用1,10-二氮杂菲灭活病毒

<正>用大量混合人血浆制备血液制剂诸如凝血因子浓缩物可能含有诸如HBV、NANBHV或HIV等内源性病毒已被完全确认。因此,对血浆蛋白处理以便达到有效地灭活各类病毒,减少血液制剂传播疾病的危险是非常重要的。     

血浆蛋白制剂中肝炎病毒的消除

<正> 传播病毒性肝炎是使用血浆蛋白制剂最令人担心的问题之一。甲型肝炎病毒血症时间短,除非输入潜伏早期的血液,不会传播病毒。乙型肝炎和非甲非乙型肝炎因长时期的病毒血症,可持续数年甚或终身,传染个体的百分率高。尽管制造部门检查了献血员的乙型肝炎表面抗原,血浆蛋白制剂中仍可能含有一种或多种肝炎病毒,特别是凝血因子制剂,因制造时需保持其蛋白质活性,通常没有灭活肝炎病毒的步骤。 分离血浆蛋白的低温乙醇法被世界各国作为经典方法沿用迄今已40多年。以人血浆为原料用Cohn法制备的免疫球蛋白不传播病毒性肝炎是众所周知的,但近年来某些报道使人们对此产生了疑虑。除白蛋白外,都有传染病毒性肝炎的报导。     

AT-2灭活HIV-1病毒及纯化回收鉴定

目的制备具备完整空间构型且纯度在90%以上的灭活HIV-1病毒,用于HIV疫苗研究。方法应用化学制剂2,2’-dithiodipyridine（aldrithiol-2;AT-2）灭活HIV-1病毒,对灭活的病毒超速离心浓缩并洗涤去除灭活用的化学制剂AT-2。采用分子筛技术去除灭活病毒中残存的杂质蛋白质。结果 250μmol/L AT-2与HIV-137℃作用1 h可以彻底灭活病毒的感染性,同时保留病毒的免疫原性。灭活的病毒纯化后检测不到AT-2的残留,检测牛血清蛋白残余量低于50 ng/mL。结论灭活的HIV-1病毒经过纯化后纯度达到95.6%,可以满足作为HIV疫苗研究的免疫刺激剂的使用要求。     

一种新的静脉输注用免疫球蛋白

<正>在治疗耐抗菌素感染中,以及无疑在降低免疫缺乏病人的细菌感染中,人免疫球蛋白(IgG)是有价值的。然而,用低温乙醇法从人血浆制备的IgG只能限于肌肉常规注射,因为在静脉输注时和输注后能发生严重的类过敏性反应。这些副作用已被归因于在分离过程形成的聚合IgG所引起的非特异性补体激活和某些杂质,诸如PKA。聚合物     

从姜黄中提取姜黄素的研究

本文利用75％乙醇浸提姜黄得到姜黄素粗提物,然后分别采用吸附分离法和沉淀法对粗提物进一步分离提纯得到纯度较高的姜黄素产品。在吸附分离法提取姜黄素实验中,考察了不同洗脱剂组成对洗脱率的影响,实验发现90％乙醇洗脱效果最好;在沉淀法实验中,考察了不同pH值条件下的姜黄素沉淀量,发现pH值为7．0时,姜黄素沉淀量最大。实验结果表明,沉淀法得到的姜黄素产品纯度比吸附分离法得到的高,但沉淀法产品收率比吸附分离法低,吸附分离法比沉淀法更适合工业应用。     

人巨细胞病毒免疫球蛋白的研制及其临床应用

制备人源性高效价人巨细胞病毒 (HCMV)特异免疫球蛋白 (IgG)。采用ELISA从检定合格的血浆中筛选出滴度≥ 1∶5 0 0 0的血浆 ,合并后按低温乙醇法制备HCMV IgG ,再次检定后应用于临床。结果显示 ,按人免疫球蛋白标准检定 ,所制备的HCMV IgG全部合格 ,HCMV IgG滴度为 1∶15 0 0 0 0。临床应用结果表明 ,2批高效价HCMV IgG均可明显降低先天性HCMV感染率。     

静注免疫球蛋白分离提纯中病毒的灭活和消除

<正>静脉输注免疫球蛋白(IVIG)适应于治疗原发性血小板减少性紫癜、川畸病、骨髓移植和获得性免疫缺陷综合症(AIDS)。这些患者的抵抗力大多很弱,需用相对大剂量的IGIV。在Cohn氏乙醇分离过程中人免疫缺陷病毒(HIV)。被灭活。聚乙二醇(PEG)分层法可去除IgG聚合体和免疫复合物得到单体IgG。但作者注意到制品有传播非甲非乙肝炎的危险。为保障制品的安全性,作者发明了一种液体加温处理方法以灭活病毒并不使IgG变性。本文阐述了一种IVIG60℃加温10小时的方法。对加热的IVIG和相对应的非加热对照制品的理化和生物学特性试验结果作了比较。     

