纳米银抑制肝癌HepG2细胞活力

目的探讨纳米银(AgNPs)对体外培养的人肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响。方法用不同浓度的AgNPs处理肝癌HepG2细胞,采用细胞形态学观察及细胞活力测定(MTT法)来评价AgNPs对HepG2细胞体外增殖的影响,流式细胞仪分析细胞周期分布并检测细胞凋亡率。结果 AgNPs使细胞增殖活性降低,且呈浓度和时间依赖性,细胞呈凋亡形态改变;流式细胞仪检测到细胞凋亡,细胞平均凋亡率呈时间依赖性。AgNPs处理组S期细胞逐渐增多,而G0/G1、G2/M期细胞逐渐减少。结论 AgNPs抑制HepG2细胞生长,使HepG2细胞阻滞于S期,并诱导其凋亡。     

牛樟芝多糖对HepG2细胞酒精性氧化损伤的保护作用

研究了不同剂量(100、200和400μg/mL)的牛樟芝粗多糖(CP)和醇提物后的水提物(WEE)对酒精诱导的HepG2细胞氧化损伤的保护作用.研究结果表明:与模型组比较,各剂量组的CP和200、400μg/mL的WEE均能极显著提高HepG2细胞的细胞活力.100μg/mL的CP和WEE均能极显著降低细胞培养液的A...     

MPEP阻断mGlu5抑制肝癌细胞HepG2增殖

代谢型谷氨酸受体5（metabotropic glutamate receptors 5, mGlu 5）在神经系统的多种病理生理过程中发挥重要作用. mGlu5与肝细胞癌的发生发展关系密切,其抑制剂2-甲基-6-(苯乙基）-吡啶（2-methyl-6-(phenylethyl)-pyridine, MPEP）能够促进肝癌细胞凋亡,抑制肝癌细胞的迁移.在此基础上,进一步探讨了MPEP与肝癌细胞增殖之间的关系.结果显示：在无血清和有血清的条件下,MPEP均能显著降低肝癌细胞HepG2的细胞活力.同时发现,有血清条件下MPEP能使HepG2细胞周期停滞在G1 期,显著降低HepG2细胞的DNA合成能力和克隆形成能力,并能下调细胞增殖信号ERK 通路的活性.该研究结果为进一步认识MPEP对肝癌细胞的抑制作用提供了新的实验证据.     

丹参酮Ⅰ通过诱导凋亡抑制HepG2细胞生长

目的:研究丹参酮Ⅰ对肝癌细胞HepG2生长的影响。方法:MTT法检测丹参酮Ⅰ对HepG2细胞增殖的影响,Western印迹检测经丹参酮Ⅰ处理的HepG2细胞中凋亡标志物c-Parp和周期蛋白D1的表达变化,流式细胞术检测细胞的凋亡及周期分布。结果:MTT分析发现丹参酮Ⅰ可抑制HepG2细胞的生长;经丹参酮Ⅰ处理的HepG2细胞中凋亡标志物c-Parp表达升高,周期蛋白D1表达无明显变化;流式细胞术分析结果进一步证明丹参酮Ⅰ可诱导HepG2细胞发生凋亡,对细胞周期分布无明显影响。结论:丹参酮Ⅰ通过诱导细胞凋亡而抑制HepG2细胞的生长,对细胞周期无明显阻滞,为进一步研究丹参酮Ⅰ的抗肿瘤作用分子机制提供了线索。     

