以角叉胶固相化假单胞菌连续生产L-丙氨酸

本研究用固相化假单胞菌从L天冬氨酸连续生产L-丙氨酸。假单胞菌细胞用角叉胶凝胶固相化。固相化细胞的L-天冬氨酸β-脱羧酶的活性通过将固相化细胞置于含有0.1mM吡哆醛-5-磷酸盐(PLP)的1ML-天冬铵盐(pH5.5)溶液里在37℃下恒温培养20多小时以得到提高。固相细胞的酶活性是原细胞活性的59%。酶反应的pH范围固相细胞比游离细胞宽。当使用含有0.1mMPLP底物溶液反复使用固相化细胞仍可保持酶活。当含有0.1mMPLP2ML-天冬氨酸铵(pH6.2)溶液向上通过固相化细胞柱在37℃下保持8小时后L天冬氨酸完全转变为L-丙氨酸。用戊二醛处理固相化细胞结果酶活稍有损失可是显著地增加操作的稳定性。通过戊二醛处理的固相化细胞酶活半衰期是46天。     

肠球菌肽脱甲酰基酶在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达及其活性检测

肽脱甲酰基酶 (peptidedeformylase ,PDF)存在于所有原核生物中是其生长、代谢、繁殖必不可少的关键酶 ,但不存在于人类与其他哺乳动物细胞内 ,因而被视为新一代广谱抗生素药物筛选的理想靶点。将肠球菌 (Enterococcusfaecium)肽脱甲酰基酶基因连接到高效蛋白表达载体pET 30 A( )中 ,并转入宿主大肠杆菌BL2 1 (DE3)中进行诱导表达。在该基因的诱导表达中 ,采用不同表达条件进行诱导表达 ,最终获得表达效率极高且可溶的肽脱甲酰基酶。从宿主细胞中提取分离该酶 ,并进行酶活性检测 ,诱导表达的肽脱甲酰基酶有很高的酶活性     

细胞中“水的存在形式及与代谢的关系”

1含量：水在活细胞内中含量最多，约占细胞鲜重的80％～90％，有的甚至达97％。 2水的存在形式：自由水、结合水 1）自由水是细胞中能参与物质代谢过程的水。①是细胞内良好的溶剂，许多物质都能溶解于自由水；②运送营养物质和新陈代谢中产生的废物；③绿色植物进行光合作用的原料；④维持细胞的正常形态。     

镉和锌在皖景天细胞内的分布及化学形态

运用差速离心法和化学试剂逐步提取法,分析了Cd和Zn在皖景天根、茎和叶的亚细胞分布及其化学形态.结果表明:10 μmol·L^-1 Cd处理下,Cd在皖景天细胞内的主要分布位点是其可溶部分;在100 μmol·L^-1 Cd处理下,Cd在根中主要分布在细胞壁、茎中主要分布在细胞壁和可溶部分、叶中超过90%的Cd分布在可溶部分.高Cd浓度处理时,皖景天根、茎和叶的细胞壁中Cd分布比例增加,而可溶部分Cd分布比例相对减少.在1和800 μmol·L^-1 Zn处理条件下,Zn在皖景天根、茎和叶的主要分布位点是可溶部分;高Zn浓度处理时,皖景天叶、茎和根的可溶部分和细胞壁中Zn的分布比例无明显变化.细胞器中Zn和Cd分布都很少.Cd在皖景天根、茎和叶内主要以氯化钠提取态和水提取态存在,Zn在皖景天根、茎和叶内以多种化学形态存在.     

自由基与细胞凋亡

细胞凋亡是指细胞在生理和病理情况下的一种死亡模式,广泛涉及到肿瘤、衰老和退行性病变等一系列疾病．最近有实验表明自由基与细胞凋亡有密切的关系．凋亡细胞内活性氧自由基（ROS）生成增加,同时消除ROS的能力下降.大多数凋亡障碍的细胞表现出ROS分子大量减少,若调节细胞内ROS含量,死亡率能随之改变;离子辐射能通过经自由基引起细胞的凋亡,培养细胞在无血清或撤除生长因子后发生的死亡也大多与细胞内自由基代谢酶如过氧化氢酶等的活性变化有关.提示自由基是参与调节细胞凋亡的重要因素之一.     

