苏云金杆菌β-外毒素的研究

本文报道苏云金杆菌β-外毒素研究的结果。 从苏云金杆菌40个菌株(分属于9个血清型)中筛选出5个产β-外毒素的菌株:E-013(H₂)、Frc(H₁)、E-009(H₁)、E-096(H₇)和E-012(H₈)。 用家蝇(Musca vicina)三龄幼虫作生物测定,发现发酵液和菌粉水抽提液的致死中浓度(LC₅₀)分别为原液稀释520倍和2,300倍,证明在我们的培养条件下,很易获得高浓度的β-外毒素,这对实际应用具有重要意义。此外,还研究了培养基种类和培养时间对β-外毒素产生的影响。 葡萄糖氧化酶对E-013菌株所产β-外毒素的活性有显著的抑制作用。 经过乙醇分级分离、钡盐沉淀和离子交换层析得到初步纯化的β-外毒素。紫外吸收光谱具有典型的腺嘌呤核苷酸类的特性:最大吸收波长(λ_max)为258毫微米,最小吸收波长(λ_min)为233毫微米。     

苏云金杆菌毒素

苏云金杆菌产生的对昆虫有致病作用的毒素有７种,即α－外毒素、β－外毒素、γ－外毒素、δ－内毒素、不稳定外毒素、水溶性毒素、鼠因子外毒素。苏云金杆菌主要是经口感染昆虫,它杀死昆虫可由菌体本身的活动而引起,但是使害虫死亡的更主要的原因是菌体产生的毒素。毒...     

微生物杀虫剂苏云金芽孢杆菌毒素的用途

根据美国农业部(USDA)地方寄生虫研究室的Leon Bone领导下的一项研究,通常使用的微生物杀虫剂苏云金芽孢杆菌(BT),可用来杀死伴随动物和一些植物产生的线虫。Bone在实验室获得了从多种BT品种中释放出的每毫升含有几毫微克的毒素试剂,它能杀死     

苏云金杆菌β-外毒素对淡色库蚊幼虫的影响

苏云金杆菌β-外毒素的治虫范围广,对鳞翅目、鞘翅目、双翅目(目前记载的有蚊、蝇两科)、直翅目等均有一定的效果。 我们于1974—75年在室内、外进行了β-外毒素对淡色库蚊幼虫的致死效果试验。现报道于下。     

苏云金杆菌β-外毒素对家蝇幼虫的毒效观察

苏云金杆菌具有多种杀虫的毒素,基本上可分两类:一类为内毒素,即伴孢晶体毒素;一类为外毒素,主要是β-外毒素。β-外毒素对蚊蝇幼虫有明显的毒杀作用。在卫生防疫事业蓬勃发展的今天,开展β-外毒素的研究对除四害有一定的意义。为此,我们开展了有关β-外毒素的实验研究。 苏云金杆菌包括17个变种,分属12个血清型。本文报告的是苏云金杯菌血清型9菌株产生外毒素的情况及对家蝇幼虫的毒效观察。     

苏云金杆菌

项目简介苏云金杆菌一、简介：苏云金杆菌是生物农药,对人畜无毒,符合生产“绿色食品”方向,“绿色食品”是指无农药残毒污染、无环境污染食品。苏云金杆菌是最大规模用于生产的微生物杀虫剂,具有高效无毒、无污染、无公害等特点,可用于防治应翅目、精翅目、膜翅目,...     

苏云金杆菌毒素调控基因plcR的特性与表达

根据蜡状芽胞杆菌plcR基因和papR基因序列设计特异引物,对6个Bt菌株（WB1、WB7、WB9、HD98、8010、8311）及5个Bc菌株（6A1、6A2、6A3、6A4、6S1）进行了PCR检测.结果显示,3个Bt菌株及4个Bc菌株含有plcR-papR基因.克隆了Bt8010、Bc6A2和6A3的plcR、papR基因,核苷酸序列分析表明,三个菌株的plcR、papR基因与NCBI数据库中的Bt、Bc及Ba相应序列都有很高的相似性.Bt8010的plcR基因编码框由846个核苷酸组成,可编码282个氨基酸;papR基因的编码框由144个核苷酸组成,可编码48个氨基酸.推导的氨基酸序列分析表明,Bt8010 的PapR有21个氨基酸的信号肽序列,PlcR没有信号肽序列.与Bc6A2、6A3和Bc 569相比,Bt8010 的PlcR和PapR在氨基酸序列上与Bc 相应序列存在相对较大的差异.将plcR-papR基因连接到表达载体pHT304中,并转化至大肠杆菌JM109中成功进行了表达,为研究Bt plcR基因的功能奠定了基础.     

