受体型酪氨酸激酶ErbB受体亚族研究进展

ErbB受体亚族属于受体型酪氨酸激酶(RTK)超家族中的I亚族,对于胚胎发育是必需的,并与腺体肿瘤的癌变有关。ErbB受体亚族有4个成员,它们在上皮和神经等组织内表达。本综述了ErbB受体亚族的研究概况,以及ErbB受体介导的信号转导机制及其在癌变中的作用机理等研究进展。     

受体型酪氨酸激酶RON异构体:潜在的肿瘤治疗靶标

RON是MET原癌基因家族的一员,与特异性配体MSP结合后,能通过激活下游RAS/ERK、PI3K/AKT等信号通路调节细胞的增殖、分化和侵袭等。RON是跨膜蛋白,结构上可分为胞外、跨膜和胞内3个片段,各片段具有其特异性的功能区。近年研究发现,由于前体mRNA选择性剪接,蛋白酶解和选择性转录等产生了多种RON异构体及转录本。由于缺失、插入或突变的结构不同,产生的RON异构体的功能也不尽相同。在研究RON的亚结构功能时,具有不同甚至拮抗功能的异构体,能提供大量有益的帮助。但同时,这些异构体影响了对RON表达的定量分析以及其特异性治疗效果。更加深入了解不同RON异构体的结构及其亚单位的功能,也能为基于RON的靶向治疗提供更多有利的参考。     

非受体型酪氨酸激酶JAK1基因真核表达质粒的构建与真核表达

[目的]构建非受体型酪氨酸激酶JAK1(nonreceptor tyrosine kinase-JAK1)基因真核表达质粒pcDNA4.0-HisJAK1,并转染293T细胞进行真核表达。[方法]从Hela细胞中提取总的RNA,通过RT-PCR获得JAK1基因全长c DNA序列,并将其克隆至真核表达载体pcDNA4.0-His中,构建重组质粒pcDNA4.0-His-JAK1。将真核重组表达质粒转染293T细胞,转染48 h后,在荧光显微镜下观察转染情况。免疫印迹法检测JAK1蛋白转染24 h、36 h与48 h在293T细胞中的表达。[结果]经双酶切与质粒PCR鉴定质粒克隆正确,测序鉴定序列中第2199位碱基A突变为G,为同义突变,不影响氨基酸序列。转染293T细胞48 h后,间接免疫荧光实验显示在293T细胞中检测到绿色荧光。免疫印迹检测可见大小约为133 kDa的目的蛋白。[结论]成功获得JAK1基因全长序列,并成功构建pcDNA4.0-HisJAK1真核重组表达质粒,并在真核细胞293T中获得有效表达,为进一步研究JAK1蛋白质相互作用奠定了基础。     

受体型酪氨酸激酶PDGFRβ在毕赤酵母中的表达与纯化

构建了受体酪氨酸激酶 PDGFRβ 的融合表达载体 pPIC3.5K-PDGFRβ, 转化毕赤酵母GS115, 通过组氨酸营养缺陷型筛选, G4l8 高拷贝菌株筛选, 以及摇瓶诱导表达筛选, 得到一株高表达 PDGFRβ 毕赤酵母菌株 M3。对该菌株进行5 L罐培养, 镍柱亲和纯化在 250 mmol/L 咪唑浓度下洗下 PDGFRβ 融合蛋白, Western blot验证约为90.08 kD, 酶联免疫反应检测表明融合表达的PDGFRβ 具有高的酪氨酸激酶活性。为筛选其小分子抑制剂奠定了基础。     

受体型酪氨酸激酶RON异构体:潜在的肿瘤治疗靶标北大核心CSCD

RON是MET原癌基因家族的一员,与特异性配体MSP结合后,能通过激活下游RAS/ERK、PI3K/AKT等信号通路调节细胞的增殖、分化和侵袭等。RON是跨膜蛋白,结构上可分为胞外、跨膜和胞内3个片段,各片段具有其特异性的功能区。近年研究发现,由于前体mRNA选择性剪接,蛋白酶解和选择性转录等产生了多种RON异构体及转录本。由于缺失、插入或突变的结构不同,产生的RON异构体的功能也不尽相同。在研究RON的亚结构功能时,具有不同甚至拮抗功能的异构体,能提供大量有益的帮助。但同时,这些异构体影响了对RON表达的定量分析以及其特异性治疗效果。更加深入了解不同RON异构体的结构及其亚单位的功能,也能为基于RON的靶向治疗提供更多有利的参考。     

