以大蜡螟幼虫为模型研究伏立康唑抗茄病镰刀菌效果

目的构建大蜡螟幼虫动物茄病镰刀菌感染模型并观察伏立康唑治疗效果。方法选用临床分离获得茄病镰刀菌1株,实验所用孢子悬液浓度梯度为1×10⁵~1×10⁸CFU/mL,根据死亡率筛选出最佳感染浓度,并以此浓度感染大蜡螟幼虫,用伏立康唑(1.5 mg/kg)治疗;同时设置未处理组和生理盐水对照组,实验过程中收集大蜡螟幼虫尸体做病理检测并记录5 d内死亡情况,每24 h记录1次。通过感染后病理组织切片和大蜡螟幼虫生存率两个方面进行评价。结果大蜡螟幼虫在1×10⁷CFU/mL茄病镰刀菌感染后,5 d死亡率达100%,1×10⁷CFU/mL为本次实验组最佳感染浓度;大蜡螟幼虫感染第2 d死亡虫体病理检测发现大量茄病镰刀菌菌丝和孢子,经伏立康唑治疗后,单个幼虫体内菌体减少,菌体内菌丝减少;大蜡螟幼虫生存曲线显示伏立康唑治疗组较单茄病镰刀菌感染组生存率显著增高(P<0.05)。结论大蜡螟幼虫能够作为茄病镰刀菌体内感染的动物模型,并可用于观察药物治疗效果。     

茄病镰刀菌致ICR小鼠局部皮肤感染的实验研究

目的建立茄病镰刀菌感染皮肤的ICR小鼠模型。方法将茄病镰刀菌三个不同浓度的菌悬液分别接种于正常和免疫抑制ICR小鼠受损及正常未受损的皮肤,于接种后第7、14、21、28天处死动物,取皮疹和各脏器进行真菌镜检、培养和组织病理学检查。结果正常和免疫抑制组皮肤受损的小鼠均出现皮疹,而免疫抑制组皮疹程度重,持续时间长,且真菌镜检、培养及组织病理学大都可见菌丝。皮肤未受损的小鼠不发生皮疹。实验小鼠均未出现系统播散。结论接种109CFU/mL或1010CFU/mL茄病镰刀菌的孢子悬液于免疫抑制ICR小鼠擦伤的皮肤,可有效造成ICR小鼠的茄病镰刀菌皮肤感染。     

烟曲霉性角膜炎的实验研究

目的:建立烟曲霉角膜炎小鼠模型,探讨烟曲霉角膜炎的形成条件和致病机制.方法:采用划痕法和角膜基质注射法建立烟曲霉角膜炎小鼠模型.造模后观察角膜病变,对病变角膜组织做真菌检查.结果:划痕法造模小鼠角膜感染率低,病变轻,易自愈;对免疫受损小鼠采用划痕法感染率100%,病情较重,病变持久;基质注射法造模感染率为100%,病变严重、持久.结论:烟曲霉孢子对小鼠角膜的感染率与角膜受损程度及黏附的孢子数量呈正比;宿主免疫受损,易诱发烟曲霉角膜炎且病变较重.     

茄病镰刀菌致皮肤透明丝孢霉病1例

目的报告1例茄病镰刀霉引起的皮肤透明丝孢霉病。方法从患者皮损取材作真菌镜检、培养及组织病理学检查。结果直接镜检及组织病理切片均发现真菌菌丝,3次培养均为同一菌株生长。镜下可见大分生孢子基部细胞短、钝圆,小分生孢子呈假头状着生,可见厚壁孢子。根据以上形态学特征鉴定为茄病镰刀菌。结论对于透明丝孢霉病应早期诊断,并进行体外抗真菌药物的敏感试验,明确并有效控制基础疾病。     

茄病镰刀菌感染致角膜溃疡1例

报告1例由茄病镰刀菌感染引起的角膜溃疡。患者男性,40岁,木工,左眼红、痛、流泪、视力下降10 d。经过角膜清创,系统性及局部抗真菌治疗后好转。致病菌株经真菌学鉴定为茄病镰刀菌,它是真菌性角膜炎的常见致病菌之一。真菌性角膜炎病程进展迅速,能否及早诊治关系预后。真菌学检查是确诊的依据,临床应予重视。     