糖调节蛋白78抗四氯化碳诱导的人HepG2细胞脂肪合成

为研究糖调节蛋白78（glucose regulated protein 78, GRP78）对肝细胞脂肪变性的影响,采用四氯化碳（carbon tetrachloride, CCl₄）刺激人肝癌HepG₂细胞,油红O染色证实,CCl₄作用HepG₂细胞后,细胞浆中脂肪颗粒明显增加,同时固醇调节元件结合蛋白1(sterol regulatory element binding protein 1, SREBP-1)蛋白水平和3羟3甲基戊二酸单酰CoA还原酶（HMGCoA还原酶）mRNA水平分别为对照组的1.55倍和1.70倍.构建人GRP78启动子荧光素酶报告基因载体pGL3/hGRP78P转染人肝癌HepG₂细胞后,结果发现,CCl₄促进GRP78基因转录,转录活性为诱导前的1.92倍. 构建人GRP78 RNAi沉默质粒pSuper/GRP78转染人肝癌HepG₂细胞后,该质粒能特异性沉默内源性GRP78;内源性GRP78沉默后的人肝癌HepG₂细胞经CCl₄诱导, HMGCoA还原酶mRNA和SREBP-1蛋白的表达较对照组进一步升高,分别为对照组的1.48倍和2.38倍;人肝癌HepG₂细胞GRP78的体外过表达能降低CCl₄介导的HMGCoA还原酶mRNA和SREBP-1蛋白诱导表达,分别为对照组的78.5％和51.5％;油红O染色进一步证实,GRP78过表达可明显减少脂肪颗粒在HepG2细胞浆中的集聚.综上表明,GRP78可抑制CCl₄的SREBP-1和HMGCoA还原酶的诱导表达以及HepG₂细胞脂肪变性,提示GRP78的表达增加在肝细胞脂肪变性损伤过程中具有潜在的保护作用.     

NF-kB 拮抗剂PDTC 对HepG2 细胞的抑制及对caspase-3 表达的影响

目的:研究NF-kB拮抗剂PDTC诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及其对凋亡相关基因caspase-3表达的影响,初步探讨其诱导凋亡的可能机制。方法:以不同浓度的PDTC处理人肝癌HepG2细胞,利用MTT法检测对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响;利用RT-PCR和Western-blot检测caspase-3mRNA和蛋白的表达。结果:不同浓度PDTC作用人肝癌HepG2细胞不同时间后,能够显著抑制HepG2细胞的生长增殖,存在剂量和时间依赖性(P<0.05);PDTC能够上调HepG2细胞中caspase-3mRNA和蛋白的表达。结论:NF-kB拮抗剂PDTC对人肝癌HepG2细胞产生显著抑制,并能上调HepG2细胞中caspase-3mRNA和蛋白的表达。     

NF-kB拮抗剂PDTC对HepG2细胞的抑制及对caspase-3表达的影响

目的：研究NF-kB拮抗剂PDTC诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及其对凋亡相关基因caspase-3表达的影响,初步探讨其诱导凋亡的可能机制。方法：以不同浓度的PDTC处理人肝癌HepG2细胞,利用MTT法检测对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响;利用RT-PCR和Western-blot检测caspase-3mRNA和蛋白的表达。结果：不同浓度PDTC作用人肝癌HepG2细胞不同时间后,能够显著抑制HepG2细胞的生长增殖,存在剂量和时间依赖性（P〈0.05）;PDTC能够上调HepG2细胞中caspase-3mRNA和蛋白的表达。结论：NF-kB拮抗剂PDTC对人肝癌HepG2细胞产生显著抑制,并能上调HepG2细胞中caspase-3mRNA和蛋白的表达。     

水飞蓟宾抑制肝癌细胞HepG2增殖和迁移能力

目的探讨水飞蓟宾对肝癌细胞生长、增殖和迁移能力的影响。方法用含不同浓度水飞蓟宾的培养基孵育HepG2细胞后,采用倒置显微镜观察细胞形态,应用MTT法、Ed U掺入实验和细胞克隆形成实验法检测细胞增殖能力,应用细胞划痕试验分析水飞蓟宾对HepG2迁移能力的影响。结果用不同浓度水飞蓟宾刺激HepG2细胞后,倒置显微镜镜检显示:水飞蓟宾刺激使细胞数目减少,胞体皱缩变小,高浓度刺激时出现较多的死亡细胞。MTT分析、Ed U增殖实验和克隆形成实验显示:水飞蓟宾刺激使细胞增殖能力显著降低,细胞的克隆形成数显著减少。细胞划痕试验结果显示:水飞蓟宾对HepG2细胞的迁移爬行能力也产生明显抑制作用。结论水飞蓟宾能抑制HepG2细胞的增殖和迁移能力,这可能是其发挥抗肿瘤作用的机制之一。     