固氮鱼腥藻的蛋白水解酶及其部分性质的研究

应用溶菌酶处理,超声破碎细胞,通过差异离心和解离剂处理,将细胞的不同部分分开。以水解α-酪蛋白反应检测蛋白水解酶活性,结果表明,在细胞的可溶部分、内细胞质膜、外膜及胞浆周围区均存在蛋白水解酶活性。异形胞可溶部分的蛋白酶活比营养细胞可溶的蛋白酶活高4—5倍。在固氮条件下,营养细胞可溶性蛋白酶反应最适温度为50—55℃,65℃时,酶活迅速下降。有Ca^2 5mmol／l时,蛋白酶在60℃稳定,无Ca^2 存在下,酶液在60℃预处理10分钟,酶活性丧失80％以上。酶反应的最适pH为8—10。而且氮饥饿之后,培养基的pH值对细胞蛋白酶活水平有明显影响,氮饥饿24小时内,蛋白酶活迅速增加,但在碱性条件下,酶活水平比在中性条件下要高得多。邻菲哕啉对蛋白酶活性有严重的抑制,EDTA仅有轻微抑制,而PMSF对细胞蛋白酶活的抑制作用,与细胞氮饥饿时间有关。     

植物细胞固相培养研究进展

模仿植物体内的代谢环境及微生物的发酵培养而建立的植物细胞固相培养技术在有效次生产物,如:药品、香料、甜味剂和食品色素等的商业化生产中有着重大意义. 由于固相培养技术有以下优点,因而在本世纪八十年代取得了迅速发展. (1)固相细胞内紧密接触及细胞的多样性可形成同一结构组织,从而促进合成途径的表达. (2)固相细胞生长在有浓度梯度的营     

天花粉蛋白对体外培养不同种类细胞的作用

本文进行了天花粉蛋白对离体培养的葡萄胎细胞、早孕蜕膜细胞、人胎儿肾皮质部细胞、HeLa细胞和鼻咽癌上皮细胞的损伤作用的比较研究。为了探索天花粉蛋白选择损伤细胞是否存在专一结合细胞的可能性,又以不敏感的蜕膜细胞为材料,应用辣根过氧化物酶标记技术进行了天花粉蛋白与细胞结合和进入细胞内定位的实验。此外,并以肝癌细胞为材料研究了对细胞增殖率的影响。结果表明葡萄胎合体滋胚层细胞和胎盘合体滋胚层细胞一样都是最敏感的细胞,经1微克天花粉蛋白处理即出现形态上损伤,至50微克则大多数细胞呈现不可逆的退化损伤,而其它类型的细胞则表现出有相当大的抗性。过氧化物酶标记追踪天花粉蛋白在细胞内分布的结果表明天花粉蛋白与蜕膜细胞有一定的亲和力,提示天花粉蛋白似乎不存在严格的细胞结合专一性;而天花粉蛋白在细胞内的分布一般仅限于细胞质,这一现象似乎提示细胞质区可能就是天花粉蛋白直接作用的靶的范围。细胞增殖率的实验结果表明50微克以上的药物剂量对肝癌细胞增殖率有一定的抑制作用,剂量增加抑制作用也增加。但是,经过一定的修复期以后,细胞增殖率又可得到完全恢复,反映了对细胞生长抑制的可逆作用。上述实验结果进一步加强了天花粉蛋白对滋胚层细胞具有一定细胞损伤专一性的结论。本文并对细胞损伤专一性问题进行了讨论。     

盘基网柄菌细胞发育过程中尿囊酸酶的亚细胞定位

利用胶体金免疫电镜技术,观察了盘基网柄菌细胞分化与凋亡过程中胞内尿囊酸酶的位置变化。结果表明,在细胞聚集期细胞产生的尿囊酸酶主要分布于线粒体及周围细胞质内。到了细胞丘时期,尿囊酸酶只特异地存在于发生内自噬的线粒体内,且仅局限于线粒体因内自噬产生的空泡区域,这些发生线粒体内自噬的细胞将分化成前孢子细胞。随着前孢子细胞分化的进行,尿囊酸酶颗粒在细胞内分布逐渐减少,在靠近质膜处的空泡内还能观察到一些酶颗粒;而另一些细胞内,几乎所有的胞器内都能观察到酶颗粒,一直延续至柄细胞形成。从中可以看到尿囊酸酶在将发育成孢子细胞和柄细胞两种类型细胞内的分布位置明显不同,结果提示了尿囊酸酶蛋白与盘基网柄菌细胞分化和凋亡调控途径有密切关系。     