枯草芽孢杆菌对几种植物病原真菌的抑菌活性

枯草芽孢杆菌是目前国内外比较具有应用潜力的生防菌种之一。本文主要研究了枯草芽孢杆菌菌液对几种植物病原菌的菌丝抑制试验、菌丝形态影响试验以及分生孢子萌发抑制试验,了解枯草芽孢杆菌菌液对尖孢镰刀菌古巴专化型、灰葡萄孢、茄病镰刀菌、大丽轮枝菌、麦根腐平脐蠕孢、尖孢镰刀菌的抑制作用及抑菌机理。结果显示:枯草芽孢杆菌菌液对6种病原真菌的菌丝形态、菌丝生长、产孢和分生孢子萌发都有明显的破坏或抑制作用。用枯草芽孢杆菌菌液处理尖孢镰刀菌古巴专化型、灰葡萄孢、茄病镰刀菌、大丽轮枝菌、麦根腐平脐蠕孢、尖孢镰刀菌后,在PDA培养基上均形成了明显的抑菌圈,直径达3. 00 cm左右;菌液处理后分生孢子的萌发率仅30%左右。显微镜观察发现,处理组菌丝生长异常,体表凹凸不平,局部膨大,分枝变多,原生质体外泄。研究表明枯草芽孢杆菌菌株对尖孢镰刀菌古巴专化型、灰葡萄孢、茄病镰刀菌、大丽轮枝菌、麦根腐平脐蠕孢和尖孢镰刀菌有良好的抑制作用,并且可以有效控制尖孢镰刀菌古巴专化型、灰葡萄孢、茄病镰刀菌、大丽轮枝菌、麦根腐平脐蠕孢和尖孢镰刀菌病害的发生。     

糖尿病患者感染轮枝镰刀菌致角膜炎1例

报道糖尿病患者感染轮枝镰刀菌致真菌性角膜炎1例。患者男性,48岁,因右眼红,痛,视力下降20天就诊。患者有2型糖尿病史近10年,注射胰岛素血糖一直控制不佳。刮取角膜分泌物标本进行真菌荧光染色镜检和培养。对培养的菌株进行形态学(乳酸酚棉兰染色)和分子生物学鉴定。真菌荧光染色镜检阳性,镜下可见分支分隔的菌丝及鹿角状菌丝。真菌培养阳性,乳酸酚棉兰染色镜下可见多数棒状的小分生孢子。ITS和Beta-tubulin基因序列分析鉴定为轮枝镰刀菌。依据临床和实验室检查确定诊断右眼角膜炎(真菌性),2型糖尿病。给予患者那他霉素等滴眼液点右眼局部抗炎抗真菌对症处理,用药治疗后再次行眼科检查,患者右眼症状较治疗前明显好转。出院后继续抗真菌抗炎治疗2周,门诊随访。     

14例茄病镰刀菌所致角膜溃疡临床分析

目的探讨真菌性角膜溃疡的病原学特点、临床表现及抗真菌综合治疗的方法。方法对2004年10月-2006年10月送检的疑似感染的角膜标本进行镜检、培养及菌种鉴定。对其中14例病历资料完整的茄病镰刀菌所致角膜溃疡患者进行临床分析。结果在33例送检标本中分离出茄病镰刀菌24株（72．7％）。上述14例患者中,有3例角膜穿孔合并眼内炎行眼球内容物除去术,3例行结膜瓣或羊膜移植,1例角膜移植,7例经非手术治疗保留较好视力。结论茄病镰刀菌是我国北方真菌性角膜炎的主要致病菌,可导致视力严重受损且治愈困难。早期诊断配合以抗真菌为主的综合治疗可阻止病情进展,明显改善视力。     