香蕉皮抗氧化和抑制人肝癌HepG2细胞活性研究

对香蕉皮提取物（banana peel extraction,BPE）的体外抗氧化作用和抗肿瘤活性进行了研究。使用福林酚和硝酸铝法测定BPE中总多酚和总黄酮含量;通过检测DPPH和O₂^-自由基清除能力测定BPE的体外抗氧化活性;采用Alamar Blue法检测BPE对HepG2细胞活性的影响;荧光染色及流式技术检测HepG2细胞凋亡;免疫印迹技术检测凋亡蛋白的变化;Caspase活性检测试剂盒测定Caspase-3和Caspase-9的活性;Caspase-9和Caspase-3抑制剂验证BPE抗肿瘤相关的信号转导通路。结果表明,BPE中总多酚和总黄酮含量分别为39.23 ± 2.35 mg·L^-1和26.53 ± 1.97 mg·L^-1;BPE显示出一定的DPPH和O₂^-自由基清除能力（65.31%±3.82%和51.29%±4.23%）,可明显抑制HepG2细胞的增殖（IC₅₀=54.32 mL·L^-1）;BPE通过上调Caspase-3、Bax、Bid、Apaf-1、Bak、p53、Caspase-9的表达,下调Bcl-2、Bcl-xl的表达诱导HepG2细胞凋亡;Caspase-9和Caspase-3抑制剂（Z-LEHD-FMK、Ac-DEVD-CHO）在一定程度上逆转了BPE的增殖抑制活性。BPE具有一定的自由基清除能力,对HepG2细胞具有明显增殖抑制作用,这些结果为香蕉皮的进一步开发利用提供了数据支撑。     

乙型肝炎病毒对HepG2细胞侵袭的影响

目的研究HBV全长对HepG2细胞侵袭相关基因表达及活性的影响,探讨HBV在整体水平对HepG2细胞侵袭的影响。方法采用定量PCR分析HBV对HepG2细胞MMP2、9和TIMP1-4基因转录的影响;通过明胶酶谱及反相明胶酶谱检测MMP2、MMP9及TIMPs的活性;应用体外侵袭小室法检测细胞的侵袭能力。结果HBV的复制可以促进HepG2细胞MMP2、MMP9、TIMP1和TIMP3基因的转录,抑制TIMP4基因转录,增强HepG2细胞MMP2、MMP9的活性并增强细胞中TIMP1、TIMP3功能,HBV稳定复制的细胞具有更强的体外侵袭能力。结论HBV可影响HepG2细胞MMPs和TIMPs的基因转录、表达及功能,促进HepG2细胞的体外侵袭,这可能与HBV相关的HCC侵袭转移密切相关。     

玉竹多糖对酒精诱导的HepG2细胞损伤的保护作用及其机制*

目的: 探究玉竹多糖对酒精诱导HepG2细胞损伤的保护作用及潜在的分子机制。方法: 通过噻唑蓝(MTT)法筛选酒精处理HepG2细胞的合适浓度和玉竹多糖干预浓度后,将HepG2细胞按照不同干预浓度(200 μg/L、400 μg/L和600 μg/L)的玉竹多糖分组,并设未添加玉竹多糖的空白组,预处理1 h后,再用4%酒精处理24 h,每组设置3个复孔,检测细胞内丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性,检测细胞内活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、白介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,检测细胞Kelch 样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)、磷酸化核因子E2相关因子 2(p-Nrf2)、磷酸酰胺腺嘌呤二核苷酸醌氧化还原酶-1(NQO1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved-caspase-3)蛋白表达。结果: 与4%酒精处理后的HepG2细胞对比,各浓度玉竹多糖的干预能有效下调酒精诱导HepG2细胞内ALT和AST活性(P＜0.05);200 μg/L浓度玉竹多糖组的IL-1β和TNF-α水平明显下降(P＜ 0.05),而GSH水平明显上升(P＜0.01);400 μg/L和600 μg/L浓度玉竹多糖组的ROS、MDA、IL-1β和TNF-α水平明显下降(P＜0.05或P＜ 0.01),而GSH水平明显上升(P＜0.01)。玉竹多糖在有效上调酒精诱导HepG2细胞内p-Nrf2和NQO1蛋白表达的同时也下调Bax/ Bcl-2指数(P＜0.05),抑制Keap1和cleaved-caspase-3蛋白表达(P＜0.05)。结论: 玉竹多糖能通过调控Nrf2/ Keap1通路改善酒精诱导HepG2细胞氧化应激损伤,从而降低HepG2细胞炎症指数和细胞凋亡水平,其中400 μg/L和600 μg/L玉竹多糖的干预效果较好。     