介绍与养蜂业有关的酶

酶是生物催化剂,分布于一切生物的活细胞内,参加机体的各种化学反应。在蜂花粉、蜂蜜、王浆、幼虫和蜜蜂体内均有不同种类和数量的酶、调节蜜蜂的生长和发育。与养蜂业有关的酶包括葡萄糖氧化酶、淀粉酶、转化酶、蛋白水解酶、脂肪酶、转氨酶、过氧化氢酶、磷酸酶、胆碱酯酶、细胞色素氧化酶等等。这些酶有的来自蜜蜂的分泌腺,有的来自幼虫、花蜜或王浆中。     

康氏木霉(Trichoderma koningii)纤维素酶系中的Cx酶的定位

本文研究了康氏木霉Cx酶的定位。用超声和差速离心法得出Cx酶活力大量存在于培养液的上清液,一部分附着于细胞表面,少量存在于菌丝细胞内。用电镜细胞化学法得出Cx酶位于菌丝细胞壁的表面,较易脱落;有时发现位于质膜内侧与细胞壁之间。     

细胞内pH与细胞凋亡

基因表达及各种外源性信号诱导的生长因子依赖细胞凋亡过程中普遍存在细胞内酸化,细胞内酸化程度与凋亡诱导因素之间存在量效关系及与细胞凋亡发生率相关。特异性钠氢交换抑制剂通过抑制钠氢交换使细胞内酸化,诱导细胞凋亡。单纯的碱处理通过减少细胞内酸化的程度而呈现抗细胞凋亡作用。细胞内酸化是细胞凋亡过程中的重要环节,它能激活细胞内存在的酸性核酸内切酶及有关成分,促进DNA裂解而介导细胞凋亡。     

采用渗透交联固定化方法提高细菌内酶转化率的研究

采用渗透交联方法处理固定化棒状杆菌,并利用细胞内酶顺式环氧琥珀酸水解酶催化生产L（＋）酒石酸。确定了最佳渗透交联固定化条件：多乙烯多胺浓度1．25％,作用30min;戊二醛浓度0．75％,作用15min,固定化细胞内酶转化的最适条件,底物浓度为0．5－1．0mol/L;pH8.0;温度37－42℃。结果发现,经渗透交联处理的固定化细胞酶活力比未处理的提高5倍多。而且固定化细胞的颗粒更度提高10倍多,保存期也有较大提高。     

甘露聚糖酶微水固相法改性皂荚多糖胶

作为功能性天然高分子,皂荚半乳甘露聚糖胶资源丰富。基于多糖胶吸水润胀特点提出的微水固相酶法改性皂荚多糖胶,在微水吸胀过程同时渗入酶进行改性反应,微水吸胀后的胚乳片经压片处理后呈蓬松多孔雪花片状,反应比表面积加大。β-甘露聚糖酶降解皂荚多糖胶,加酶量在3000~4000 U/(g胚乳)范围内,加水量为0.9倍胚乳片质量,在40 h反应时间后可得到最大低聚糖含量,为18.17%。微水固相法酶解半乳甘露聚糖可节约酶用量成本且易操作,避免了多糖胶溶液的高粘度性对酶解带来的不便,对多糖胶酶法改性的工业化应用有重要意义。     

人卵清蛋白抑丝酶家族

人ov-抑丝酶家族为抑丝酶家族亚系。多数ov－抑丝酶存在细胞内,作为丝氨酸蛋白酶和半胱氨酸蛋白酶抑制剂参与蛋白质加工处理,细胞凋亡,细胞外基质重构,以及保护细胞免疫损伤等。除了蛋白酶抑制作用之外,人ov-抑丝酶家族还是有其它生物学功能。     

油松幼胚中几种酶的组织化学定位研究

油松(Pinus tabulaeformis)胚胎发育早期,未分化的幼胚中存在着三磷酸腺嘌呤核苷酶、酸性磷酸酶和过氧化物酶。前两种酶分布于胚体的全部细胞内。在胚柄中,主要存在于胚附近的1—3个胚柄细胞内。过氧化物酶的分布可因胚体大小不同而有变化;圆锥形幼胚的胚体及胚附近的胚柄细胞内显示出清晰的过氧化物酶活性,但是在柱状幼胚中,过氧化物酶主要分布在胚体基部及正在伸长的胚柄细胞中。实验结果表明,油松的幼胚细胞内有着多种酶以及旺盛的代谢活动,这些酶的存在可能与幼胚发育分化期间,对附近组织中物质的吸收、利用和转运有关。     