受体型酪氨酸激酶RON在人细支气管肺泡癌发病机理中的作用

细支气管肺泡癌（bronchioloalveolar carcinoma,BAC）是一种以在肺泡和终末细支气管生长为主要特征的肺癌,占全部肺癌的5％-10％。近期BAC的发病率呈上升趋势。绵羊肺腺病是一种在病理形态上与人BAC极其类似的肺恶性肿瘤,病因是Jaagsiekte绵羊逆转录病毒。然而,人BAC的病因及发病机理至今不明。受体型酪氨酸激酶RON是原癌基因MET家族的一员,RON及其变异体在人BAC样品中呈高度的异常表达。转基因小鼠的实验进一步证明,定向性的在肺泡二型上皮细胞中表达RON,能诱发具有人BAC特征的小鼠肺肿瘤,RON致癌的基础是其传导的异常信息途径。采用特异性siRNA和单克隆抗体干扰RON的表达,能抑制RON介导的BAC的生长。因此,RON的异常表达是特异性药物作用的靶点,阐明原癌基因RON在BAC发病机理中的作用具有重要的临床意义。     

ErbB2受体酪氨酸激酶激酶区的表达与纯化

以GFP融合表达的形式在毕赤酵母中表达具有生物活性的受体酪氨酸激酶ErbB2的激酶区.构建受体酪氨酸激酶激酶区与GFP的融合表达载体pPIC3.5K,转化毕赤酵母GS115,通过组氨酸营养缺陷型筛选,G418高拷贝菌株筛选,以及摇瓶诱导表达筛选,选取较高水平表达菌株进行5升罐培养,以镍亲和层析手段纯化得到蛋白表达产物,进行SDS-PAGE分析和酶联免疫反应检测酶活.结果表明在毕赤酵母中成功诱导表达了约100kD的激酶融合蛋白并具有激酶活性.该研究为筛选ErbB2的抑制剂奠定了基础.     

PI3K和受体型酪氨酸激酶介导家蚕麻痹肽免疫诱导信号的传递

【目的】普遍存在于鳞翅目昆虫中的ENF肽具有非常相似的结构和生理功能, 对昆虫的发育、 免疫、 应激反应等方面都起着重要的调控作用。有研究报道, 作为ENF肽家族成员之一的家蚕Bombyx mori麻痹肽（paralytic peptide, PP）通过激活MAPK来调控家蚕的免疫应答, 但其完整的分子作用机制尚不明确。本研究旨在解析传递家蚕PP免疫诱导信号的分子通路。【方法】首先通过荧光定量PCR检测了多种昆虫细胞系在PP诱导下抗菌肽基因的转录水平, 并利用Western blot检测p38 MAPK的磷酸化水平, 然后利用不同信号传递分子的抑制剂处理BmE细胞筛选参与传递PP免疫诱导信号的分子。【结果】PI3K抑制剂LY294002和受体型酪酸激酶抑制剂Genistein抑制了PP对BmE细胞抗菌肽基因表达的诱导作用; 且BmE细胞和家蚕血细胞在PP的诱导下, Akt和大小约为70 kDa的细胞膜蛋白均出现磷酸化水平的动态变化。【结论】PI3K/Akt信号通路和Genistein敏感性的受体型酪氨酸激酶介导了PP免疫诱导信号的传递。     

受体酪氨酸激酶依赖的信号转导在突触可塑性中的研究

突触可塑性对于脑发育过程中的神经环路重构以及学习记忆等脑的高级功能是非常重要的。许多受体酪氨酸激酶家族成员,包括TrkB、ErbB和Eph在神经连接的建立和重构过程中起到核心作用。比如,突触后EphB依赖的信号会导致树突棘的产生和神经递质受体的聚集,而ephrinA引起的EphA4激活可以导致树突棘的回缩。但是,目前对EphA4依赖的树突棘重组和对神经递质受体的调节背后的机制还知之甚少。本文将集中探讨EphA4及其下游的信号通路在神经肌肉接头和中枢神经的突触中,对神经递质受体的调节功能。     

Fyn酪氨酸激酶与酒精引起的神经元损伤有关

Ｆｙｎ酪氨酸激酶与酒精引起的神经元损伤有关ｆｙｎ基因编码一种非受体酪氨酸激酶,可以使ＮＭＤＡ受体磷酸化,１９９２年证明该酶在突触传递的长时程增强效应（ＬＴＰ）的形成以及空间学习中起重要作用。最近,日本的Ｎｉｋｉ等发现,小鼠对酒精的敏感性至少部分取决于...     