化学物质和保存条件对苏云金芽孢杆菌δ-内毒素的影响

研究了几种化学物质及保存温度与时间对几种苏云金杆菌δ-内毒素的毒力和晶体蛋白质的影响。结果表明,在所用浓度范围内,农乳600、二甲苯及氯氰菊酯对δ-内毒素的毒力有不同程度的影响。三种化学物质分别与伴孢晶体的混合物,室温下存放5个月或1年,其毒力有较明显到大幅度的下降。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明,室温下存放6个月,各化学物质处理的晶体蛋白质被轻微、明显或完全降解。蒸馏水中的伴孢晶体,室温或-20℃下存放,毒力下降较缓慢,晶体蛋白质的降解程度亦较低。不同变种的δ-内毒素蛋白质的稳定性有差别。讨论了上述     

β-银环蛇毒素研究进展

β-Bungarotoxin(β-BGT或 β-Bu Tx)是一种具有磷脂酶 A2 活性的突触前神经毒素 ,首先由Chang[1 ] 于 1 963年在台湾银环蛇 (Bungarusmulticinctus)中发现 ,是目前研究的最为深入的第一个具有药理特征的一种突触前蛇神经毒素。1　﹀-BGT结构、分类与性质　　β-BGT是一种高碱性多肽 ,其分子量为 2 0～2 2 KD,等电点为 8.8～ 9.7。由 A、B两条链构成 ,二者通过一个链间二硫键共价连接。A链含有 1 2 0个氨基酸残基 ,分子量为 1 3 5 0 0 D,具有磷脂酶 A2的活性 [2 ] ,在结构上与哺乳动物胰腺分泌的磷脂酶A2 及其它蛇毒液中的磷脂酶 …     

抗苏云金杆菌毒素Cry1Ac粉纹夜蛾细胞系的特性研究

为了从离体细胞水平探讨昆虫对苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白的部分抗性机制,本文采用活化的Cry1AC毒素对粉纹夜蛾BTI-TN-581-4细胞连续筛选86代,获得了高水平抗性细胞,研究了其某些特性。它对Cry1C产生了低水平的交互抗性,对低渗溶液的耐受性显著增强,双向电泳图谱表明抗性细胞膜蛋白组分发生了明显的变化。膜蛋白组分的变化可能导致了筛选细胞的耐低渗透压和抗Cry1C。     

抗苏云金杆菌毒素Cry1Ac粉纹夜蛾细胞系的特性研究

为了从离体细胞水平探讨昆虫对苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白的部分抗性机制,本文采用活化的Cry1Ac 毒素对粉纹夜蛾BTI-TN-581-4细胞连续筛选86代,获得了高水平抗性细胞,研究了其某些特性。它对Cry1c 产生了低水平的交互抗性,对低渗溶液的耐受性显著增强,双向电泳图谱表明抗性细胞膜蛋白组分发生了明显的变化。膜蛋白组分的变化可能导致了筛选细胞的耐低渗透压和抗Cry1C。     

球形芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌以色列亚种杀蚊毒素间的协同作用

本研究测定了分别表达苏云金芽孢杆菌Cry4Aa、Cry4Ba、Cry11Aa、Cyt1Aa和球形芽孢杆菌二元毒素Bin的转化菌株Bt B60 1、Bt B611、Bt B640、Bt U 30和Bt CW 3全发酵培养物两两或两两以上不同组合对抗性库蚊的毒力 ,分析了杀蚊毒素间的协同作用。结果表明 ,Bin和Cry4Aa、Bin和Cry 4Ba间有明显的协同作用 ,此外 ,Cry4Aa和Cry4Ba、Cry4Aa和Cry11Aa、Cyt1Aa和Cry4Aa之间也有明显的协同作用     

基于苏云金杆菌毒素的微生物杀虫剂出现麻烦事了吗?

研制基于苏云金杆菌(BT)及其毒素的杀虫剂的公司今后可能会遇到严重问题。许多研究 BT 的公司是因为昆虫对合成的化学杀虫剂产生抗性才进行这项研究的。过去希望这种现象不会发生在微生物杀虫剂上,可是现在农业研究中心(ARS)的 Willian McGaughey已发现昆虫也会产生 BT 抗性。尤其是昆虫能产生对δ-内毒素的抗性;δ-内毒素则是在此领域开展工作的各公司最感兴趣的 BT 毒素。McGaghey 认为,这类抗性可能影响直接应用于植物的细菌在未来的用途,不管这些     

α-银环蛇毒素和β-银环蛇毒素的研究进展

银环蛇属动物界,脊索动物门,爬虫纲,有鳞目。眼镜蛇科,环蛇属。全身背面是黑白相间的环纹,具30～50个白色或乳黄色窄横纹。是世界十大毒蛇之一。属前沟牙类毒蛇,其一次排毒4．6mg,1mg干毒就能致人于死地。毒腺分泌的蛇毒含多种多肽成分,具有不同的生物学活性。     