分离自1例慢性阻塞性肺疾病患者的Aspergillus lentulus在蜡螟模型上的毒力初探

目的建立Aspergillus lentulus(A.lentulus或A.L)感染动物模型,借动物模型初步探究A.lentulus的毒力。方法将125只蜡螟随机分成5组,以Aspergillus lentulus临床株、Aspergillus lentulus标准株作为实验组,烟曲霉、白念珠菌为对照组,PBS为空白对照组。实验组及对照组菌株分别制成10~6 CFU/mL孢子悬液,感染各组蜡螟。记录72 h内蜡螟的生存情况并制作生存曲线,24 h后提取蜡螟肠道组织,HE染色组织切片观察肠道组织损伤情况,用组织匀浆法,测定蜡螟肠道内真菌载量及真菌逆培养阳性率,用真菌荧光染色法观察肠道培养真菌镜下形态。结果 A.lentulus临床株和A.lentulus标准株的蜡螟存活数与对照组之间差异有统计学意义(P0.05);结果显示A.lentulus临床株和A.lentulus标准株肠壁结构大致正常,局部可见水肿少量菌丝、孢子及炎症细胞浸润,对照组肠道结构破坏严重,可见菌丝、孢子及大量炎症细胞浸润;不同菌种感染蜡螟幼虫各组肠道载菌量及真菌逆培养阳性率比较,差异具有统计学意义(P0.05);真菌荧光显微镜观察,A.lentulus临床株和标准株菌丝多、孢子少,白念珠菌和烟曲霉组孢子多。结论与烟曲霉和白念珠菌相比,A.lentulus菌株对蜡螟毒力和肠道损伤能力较弱且致死率低。     

茄病镰刀菌致小腿慢性溃疡1例报告及病原真菌超微结构的研究

报道1例55岁男性农民,因右小腿溃疡4个月余就诊。取其溃疡组织作真菌培养和病理检查,真菌培养在含氯霉素、放线菌酮和不含氯霉素、放线菌酮的沙堡弱培养基中27℃都长出白色棉絮状菌落,而在不含氯霉素、放线菌酮条件下生长更好;在马玲薯培养基中长出镰刀状大分生孢子,菌种鉴定为茄病镰刀菌。8d后从溃疡处再取标本培养仍为茄病镰刀菌生长。病理切片经银染色后发现念珠状分隔菌丝,用透射电镜对病变组织内的菌体形态进行了超微结构研究。予伊曲康唑口服治疗,但患者未复诊而失访。     

1例多器官损伤继发茄病镰刀菌血症的真菌学研究

目的 对车祸致多器官损伤继发茄病镰刀菌血症的真菌学研究.方法 以我院收治的l例多器官损伤的患者为研究对象,采集患者深静脉血液进行血培养,对培养出的真菌进一步行表型分析、分子鉴定,并行E-test真菌药敏实验.结果 血液标本细菌培养阴性,但真菌培养3次呈现丝状真菌生长,对菌丝的表型和分子鉴定检测结果均提示为“茄病镰刀菌”.E-test真菌药敏实验结果提示该菌株对两性霉素（AMB）和伏立康唑（VOZ）敏感,对伊曲康唑（ITZ）、卡泊芬净（CS）和氟康唑（FCZ）耐药.结论 镰刀菌可引起人体局限性或播散性感染,对多种抗真菌药物呈现耐药,常危及生命.因此对车祸后经清创、抗感染等治疗后仍发热者,有必要做血液真菌培养.菌株的鉴定可采用表型分析、分子鉴定.     