p100蛋白表达抑制的HepG2肝癌细胞稳定株的建立

目的建立p100表达抑制的HepG2肝癌细胞稳定株,并初步探讨p100在HepG2肝癌细胞中的功能。方法用脂质体将含有真核细胞筛选标记Neo和GFP的p100 shRNA表达质粒转染入HepG2细胞。经G418耐药筛选稳定整合抗药基因的细胞单克隆;荧光镜检GFP阳性细胞单克隆,挑取单克隆;Western检测HepG2细胞稳定株HepG2（p100I）中p100表达的抑制效果;平板细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;MTS法检测细胞存活;划痕实验检测细胞迁移能力。结果成功获得了p100表达抑制的HepG2肝癌细胞稳定株HepG2（p100I）,其中p100的表达明显降低。并且实验表明,该p100表达抑制稳定株的克隆形成能力,抵抗化疗药物Cisplatin诱导的细胞死亡的能力和迁移能力明显低于对照组细胞。结论p100表达抑制的HepG2肝癌细胞稳定株的建立为研究p100蛋白在肝癌中的作用提供了体外细胞系模型,基于此稳定株的研究,发现p100能够影响HepG2肝癌细胞的多种细胞功能。     

共轭亚油酸对HepG2细胞脂质沉积的影响

目的:研究共轭亚油酸(conjugated linoleic acid,CLA)对HepG2细胞脂肪沉积的影响,以探讨其对肝脏脂肪沉积的可能机制.方法:体外培养HepG2细胞,不同浓度CLA(0、10、50、100 μmol.1-1)作用24小时后,100 nmol.1-1胰岛素作用1小时.以比色法测定培养液中游离脂肪酸的含量,油红O染色观察细胞脂肪沉积,Western-blot检测Akt和P-Akt蛋白表达.结果:随着CLA浓度增加,培养液中的游离脂肪酸含量显著降低,细胞中红染脂滴增多,Western-blot结果发现,Akt蛋白的磷酸化水平增高.结论:CLA可以增加细胞内脂肪合成和细胞中Akt蛋白的磷酸化水平.     

牛磺酸对HepG2细胞甘油三酯合成的影响研究

本文探讨牛磺酸对HepG2细胞甘油三酯合成的影响,为牛磺酸预防/改善机体高脂状态的深入研究提供参考。在DMEM培养基中添加0.05 mmol/L油酸建立高甘油三酯细胞模型,分别以终浓度为1、5、10、20 mmol/L的牛磺酸处理细胞24、48、72 h,测定细胞内甘油三酯水平;并检测5 mmol/L牛磺酸作用24 h后细胞内固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)及脂肪合成相关酶乙酰辅酶A合成酶(AceCS)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、脂肪酸合成酶(FAS)、长链酰基辅酶A合成酶1(ACSL1)的蛋白表达水平。1 mmol/L牛磺酸作用72 h,5和10 mmol/L牛磺酸作用24、48、72 h,20 mmol/L牛磺酸作用24和48 h均可使高脂HepG2细胞内甘油三酯水平显著下降(P<0.05);5 mmol/L牛磺酸作用24 h,高脂HepG2细胞的SREBP-1c、FAS、ACC、AceCS1、ACSL1表达明显减少(P<0.05),磷酸化ACC表达显著增加(P<0.05)。结论:牛磺酸通过调控SREBP-1c及其下游靶基因而抑制高脂HepG2细胞脂...     

锤头状核酶在HepG2细胞中抑制adr亚型的乙型肝炎病毒

针对HBV基因组设计了三种锤头状核酶－－RS3、RC2和RC1。将裸露的和用tRNA包埋的核酶（RtS3、RtC2和RtC1）基因插入RNA修剪质粒pRG523中,然后转变为真核表达载体,使用同样克隆技术,构建由不同长度（2、4、8、12个）RS3或12个RtS3连成的鸟枪型真核表达载体,将它们分别与带有HBV基因组的质粒共转染人肝癌细胞系HepG2,用G418筛选抗性细胞。分析不同种类的核酶在G418抗性细胞中的HBV抑制活性,包括子代HBV－DNA、HBV－RNA和抗原（HBsAg或HBcAg/HBeAg)表达的减少。结果表明,所有设计的核酶对HBV有＞70％的抑制活性,而tRNA包埋核酶的活性略高于裸露核酶。特别值得提出的是,由8个或12个相同核酶连接的鸟枪型质粒（8RS3、12RS3和12RsS3）具有很高的抑制HBV活性,达到＞9－％的抑制。     