苏云金芽孢杆菌-神奇细菌的百年传奇

苏云金芽孢杆菌作为一种革兰氏阳性有孢子生成的细菌可以生成多种多样性的杀虫蛋白,这使得其在过去近一百年中作为一种生物杀虫剂得到应用广泛应用。这种传奇的微生物不但在作物的害虫防治方面得到极大的应用和推广,而在蚊虫的防控及一些类型的癌细胞的防治方面也有其独有作用。苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白对其宿主的高度特异性及随着分子技术手段的进展而得到进一步的发掘利用,Bt转基因作物的商业化应用极大的减少了环境污染严重的化学用药的使用。苏云金芽孢杆菌在现在农业生产中占有极重要的地位。本综述将就苏云金芽孢杆菌的发现历史、生态与发育、毒蛋白的多样性及杀虫特异性、毒蛋白的结构及机理、在农林生产中的应用、环境安全和抗性进行简述。     

杀蚊苏云金芽胞杆菌毒素Cry4Ba柔韧性分析

采用整合正则模式分析(NMA)的Flexserv程序、WEBnm@程序和TTM@程序分析了杀蚊苏云金芽孢杆菌毒素Cry4Ba的柔韧性。对模拟结果进行了主成分、B-因子、低频振动下的归一化原子平方位移和氨基酸残基运动相关性计算,并对Cry4Ba结构域Ⅰ的α4和α5螺旋在细胞膜中的运动进行了模拟。结果表明,Cry4结构域Ⅰ和结构域Ⅱ表现较大柔韧性,其中N端结构域Ⅰ的螺旋α3、α4和α5柔性表现较大。α4和α5螺旋在细胞膜中的旋转运动、平动、滑动和倾斜运动具有相似的幅度和方向,α4和α5的运动具有较好的协同性。结构域Ⅱ的顶端3个突环都表现较大的柔韧性。各个结构域内部的氨基酸残基运动具有一定的相关性,而各结构域之间运动的相关性较小。研究结果支持Cry4Ba结构域Ⅰ在细胞膜上形成孔道的伞状模型机制并显示结构域Ⅱ顶端突环重要性。     

钙粘蛋白与苏云金芽胞杆菌晶体毒素 互作机制研究进展

昆虫钙粘蛋白是苏云金芽胞杆菌晶体毒素的重要受体之一,本文简述了昆虫钙粘蛋白种类、结构特征和在昆虫体内的分布,对昆虫钙粘蛋白与苏云金芽胞杆菌毒素相互结合位点进行了较深入讨论;详细论述了苏云金芽胞杆菌晶体毒素作用孔洞模式和信号转导模式,并简要介绍了钙粘蛋白与昆虫抗性的关系.     

苏云金杆菌遗传工程杀虫剂

苏云金芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ,简称 Ｂｔ）是一种对昆虫有致病作用的细菌。其杀虫活性物质主要是杀虫晶体蛋白质（Ｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄｅ ｃｒｙｓｔａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ,ＩＣＰ）。由于该杀虫剂对人、畜无害,无致癌和致畸作用,是一种有着广泛应用前景的微生物杀虫剂。 根据１９９８年最新的分类,把ＩＣＰ基因分为２５类ｃｒｙ基因和２类ｃｙｔ基因,每类ＩＣＰ基因产生针对不同昆虫的晶体蛋白质。例如,ｃｒｙ３Ａ基因产生杀鞘翅目昆虫的晶体蛋白质,而ｃｒｙ１基因所产生的活性物质主要用于防治鳞…     

苏云金杆菌4.0718菌株杀虫晶体65kD原毒素的质谱分析

以苏云金杆菌4.0718菌株杀虫晶体65kD原毒素为材料,探索了从SDS－PAGE胶上回收蛋白质进行质谱分析的方法。蛋白纯化的步骤包括SDS－PAGE、电洗脱、脱盐、除SDS。电洗脱采用半透膜法,用超滤法脱盐,冷丙酮沉淀法除去SDS。结果表明,纯化的65kD原毒素经ESI－MS检测,分子量约64500Da。经MALDI－MS检测,未能有明显蛋白峰出现,这可能是该蛋白由于较强的疏水作用,溶解性差,在与基质混合时处于聚和悬浮态所致。     

苏云金芽孢杆菌Cry1C毒素对昆虫细胞的毒力研究

将携带ｃｒｙ1Ｃ基因的ｐＵＣ1 9质粒载体转到大肠杆菌ＢＬ2 1菌株中 ,经 37℃培养 48小时后可获得单基因的Ｃｒｙ1Ｃ杀虫晶体毒素蛋白提取物。将它溶于 5 0ｍｍｏｌ/ＬＮａ2 ＣＯ3/ＨＣｌ(ｐＨ9.5 )中 ,经胰酶消化后用于细胞的毒力测定。1 .测定方法接种对数期生长的细胞于 96孔板中 ,2 8℃培养过夜后 ,弃上清 ,加入系列梯度稀释的毒素蛋白作用液 ,30ｍｉｎ后 ,弃上清 ,加入ＭＴＴ液 ,反应 4ｈ后 ,弃上清 ,以ＳＤＳ 饱和异丙醇溶解 ,置ＥＬＩＳＡ仪 (λ =5 70ｎｍ)读数。2 .测定结果在所处理的九种昆虫细胞系中 ,甜菜夜蛾Ｓｅ细胞系和埃及…