月腺大戟根总黄酮对尖孢镰刀菌抑制作用的研究

采用生长速率法和孢子萌发法分别测定月腺大戟根总黄酮对尖孢镰刀菌菌丝生长和分生孢子萌发的抑制率,显微观察总黄酮处理尖孢镰刀菌后菌丝体形态结构的变化,并测定菌丝体相对电导率,菌丝体内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性。结果表明:月腺大戟根总黄酮对尖孢镰刀菌菌丝生长和分生孢子萌发均有显著的抑制作用,抑制率随总黄酮浓度增加而增高,20 mg/L时抑制率达100%。总黄酮处理后的尖孢镰刀菌菌丝较细,分支减少,透明度差,液泡数量增多且形成较大的液泡;菌丝体细胞膜透性增加,SOD、CAT活性呈先上升后下降的趋势。以上实验结果可为植物病害生物防治及开发植物源农药方面提供理论依据和实验技术。     

糖尿病真菌性角膜炎患者临床特征及病原学分析

目的调查与探讨糖尿病真菌性角膜炎患者临床特征及病原学状况,发现影响糖尿病真菌性角膜炎患者预后的主要危险因素。方法采用回顾性研究方法,选择2013年2月~2016年5月在我院眼科确诊的,具有完整病例资料和随访资料的真菌性角膜炎患者120例作为研究对象,包括合并糖尿病的真菌性角膜炎60例(糖尿病组)和无糖尿病的真菌性角膜炎60例(非糖尿病组),调查所有患者的人口学特征、临床症状、病原学检查结果,同时记录患者的预后情况并进行危险因素分析。结果两组患者的性别、体重指数、病程等对比,差异无统计学意义(P0.05),糖尿病组糖尿病病史平均为(8.14±2.11)a,糖尿病组的年龄和角膜感染程度评分与非糖尿病组相比,差异有统计学意义(P0.05)。在糖尿病组中,镰刀菌属10例(16.7%),曲霉菌属40例(66.7%),念珠菌属10例(16.7%);在非糖尿病组中,镰刀菌属25例(41.7%),曲霉菌属30例(50.0%),念珠菌属5例(8.3%),两两比较差异都有统计学意义(P0.05)。糖尿病组与非糖尿病组的治疗总有效率分别为86.7%和98.3%,糖尿病组的治疗总有效率明显差于非糖尿病组(P0.05)。多分变量Logistic回归显示浸润病灶、前房积脓、曲霉菌为影响糖尿病真菌性角膜炎预后的主要危险因素(P0.05)。结论糖尿病真菌性角膜炎患者相对于非糖尿病患者而言主要表现为发病年龄偏大、角膜感染较重、预后差的特点,曲霉属为其主要病原菌。浸润病灶、前房积脓和曲霉菌为影响糖尿病真菌性角膜炎预后的主要危险因素。     

球形孢子丝菌致婴儿固定型孢子丝菌病1例及相关实验研究

报道1例由球形孢子丝菌所致的婴儿固定型孢子丝菌病。患儿女,3个月,因左眼下内侧皮损2个月就诊,皮损脓液标本进行真菌培养,对培养获得菌株进行形态学、生理学和分子生物学鉴定,并进行药物敏感性检测。真菌培养阳性,镜下可见典型的套袖样菌丝。钙调蛋白基因序列分析鉴定为球形孢子丝菌。药敏试验显示特比萘芬和伊曲康唑对该菌株的菌丝相最低抑菌浓度（minimal inhibitorycon centration,MIC）分别为0．5μg／mL和0．5μg／mL;对该菌株的酵母相的MIC值分别为0．25μg／mL和0．5μg／mL。给予患者口服特比萘芬32．5mg／d治疗10周后皮损消退呈瘢痕化修复。依据临床及实验室检查确诊该病例为球形孢子丝菌所致固定型孢子丝菌病,特比萘芬治疗本病例显示较好疗效。     

