组织进行PTEN、HPV16/18-E6蛋白和ER检测,对30例慢性宫颈炎组织中HPV16/18-E6蛋白和ER的表达进行检测。结果：宫颈腺癌组织细胞核中PTEN的表达显著低于癌旁宫颈腺上皮组织（P〈0.01）,96%的宫颈腺癌细胞核呈低表达,而仅35%的癌旁宫颈腺上皮呈低表达（P〈0.01）;HPV16/18-E6蛋白和ER在宫颈腺癌中的阳性表达率分别为32.1%与49.4%,均显著高于慢性宫颈炎组织（P〈0.01）;HPV16/18-E6蛋白和ER的表达与宫颈腺癌的病理学分级、临床分期无关,在宫颈腺癌中的表达呈正相关。结论：PTEN在宫颈腺癌的发生中起一定的作用,其抑癌作用环节可能在细胞核水平;部分宫颈腺癌的发病可能与HPV16/18-E6蛋白过度表达有关;部分宫颈腺癌可能属于激素依赖性,雌激素可能有协同人乳头瘤病毒致癌的作用。     

TLR4在宫颈癌与不同HPV亚型宫颈癌细胞株中表达及意义

目的 探讨TLR4在正常宫颈组织、宫颈上皮不典型增生、宫颈癌组织以及不同HPV亚型宫颈癌细胞株中表达与意义.方法 采用SP免疫组织化（IHC）检测TLR4在12例正常宫颈组织、30例宫颈轻度不典型增生（cervical intraepithelial neoplasia Ⅰ,CINⅠ）、30例宫颈中-重度不典型增生（cervical intraepithelial neoplasiaⅡ-Ⅲ,CIN Ⅱ-Ⅲ）以及49例宫颈癌（invasive cervical carcinoma,ICC）组织中的表达;应用细胞免疫荧光法、逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测TLR4在不同HPV亚型宫颈癌细胞株HPV18（＋）HeLa、HPV16（＋）Siha以及HPV（-）C33a宫颈癌细胞株上的表达.结果 TLR4的表达随着宫颈病变程度的增高逐渐增强,在正常宫颈组织、CINⅠ、CIN Ⅱ～Ⅲ、ICC中阳性表达率分别为8.33 %（1/12）、20.00 %（6/30）、26.67 %（8/30）和55.10 %（27/49）,ICC与正常宫颈组织、CINⅠ、CINⅡ～Ⅲ之间均有显著性差异（P＜0.01）.TLR4表达与HPV感染有关,在HPV阳性宫颈癌细胞株上表达强于HPV阴性细胞株.结论 TLR4可能参与宫颈癌起始、发展,TLR4的表达与功能与HPV感染有关.     

Much higher risk of premalignant and malignant cervical diseases in younger women positive for HPV16 than in older women positive for HPV16

Human papillomavirus (HPV), particularly HPV16, is strongly associated with premalignant lesions of the uterine cervix and cervical cancer. However, HPV infection is a common sexually transmitted disease and only a few women develop cervical cancer. Although the presence of HPV and abnormal cytology are independent risk factors for cervical diseases, implementing both tests on every woman is argued not to be recommended mainly in terms of cost-effectiveness. During a 20-month period between October, 1994, and May, 1996, cervical swabs from 207 women who were referred for colposcopy because of cervical dyskaryosis (Papanicolaou class IIIa or higher) were examined by PCR for the presence of HPV16. When these women were divided into two groups; i.e., group A consisting of women who were 44 years old or younger (n = 111), and group B consisting of women who were 45 years old or older (n = 96), the risk of having premalignant and malignant cervical diseases upon infection with HPV16 was approximately 8 times higher in group A than in group B. Thus, we conclude that HPV-testing should be implemented on every young woman with an abnormal Papanicolaou smear test.     

应用siRNA干扰胃癌的研究进展

胃癌是消化系统最常见的恶性肿瘤,而我国是胃癌高发区,其发病率和死亡率均高于世界平均水平。在我国大多数患者明确诊断时已进入进展期,所以大多数患者再行手术切除后还需放化疗治疗。近来随着对胃癌的研究深入,可通过对胃癌肿瘤标本行分子检测给予患者药物靶向治疗,实现个体化治疗。RNA干涉(RNAi)技术被广泛用于基因功能的研究,并且在哺乳动物研究中得到飞速发展.si RNA是在RNAi中起中心作用,其可抑制特定m RNA,以调节不同蛋白在肿瘤发生时的异常表达。对si RNA的研究将为胃癌的基因治疗供更广阔的空间。     

人乳头瘤病毒(HPV)及其诱发子宫颈癌的新进展

子宫颈癌是一类发病率仅次于乳腺癌并严重危害女性生殖系统健康的最常见的妇科恶性肿瘤,在发展中国家,是女性癌症死亡的第一因素。自德国科学家哈拉尔德.楚尔豪森(Harald zur Hausen)因发现人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)导致子宫颈癌而获得2008年度的诺贝尔生理学或医学奖后,全世界广泛认可人乳头瘤病毒(HPV)是引起子宫颈癌的最主要生物学因素。HPV病毒的持续感染在子宫颈癌的发生、发展过程中起了重要作用。本文就HPV病毒的生物学结构、女性生殖道HPV病毒的感染途径以及HPV病毒诱发子宫颈癌机制的最近的研究进展进行扼要综述。     

人乳头瘤病毒（HPV）及其诱发子宫颈癌的新进展

子宫颈癌是一类发病率仅次于乳腺癌并严重危害女性生殖系统健康的最常见的妇科恶性肿瘤,在发展中国家,是女性癌症死亡的第一因素。自德国科学家哈拉尔德.楚尔豪森（Harald zur Hausen）因发现人乳头瘤病毒（Human papillomavirus,HPV）导致子宫颈癌而获得2008年度的诺贝尔生理学或医学奖后,全世界广泛认可人乳头瘤病毒（HPV）是引起子宫颈癌的最主要生物学因素。HPV病毒的持续感染在子宫颈癌的发生、发展过程中起了重要作用。本文就HPV病毒的生物学结构、女性生殖道HPV病毒的感染途径以及HPV病毒诱发子宫颈癌机制的最近的研究进展进行扼要综述。     

siRNA在治疗学中的应用

小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）是外源性双链RNA（double strand RNA,dsRNA）的加工产物,在细胞内能介导RNA干扰（RNA interference,RNAi）效应,识别特异性mRNA,沉默同源基因表达。其特异性和高效性显示出很高的实用价值,siRNA已成为许多疾病潜在的治疗手段。对于siRNA的应用,尽管还需要在减少非特异反应,发掘高效递药载体,应对新的基因变异等方面进行深入研究,但其可望在抗病毒、神经系统疾病和肿瘤治疗等许多领域发挥治疗作用。     

Some Novel Adenosine Mimics: Synthesis and Anticancer Potential against Cervical Cancer caused by Human Papilloma Virus

Two novel adenosine analogs, viz. 9-(1′-β-D-arabinofuranosyl)-6-nitro-1,3-dideazapurine or Ara-NDDP (1) and 9-(5′-deoxy-5′-S-(propionic acid) (1′-β-D-ribofuranosyl) adenine or SAH analog (2), indigenously synthesized, have been found to be potential anticancer agents against cervical cancer caused by human papilloma virus.