Tyro3受体酪氨酸激酶亚家族的研究进展

受体酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinases ,RTKs)为一类细胞表面跨膜蛋白,在介导细胞外信号向胞内传导过程中起重要作用.目前已发现约60种RTKs,按照受体与配体特征将其分为20个亚家族,其中Tyro3受体酪氨酸激酶亚家族由三个成员组成:Tyro3 (又名Rse, Sky, Brt, Dtk, Etk2或Tif)[1-3]、Axl (又名Ufo,Ark或Tyro7)[4-6]和Mer (又名Nyk ,Eyk或Tyro12)[1,7-9].其分子均由胞外区、胞内区和跨膜区三部分组成,为单次跨膜蛋白,在人或动物的多种组织中广泛表达.它们具有共同的配体:Gas6和Protein S.Tyro3受体酪氨酸激酶亚家族在调节细胞的增殖与分化中起着重要作用,然而其确切的功能和作用机理尚不清楚.目前该领域的研究越来越受到人们的重视,并正取得较大的进展.本文旨在综述Tyro3受体酪氨酸激酶亚家族及其配体的发现、特征及最新的研究进展,为从事该领域研究的工作者提供参考资料.     

肝细胞生长因子调节的酪氨酸激酶底物过表达促进心肌细胞自噬

目的:构建和包装携带肝细胞生长因子调节的酪氨酸激酶底物(Hgs)全长基因的重组腺病毒,并研究Hgs过表达对心肌细胞自噬的影响。方法:PCR扩增Hgs全长cDNA,将其连接到pMD18-T载体上,测序确认正确后将其克隆到腺病毒穿梭载体pAd Track-CMV,该载体线性化后转化大肠杆菌BJ5183感受态细胞,与腺病毒骨架质粒pAd Easy-1同源重组,构建重组腺病毒质粒pAd-Hgs;将pAd-Hgs线性化后经脂质体转染293A细胞进行Ad-Hgs病毒的包装与扩增;用得到的Ad-Hgs腺病毒感染心肌细胞,通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,Western印迹、real-time PCR确认病毒感染的有效性以及Hgs过表达情况;通过Western印迹检测自噬标志物LC3的转换(LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ),以分析Hgs过表达对心肌细胞自噬的影响。结果:包装了携带Hgs基因的重组腺病毒Ad-Hgs;Ad-Hgs重组腺病毒感染心肌细胞后,荧光显微镜观察到明显的GFP表达;real-time PCR、Western印迹结果显示Hgs在心肌细胞中得到过表达;Western印迹结果证明,Hgs过表达导致心肌细胞LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值明显升高。结论:通过包装携带Hgs cDNA的重组腺病毒,发现Hgs过表达促进心肌细胞自噬。     

α7-nAChR基因敲除小鼠海马神经元突触传递和神经网络的电生理表型（英文）

研究显示,含有α7亚基的烟碱型乙酰胆碱受体(α7 nicotinic acetylcholine receptor,α7-nAChR)基因敲除(α7 KO)的小鼠表现出很少的功能表型。本文旨在研究α7 KO对小鼠海马电生理特征的影响。用标准胞外场电位记录评估α7 KO对小鼠海马CA3-CA1突触传递的影响,用穿孔膜片钳记录检测小鼠海马单个神经元γ-氨基丁酸A型受体(γ-aminobutyric acid A-type receptor, GABA_A-R)的电生理学表型。结果显示,与野生型小鼠相比,α7 KO小鼠海马CA1神经元场兴奋性突触后电位(field excitatory postsynaptic potential, fEPSP)斜率显著降低,卡巴胆碱诱发的θ振荡显著减少。在给予GABA_A-R激动剂蝇覃醇(muscimol)条件下,与野生型小鼠相比,α7 KO小鼠海马CA1和CA3神经元I–V曲线均向去极化方向明显移动。以上结果提示,α7KO小鼠海马CA3-CA1突触传递显著受损,GABA_A-R成熟显著延迟,表明α7-nAChR基因缺失可显著改变海马的电生理功能,这可能为α7-nAChR在海马功能和海马相关疾病中作用的理解提供了新的认识。     

嗅觉回路中分组神经元之间的非突触抑制

哺乳动物的味蕾和昆虫的化学感受器等感觉器官的受体细胞都有显著的分组(group)现象,其功能尚不清楚。Su等人证实果蝇的相邻嗅觉受体神经元(ORN)之间存在着由非突触结构介导的、能调节嗅觉行为的侧向抑制。该研究成果发表在新一期《Nature》上。     