Apelin 通过调节ROS 水平抑制TNF-α 诱导的HepG2 细胞凋亡

目的:探讨apelin在肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导的肝细胞凋亡中的作用及可能机制。方法:PCR检测HepG2细胞和原代小鼠肝细胞中APJ受体的表达;采用Hoechst 33342染色检测TNF-α诱导的HepG2细胞凋亡;用活性氧(ROS)检测试剂盒结合流式细胞术测定细胞内ROS水平;通过Western blot检测信号分子JNK的磷酸化水平;比较给予apelin处理对上述指标的影响。结果:HepG2细胞和原代小鼠肝细胞均表达APJ受体;apelin可抑制TNF-α导致的细胞内ROS生成增多和JNK磷酸化水平升高并减少TNF-α诱导的HepG2细胞凋亡。结论:Apelin可能通过拮抗TNF-α诱导的细胞内ROS水平升高,使JNK信号失活,从而抑制HepG2细胞凋亡。     

抑制survivin表达增强人肝癌HepG2细胞对高线性能量转移射线的辐射敏感性

探讨了肿瘤细胞中survivin的表达对高线性能量转移(LET)射线辐射敏感性的影响.根据Gen Bank提供的survivin序列,合成特异性survivin-siRNA寡核苷酸,转染人肝癌HepG2细胞,抑制survivin的表达.发现siRNA转染后诱导了HepG2细胞G2/M期阻滞,增加了自发性和辐射诱导的细胞凋亡.在高线性能量转移(LET)碳离子辐照后,siRNA转染细胞的克隆存活率明显下降.这些结果表明survivin表达是HepG2细胞产生对高LET射线辐射抗性的关键因素.     

慢病毒介导的甲胎蛋白敲减表达抑制肝癌细胞HepG2的增殖

甲胎蛋白（AFP）是原发性肝癌的标志物.本实验室前期研究表明,AFP的表达与肝癌细胞的增殖及细胞周期相关.为了建立高效稳定的AFPsiRNA细胞导入方法,本研究构建了AFP慢病毒siRNA干涉载体pRNAT-U6.2/AFPsiRNA.并将其转入HEK293细胞后,Western 印迹表明,pRNAT-U6.2/AFPsiRNA的干扰效率为88.7%（P<0.05）. pRNAT-U6.2/AFPsiRNA与4个包装质粒共同转染293T细胞包装成慢病毒后感染HepG2细胞,感染3 d时GFP的表达量达95%,感染35 d的子代细胞中GFP的表达量仍稳定在85%.GFP表达量的观察显示,慢病毒载体可以高效并稳定表达外源基因. Western 印迹结果也显示,HepG2细胞被病毒感染3 d和25 d后,AFP表达水平均有降低,抑制率分别为74.8%和63.4%(P<0.05).克隆形成实验表明,AFP沉默后,细胞克隆形成个数降低63%(P<0.01),表明HepG2细胞增殖能力受到抑制.     

7株野生虫草菌的鉴定及其菌丝体醇提取物对HepG2细胞的抑制活性

结合形态学与ITS序列分析对7株野生虫草真菌进行分类鉴定。MTT法分析它们的菌丝体醇提取物对肝癌HepG2细胞增殖的抑制活性。鉴定结果表明菌株MF7、MF9、MF14为细脚棒束孢Isaria tenuipes,菌株MF11、MF12、MF13为蝉棒束孢Isaria cicadae,菌株MF10为球孢白僵菌Beauveria bassiana;MTT结果显示分离到的3株细脚棒束孢和3株蝉棒束孢的菌丝体醇提取物对HepG2的抑制活性较差,IC₅₀均大于500μg/mL;球孢白僵菌MF10对HepG2细胞有一定抑制作用,IC₅₀值为221.6μg/mL,略强于蝙蝠蛾拟青霉发酵菌丝粉产品金水宝胶囊（IC₅₀=364μg/mL）和中华被毛孢发酵菌丝粉产品百令胶囊（IC₅₀=268.7μg/mL）。另外,发现供对比试验的3株蛹虫草菌株（MF1、MF5、MF15）对HepG2细胞均有较好的抑制作用,其中MF15的发酵菌丝体醇提取物活性最强,IC₅₀为55.56μg/mL,暗示蛹虫草发酵菌丝体具有重要的研究价值。