日本鬼You背鳍棘毒腺中Ⅰ,Ⅱ型毒腺细胞关系的探讨

日本鬼Ｙｏｕ背鳍棘毒腺中有两种类型毒腺细胞－－Ⅰ型细胞和Ⅱ型细胞。两咱细胞结构明显不同。本文用形态学方法探讨Ⅰ型与Ⅱ型的细胞的关系。结果表明：毒腺组织中Ⅰ型细胞光镜下有的胸质内可见浅洒点样结构,并且在不同的细胞内其浅染点状结构的多少有差异;电镜下Ⅰ型细胞腊结构差异较大,有的Ⅰ型细胞的脂质双层膜性结构清楚;有的细胞膜外侧可见膜包小泡;有的细胞内侧面也见小泡形成、融合,使脂质双层膜间隙变宽,其内可见膜     

链霉菌MIUG4.46胞内葡萄糖异构酶的提取条件研究

比较了采用不同方法处理链霉菌MIUG4．46的生物量时,细胞内葡萄糖异构酶的释放能力。当联合采用溶菌酶和高压力来破碎细胞时,提取物中葡萄糖异构酶的总酶活力为91．3％,酶的回收率为87％。用溶菌酶溶菌和高压破碎细胞后,在Mg~(2＋)和Co~(2＋)存在的情况下,对细胞悬浮液进行热处理（70℃下加热10min）时,有利于提高提取物中葡萄糖异构酶的纯度,酶的比活力达3．275U／mg蛋白质。     

LAK细胞杀伤直肠腺癌细胞时酶细胞化学定量观察

采用酶细胞化学技术对LAK细胞杀伤HR8348细胞不同时间的效靶细胞内SDH和ACP酶进行动态定量观察。使用MIAS-300型图像分析仪分别检测SDH阳性粒子数及ACP酶灰度值变化。结果显示:1.效靶共育不同时间的HR8348细胞内ACP酶均明显高于对照组,ACP酶随效靶共育时间延长,ACP酶含量增加。癌细胞内SDH含量在共育30分钟时明显增加,60分钟后逐渐下降。2.LAK细胞内ACP酶在60、90、120分钟时酶含量较高,与对照组相比差异非常显著(P<0.01)。SDH在效靶共育60、90、120、240分钟与对照组相比差异显著(P<0.01)。效靶细胞内ACP、SDH含量变化说明两种细胞功能非常活跃,效靶接触早期靶细胞内SDH变化可能与靶细胞抵御损伤因素表现出细胞功能活跃有关。靶细胞内ACP酶含量增加,是靶细胞内溶酶体活化的表现,也是靶细胞自溶的物质基础。     

重金属镉通过DNA氧化损伤途径诱导细胞中心体扩增

目的:研究氯化镉(CdCl_2)对细胞中心体扩增的影响,及活性氧(ROS)和DNA损伤在CdCl_2诱导细胞中心体扩增中的作用。方法:用不同浓度(0、10、20、40μmol/L)CdCl_2处理HCT116细胞48 h,MTT法检测细胞活性;用低浓度无毒性的CdCl_2处理细胞48 h,免疫荧光实验观察细胞内中心体的扩增;用CdCl_2(20μmol/L)、CdCl_2+N-乙酰半胱氨酸(NAC)处理细胞2 h,活性氧检测试剂盒检测细胞内ROS水平的变化;用CdCl_2(20μmol/L)、CdCl_2+NAC处理细胞6 h,彗星电泳试剂盒检测细胞内DNA损伤水平的变化;用CdCl_2(20μmol/L)、CdCl_2+NAC处理细胞48 h,免疫荧光观察细胞内中心体的扩增。结果:20μmol/L或以下CdCl_2处理细胞48 h不影响细胞活性;CdCl_2 20μmol/L或以下无毒性剂量CdCl_2诱导细胞中心体发生扩增(P0.01),并呈剂量依赖效应;在20μmol/L CdCl_2处理下,细胞内ROS和DNA损伤水平均明显升高(P0.01),当有抗氧化剂NAC存在时,细胞内升高的ROS和DNA损伤水平均被明显抑制(P0.01);抗氧化剂NAC对CdCl_2诱导的中心体扩增也有明显的抑制效果(P0.01)。结论:氯化镉通过DNA氧化损伤途径诱导细胞中心体扩增。