阿萨希毛孢子菌生物膜构建及水杨酸干预策略研究

目的在医院内常用生物材料聚氯乙烯（PVC）表面构建阿萨希毛孢子菌的生物膜,评估该生物膜对几种临床抗真菌药物的耐药性,并观察水杨酸是否对阿萨希毛孢子菌生物膜的形成有干预作用。方法菌株鉴定采用API20CAUX并经PCR鉴定复核;使用PVC于RPM11640-MOPS中培养进行阿萨希毛孢子菌生物膜构建;MIC测定采用法国生物梅里埃公司ATB Fungus-3真菌药敏试剂条以及微量液体稀释法,并观察水杨酸对生物膜构建的影响。结果阿萨希毛孢子菌可以通过几个不连续阶段在聚氯乙烯表面形成生物膜,且已使用PVC块上附着的生物膜细胞比未使用PVC块上黏附的生物膜细胞明显密集;固着相即生物膜细胞的MIC比浮游相成倍提高;24h两性霉素B的MIC〉512μ/ml,且经两性霉素B的药物刺激后,阿萨希毛孢子明显可见芽管延长,菌丝交织;水杨酸作用后阿萨希毛孢子菌的菌丝明显变短,孢子短小。结论介入性器械可以作为阿萨希毛孢子菌生物膜构建的黏附基质,使微生物群体黏附于细胞外多聚材料表面而造成持续播散感染,因此生物膜干预对阿萨希毛孢子菌深部感染的治疗有很重要的意义。     

我国首次发现暗孢节菱孢所致皮肤真菌病——一株新的条件致病性真菌

本文报告暗孢节菱孢(又名球形阜孢霉)所致皮肤真菌病。此菌是我国首次发现的条件致病真菌。患者头部发生多处皮下结节及萎缩性秃发。皮损活检可见毛囊和皮脂腺严重破坏。肉芽肿内有褐色孢子和分隔菌丝,尤以皮下脂肪浸润明显。多次从皮损外皮屑内检出圆形的厚壁孢子。在沙氏琼脂培养基上,37℃培养生长良好。菌落初呈淡黄色,渐变为橙色。小培养镜检时(放大400倍),可见菌丝分枝有隔(1—2μm)。单细胞性小分生孢子呈球形,晶体形等,光滑发亮呈褐色。有的孢子中央有一黑色纵条带。扫描电镜下发现球形或卵形分生孢子,将暗孢节菱孢制成的菌液接种于实验动物皮肤,2周后出现斑块、小结节、小脓肿和脱毛等症状,与患者临床症状相同。对照组动物正常。动物皮损活检所见病理损害与患者皮损病理损害相同,证实了此菌的致病性。     

糖尿病真菌性角膜炎患者临床特征及病原学分析CSCD

目的调查与探讨糖尿病真菌性角膜炎患者临床特征及病原学状况,发现影响糖尿病真菌性角膜炎患者预后的主要危险因素。方法采用回顾性研究方法,选择2013年2月~2016年5月在我院眼科确诊的,具有完整病例资料和随访资料的真菌性角膜炎患者120例作为研究对象,包括合并糖尿病的真菌性角膜炎60例(糖尿病组)和无糖尿病的真菌性角膜炎60例(非糖尿病组),调查所有患者的人口学特征、临床症状、病原学检查结果,同时记录患者的预后情况并进行危险因素分析。结果两组患者的性别、体重指数、病程等对比,差异无统计学意义(P>0.05),糖尿病组糖尿病病史平均为(8.14±2.11)a,糖尿病组的年龄和角膜感染程度评分与非糖尿病组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。在糖尿病组中,镰刀菌属10例(16.7%),曲霉菌属40例(66.7%),念珠菌属10例(16.7%);在非糖尿病组中,镰刀菌属25例(41.7%),曲霉菌属30例(50.0%),念珠菌属5例(8.3%),两两比较差异都有统计学意义(P<0.05)。糖尿病组与非糖尿病组的治疗总有效率分别为86.7%和98.3%,糖尿病组的治疗总有效率明显差于非糖尿病组(P<0.05)。多分变量Logistic回归显示浸润病灶、前房积脓、曲霉菌为影响糖尿病真菌性角膜炎预后的主要危险因素(P<0.05)。结论糖尿病真菌性角膜炎患者相对于非糖尿病患者而言主要表现为发病年龄偏大、角膜感染较重、预后差的特点,曲霉属为其主要病原菌。浸润病灶、前房积脓和曲霉菌为影响糖尿病真菌性角膜炎预后的主要危险因素。     