有机溶剂／表面活性剂处理人血浆的生产和体外鉴定

作者发展了用最终浓度1％( W/W) TNBP和Triton-100于30℃保温4小时的改良有机溶剂/表面活性剂(S/D)处理法灭活人血浆病毒。本法灭活≥10~6黑猩猩感染剂量(CID_(50))的HBV,≥10~5GID_(50)的HCV和≥10~(6·2)组织培养感染剂量(TCID_(50))的HIV。病毒灭活后的11批血浆被冻干,12批被冰冻直到使用。上述血浆经过了广泛的实验室试验,包括凝血因子1-XIII, Von willebrand因子,血浆蛋白溶酶原,血凝抑制剂,纤维蛋白溶酶和其他临床上重要的血浆蛋白质的鉴定。在S/D处     

马抗SARS-CoV免疫球蛋白制备的研究

用纯化灭活的SARS—CoV抗原免疫马匹,采集血浆加入S／D灭活／去除病毒,用硫酸铵盐析沉淀提取抗SARS—CoV IgG,再经胃酶切、柱超滤等工艺制备马抗SARS-CoV免疫球蛋白。研制的马抗SARS—CoV免疫球蛋白制品中和抗体效价达1：6400以上、F(ab’）2纯度在90％以上。建立了高效、稳定、效果好的马抗SARS—CoV免疫球蛋白生产工艺,为SARS的治疗和预防提供了可靠的保证,也为传统抗血清的更新换代提供了技术平台。     

人血浆蛋白连续沉淀分离技术试验

目的:考察人血浆蛋白连续流沉淀分离装置的分离性能。方法:将传统的人血浆蛋白低温乙醇批处理法改进为连续沉淀分离法,并设计了一套连续沉淀分离装置。采用人血浆低温乙醇分离的组分FⅠ Ⅱ Ⅲ沉淀为试验物料,将蛋白液与试剂(乙醇和缓冲液)在特制的混合器内与循环母液迅速混合,形成连续沉淀分离过程。结果:实现了人血浆蛋白的连续沉淀分离,所得蛋白组分FⅡ中的IgG含量为5.0～8.4g/L,纯度达94%～97.4%。结论:该装置能够实现人血浆蛋白的连续分离,须进一步的试验和工艺优化。     

人胎盘型谷胱甘肽S-转移酶的ELISA及用于肝癌的诊断

从人体胎盘提纯GST-π,制备兔抗GST-π血清,纯化其IgG,并降解成Fab′片断,通过SMCC与HRP交联成Fab′-HRP,用于夹心ELISA以测定GST-π,灵敏度可达11pg,超过国外的放射免疫法。用此法测定正常人血清GST-π为1.06±0.94ng/ml,原发性肝癌血清较正常高20倍以上。阳性率达90％左右。     

免疫荧光检测HIV—1抗体方法的建立和应用

免疫荧光法检测HIV抗体是确认HIV感染的方法之一［l］,与蛋白印迹法相比,它的特异性更高,易于鉴别非特异反应,更为经济、快速、容易操作。为了拥有更多的HIV抗体检测手段,我们用感染和未感染HIV－l的HeLaCD“细胞制备抗原片,建立了免疫荧光检测HIV抗体的方法,并进行了初步应用。材料和方法1细胞和病毒HeLaCD4”细胞,引自美国BruceChesebro博士的实验室,用含10％热灭活小牛血清的RPMI1640培养基培养和传代。HIV－l株引自美国。2血清艾滋诊断试剂国家参比品,批号9602Z16份经蛋白印迹确认的HIV抗体阳性血清;10份健康…     

有机溶剂/去污剂处理血浆的研究进展

有机溶剂/去污剂处理技术已广泛用于血液制剂的病毒灭活。本文对此项技术用于血浆中病毒灭活的可靠性、处理血液制剂的安全性以及处理血浆的临床应用作了简要介绍。     

硫代二苯胺(phenothiαzine)染料与可见光结合光照灭活人新鲜血浆中的病毒

<正>适宜灭活工艺的应用,保证了提纯血浆蛋白质制品如白蛋白或凝血因子的病毒安全性,例如冻干状态的热处理或有稳定剂存在时溶液的热处理,用一种有机溶剂和表面活性剂混合物或用β-丙内脂结合紫外线照射处理。     