受体型蛋白质酪氨酸磷酸酶α的生物学特性及其在肿瘤发生中的作用

受体型蛋白质酪氨酸磷酸酶α(receptor-type protein tyrosine phosphataseα,RPTPα)是一种广泛表达的膜受体,在细胞生长、细胞分化、细胞周期及肿瘤发生中起着重要调控作用。该文从RPTPα的基因基本结构特征、受体二聚化及RPTPα-c-Src和整合蛋白介导的信号转导通路等方面对RPTPα的生物学特性进行了阐述,并重点总结了RPTPα在结直肠癌、乳腺癌、胃癌等肿瘤发生中的主要促癌作用,归纳了RPTPα在不同肿瘤中介导的主要信号转导途径及其在相关信号转导通路中的功能。在此基础上,该文提出了今后可能的研究方向。     

槲皮素抑制中枢神经突触前兴奋性依赖的胞吞动力学（英文）

目的 槲皮素是一种广泛分布于药用植物中的黄酮类化合物，传统被认为具有神经保护作用。本研究利用位于大鼠脑干花萼状突触的突触前神经末梢进行膜片钳记录，研究槲皮素调控突触传递和可塑性的突触前机制。方法 利用全细胞膜片钳结合膜电容记录，在突触后记录微小兴奋性突触后电流（m EPSC），在突触前神经末梢记录钙內流和神经囊泡的释放、回收以及可立即释放库（RRP）的恢复动力学。并且利用纤维刺激在轴突给予5～200 Hz的刺激，诱发突触后EPSC，记录突触后短时程抑制（STD）。结果 100μmol/L槲皮素不影响突触后m EPSC的振幅、频率以及AMPA受体的动力学特征。在突触前神经末梢，槲皮素不改变钙内流或囊泡的释放，但显著抑制胞吐后网格蛋白依赖的慢速胞吞。抑制胞吞会导致突触前囊泡动员的减慢，降低RRP的补充速率，并且增强高频刺激下的短时程可塑性STD。结论 本研究为槲皮素调控中枢神经突触传递提供全新的突触前神经机制，槲皮素有助于抑制中枢神经过度兴奋，进而发挥神经保护作用。     

受体型蛋白酪氨酸磷酸酶PCP-2与β-catenin相互作用的结构基础

PCP-2是MAM型受体型蛋白酪氨酸磷酸酶亚家族的新成员. 为研究PCP-2与β-catenin相互作用的结构基础, 构建了PCP-2胞内区各结构域的缺失突变体, 将其及野生型PCP-2分别与β-catenin共转染至BHK-21细胞, 采用免疫共沉淀和Western 印迹分析PCP-2与β-catenin相互作用的结构基础. 结果表明, 在野生型PCP-2及上述缺失突变体中, 除PCP-2 EXT (缺失包括近膜区在内的整个胞内区的PCP-2)外, 野生型PCP-2, 缺失胞内区两个磷酸酶结构域的PCP-2 (PCP-2DC1C2)及缺失胞内区第2个磷酸酶结构域的PCP-2 (PCP-2DC2)均能与抗β-catenin CT抗体发生免疫共沉淀. 提示PCP-2与β-catenin通过直接结合发生相互作用, 且PCP-2的近膜区是PCP-2与β-catenin结合所必需的结构基础, 它介导二者结合.     

突触前膜蛋白激酶C的活化参与介导海马神经元强直后增强

囊泡胞吐作用 (vesicleexocytosis)是由突触囊泡和突触膜蛋白之间复杂的相互作用最终导致的。参与此过程的很多膜蛋白是蛋白激酶的作用底物。外源性蛋白激酶激活剂能增加突触囊泡释放概率 (releaseprob ability)。但是 ,蛋白激酶如何激活并影响胞吐作用 ,却尚未知晓。一般认为 ,强直后增强 (post tetanicpotentiation ,PTP)是谷氨酸瞬间释放的结果 ,由短时高频刺激引发突触前膜内Ca2 +水平升高所致。但美国马里兰大学医学院的科研人员最近发现 ,蛋白激酶C也参与介导PTP。他们发现 ,大鼠海马苔藓纤维末端 (hippocampusmossyfiberterminal…     

B淋巴酪氨酸激酶的研究进展

B淋巴酪氨酸激酶(BLK)是SRC激酶家族成员之一,具有酪氨酸蛋白激酶活性.BLK作为“中间分子”参与免疫细胞发育、迁移和增殖等生理过程中的信号转导;在疾病进程中,BLK通常表现为表达量降低或激酶活性下降.因此,对BLK的研究将有助于探索发病机制,这对指导临床诊断和治疗具有重要意义.现对BLK的分子特点、功能及其在疾病...