实时荧光PCR检测巴西孢子丝菌的实验方法的建立

目的建立一种快速、特异、灵敏的荧光PCR方法检测巴西孢子丝菌。方法比对NCBI数据库中所有巴西孢子丝菌内转录间隔区(internal transcribed spacer, ITS)序列,在保守区域设计并合成特异性引物和探针,建立并优化荧光PCR检测方法。对优化后的方法使用标准浓度核酸进行扩增效率、灵敏度及特异度评价。通过巴西孢子丝菌小鼠感染模型,与组织培养比较,对本研究中的方法进行评价。结果建立的实时荧光PCR方法对巴西孢子丝菌的检测限为100fg。该方法对申克孢子丝菌、球形孢子丝菌、其他常见致病真菌28种、常见细菌3种以及人类基因组和小鼠基因组扩增结果均为阴性,特异度为100%。对巴西孢子丝菌感染小鼠脑、肝、肺、脾、肾及淋巴结检测与培养结果相一致。结论本研究建立的荧光PCR方法可快速、灵敏、特异地鉴定巴西孢子丝菌,并能够有效的对感染小鼠模型标本进行检测,有助于孢子丝菌病的早期特异性病原学诊断。     

暗孢节菱孢菌引起面部感染1例及相关研究

目的报道暗孢节菱孢菌(Arthrinium phaeospermum)引起的面部皮肤感染1例并进行相关真菌学研究。方法患者女,29岁,两颊对称性浸润性红斑数年。皮损直接镜检、真菌培养,经形态观察、分生鉴定菌种、并进行体外药敏试验及利用豚鼠致病性实验重现组织病理特征。结果直接镜检未见明显菌丝,体外培养后为单一菌落,经棉兰染色、小培养、扫描电镜、分子生物学均鉴定为暗孢节菱孢菌(Arthrinium phaeospermum),均可见典型特征。体外药敏试验提示,该菌对卡泊芬净、米卡芬净、泊沙康唑、雷夫康唑、伏立康唑、特比萘芬敏感,对伊曲康唑、氟康唑耐药。豚鼠致病性实验中,对照组和免疫抑制组豚鼠皮下注射处大体可见脓肿,体表涂抹处大体表现红斑、丘疹、脱屑,免疫抑制组症状持续较久。皮下注射处较体表涂抹处有明显的组织病理学改变,可见多核巨细胞包裹菌丝或孢子,伴组织细胞、中性粒细胞、淋巴细胞浸润。结论该患者为罕见的暗孢节菱孢菌(Arthrinium phaeospermum)引起的皮肤真菌感染。免疫功能对该菌感染所致疾病的临床过程可能有影响。     

8种致病真菌在5种材料上的存活时间研究

目的了解实验所用常见致病真菌能否在常用医用原材料上生存及生存时间。方法选择8种常见致病真菌,活化后将它们分别接种在5种常用的医用原材料上,接种后及以后的每24h将接种有真菌的医用材料放入巯基乙酸盐液体培养基中并观察能否生存,记录存活时间。结果红色毛癣菌和须癣毛癣菌在棉布、纸板、铁皮、玻璃表面存活25～28d,在地板胶表面存活14～15d;新生隐球菌在棉布、纸板、铁皮表面存活24～27d,在玻璃和地板胶表面存活14～18d;茄病镰刀菌在上述5种材料上存活22～27d;石膏样小孢子菌在棉布、纸板、铁皮和玻璃表面存活20～27d,在地板胶表面存活8d;申克孢子丝菌在棉布、纸板、玻璃和地板胶表面存活17～24d,在铁皮表面存活10d;白念珠菌在棉布、纸板、铁皮和地板胶表面存活15～20d,在玻璃表面存活4d;犬小孢子菌在棉布、纸板、铁皮、玻璃和地板胶上存活时间分别为10d、9d、3d、2d和1d。结论实验所用各种真菌在医用原材料上都能存活,其时间长短不仅与菌种有关,还与所存在的材料有关。真菌在吸水性强、表面粗糙的材料(棉布、纸板)上的平均存活时间长于在吸水性差、表面光滑的材料(玻璃、铁皮和地板胶)。