血浆分段法纵览

<正> 引言 简言之,血浆分段法是从已知质量的血浆中,经济地分离具有适宜纯度和最大产量的一定量血浆组分的一门技艺。 人血浆的工业分段法,起源于第二次世界大战期间,当时Cohn和其同事发展并发表了他们著名的冷乙醇分段工艺。Cohn-OnCley6法和9法应用至今40多年,发挥了非常重要的作用。与此同时,在     

S／D处理血浆过程中的脂包膜病毒灭活试验观察

通过有机溶剂/去污剂对血浆中指示病毒VSV灭活的观察评估有机溶剂/去污剂对脂包膜病毒死活的效果。血浆样品与VSV病毒按9:1混合,然后用1％TNBP/1％ Triton X-100在30℃处理4h,测定开始样品中的病毒总量和S/D处理后不同时间取样内的病毒总量。实验中样品内加入1％TNBP/1％ Triton X-10015min后VSV病毒已全部灭活,灭活效果≥6.0log。按所述S/D处理方法可以完全灭活血浆内所有的脂包膜病毒而没有主要血浆蛋白的损失。     

静脉输注免疫球蛋白中病毒(HIV,HBV,VSV和SV)的消除

<正> 人免疫球蛋白是被人们接受的一种最安全的生物制品。最近,美国疾病控制中心和食品药物管理局报告,用乙醇分离法所得的免疫球蛋白制品没有传播AIDS(HIV)的危险,因为提制过程中病毒不稳定。然而,免疫球蛋白制品,特别是静脉注射免疫球蛋白(IVIG)制品,传播非甲非乙(NANB)型肝炎已被注意到。 蛋白酶降解(胃蛋白酶,溶纤酶),化学改制(还原和烷化,磺化),离子交换处理,聚乙二醇(PEG)分离和与温和胃蛋白酶消化结合的pH4处理等法已被应用于制取IVIG制品。这些制备方法中,PEG分离     

柱层析法制备乙型脑炎纯化疫苗的研究

为制备纯化乙型脑炎灭活疫苗,以地鼠肾细胞培养并经灭活的乙型脑炎病毒液,浓缩后上Sepharose 4FF凝胶层析柱,用紫外线280nm波长检测得到三个吸收峰。ELISA法证实第一峰为病毒抗原峰,另两个峰为杂蛋白峰。试验证明Seoharose 4FF凝胶过滤对于提纯乙型脑炎病毒是有效的,能去除99％的杂蛋白。     

兔抗金黄地鼠酶标抗体的制备及应用

目的 纯化金黄地鼠血清IgG,制备兔抗金黄地鼠酶标抗体(IgG-HRP),开展金黄地鼠仙台病毒的初步检测.方法 采用亲和层析纯化法纯化金黄地鼠IgG,用SDS- PAGE电泳测定IgG纯度并制备兔抗金黄地鼠IgG抗体(second antibody,Ab2);用免疫双扩散法检测抗血清效价后,再用亲和层析纯化抗血清IgG( Ab2);采用改良过碘酸钠标记法制备兔抗金黄地鼠酶标抗体( rabbit anti-hamster IgG-HRP);用直接ELISA和Western-blot法对兔抗金黄地鼠IgG酶标抗体进行工作浓度测定;应用金黄地鼠酶标抗体对金黄地鼠仙台病毒进行酶免检测(IEA).结果 金黄地鼠血清IgG纯度达95％;兔抗金黄地鼠IgG抗体(Ab2)免疫双扩散效价为1(:)64;兔抗金黄地鼠IgG -HRP经直接ELISA和Western-Blot测定工作浓度分别为1∶5000和1∶2000;酶免(IEA)效价为1:2000.结论 高效快速纯化了金黄地鼠IgG,制备了金黄地鼠IgG-HRP,为金黄地鼠病原微生物的血清学检测提供了条件.     

一种分离免疫血清球蛋白的简单方法

<正> 自从低温乙醇法发展将血浆分离成为五种主要成分以来,Cohn第6和第9法独特地在美国和世界许多地区用作分离供临床用白蛋白和免疫血清球蛋白(ISG)。虽然原始的分离流程已被修改,但随后的这些改良方法均遵循原Cohn法的相同步骤,按其溶解度的增加用一系列沉淀步骤沉淀各种蛋白质。即使白蛋白是唯一所要提取的产品,它总是最后从血浆乙醇混合物中被提取。结果白蛋白的产量低,由于涉及很多沉淀步骤,不可避免地发生载留或共沉。