肠道非何杰金淋巴瘤与EB病毒感染的相关性研究

目的：研究肠道非何杰金淋巴瘤(NHL)与EB病毒(EBV)感染相关性。方法：利用EBV寡核探针(EBER)原位杂交法检测EB病毒。结果：16例肠道NHL好发部位于小肠下端和结肠,以单发瘤结节多见,常伴有溃疡形成。经免疫组化证实3例为T细胞淋巴瘤(18．75％),13例为B细胞淋巴瘤(81．25％)。：EBV—EBER原位杂交3例有阳性表达,均为T细胞淋巴瘤,阳性细胞占肿瘤细胞的25％～75％。B细胞淋巴瘤未见阳性表达。结论：肠道非何杰金淋巴瘤以B细胞淋巴瘤多发,并以惰性淋巴瘤为多见;而T细胞淋巴瘤多为侵袭性,且与EBV感染的相关性较高,与B细胞淋巴瘤无相关性。     

microRNA原位杂交技术影响因素的探讨

目的探讨miRNA原位杂交技术的多种影响因素,以完善miRNA原位杂交分析方法。方法选择不同组织来源、保存时间、切片厚度的常规病理组织切片进行U。探针的原位杂交分析;选择不同浓度的蛋白酶K对组织切片与MDA-MB-23l爬片细胞进行U。探针的原位杂交分析;实时定量RT-PCR方法和爬片细胞原位杂交对BT549、T47D细胞株进行miR_375的表达分析。结果不同组织来源、保存时间、切片厚度的石蜡标本均能显示细胞核内的u。表达;组织切片原位杂交实验中,乳腺组织切片20μg／ml的蛋白酶K作用组较其他组的原位杂交效果好;肝脏组织切片200μg／ml的蛋白酶K作用组的显色最好;爬片细胞原位杂交实验中,2μg／ml的蛋白酶K作用组的显色更深;U6与miR-375的原位杂交最适浓度分别为lng／ml和l00ng／ml;实时定量RT-PCR和爬片细胞原位杂交结果均显示,BT-549的miR-375表达明显低于T47D。结论miRNA原位杂交操作能在常规固定并长期保存的石蜡组织标本上操作;蛋白酶K与探针的浓度应当依据病理标本类型等多因素预实验摸索;细胞水平的实时定量RT-PCR和爬片细胞原位杂交分析结果的比对为确定miRNA探针的特异性提供了帮助。     

EB病毒诱发人B细胞淋巴瘤的分子病理特性

EB病毒 (EBV ,Epstein Barrvirus)与人类多种肿瘤有关 ,尤其是与鼻咽癌和淋巴瘤的关系密切。为此研究了EB病毒在huPBL SCID嵌合体小鼠体内诱发人B细胞淋巴瘤的分子特性及肿瘤发生机制。从健康成人外周血分离出淋巴细胞 ,将之移植到SCID小鼠腹腔内 ,实验感染EBV ,观察肿瘤的形成 ;采用单向免疫扩散法连续监测小鼠血清中人IgG的含量。分别用PCR方法检测肿瘤组织中是否存在人Alu序列 ,原位杂交检测肿瘤组织中EB病毒小RNA分子EBER 1;免疫组织化学方法检测人白细胞分化抗原 (CD4 5、CD2 0、CD4 5RO、CD3) ,病毒基因(LMP1、EBNA2、BZLF1)的表达 ,以及细胞瘤基因蛋白 (p5 3、C myc、Bcl 2、Bax)在诱发肿瘤中的表达情况。结果发现 ,实验中 34只感染EBV的huPBL SCID小鼠有 2 4只诱发出肿瘤 ,根据病理形态学特征、Alu PCR和免疫标志均证实诱发瘤是人源性B淋巴细胞肿瘤。原位分子杂交显示肿瘤细胞核内存在EBER 1,少数瘤细胞表达EB病毒BZLF1蛋白阳性 ,部分瘤细胞表达LMP1和EBNA2蛋白阳性。连续监测 12只huPBL SCID小鼠血清中人IgG含量 ,发现IgG水平随诱瘤时间延长和肿瘤生长有逐渐增高趋势。免疫组化显示诱发的 2 4例淋巴瘤组织p5 3、C myc、Bcl 2和Bax蛋白表达阳性率分别为 83.33%、10 0 %、95 .83%、91.6 7%。结果     

EBER原位杂交结合CK免疫组织化学双染在诊断鼻咽癌中的应用价值

目的探讨全自动免疫组织化学仪行EB病毒早期RNA(Epstein-Barr virus early RNA,EBER)与细胞角蛋白(cytokeratin,CK)双染在鼻咽癌诊断中的应用价值。方法收集我院2018年1月至2019年12月鼻咽活检组织60例,根据诊断结果进行分组,A组为鼻咽非角化型未分化性癌30例,B组为上皮性病变30例。在VENTANA全自动免疫组织化学仪平台上分别对这两组病变进行CK免疫组织化学染色、EBER原位杂交、EBER原位杂交结合CK免疫组织化学(EBERCK)双染标记,其中双染再分为是否复染苏木素,比较染色情况。结果免疫组织化学CK单染A、B组均可见阳性细胞;原位杂交EBER单染A组鼻咽癌细胞阳性,B组表达呈阴性;EBER-CK双染A组鼻咽癌细胞呈双阳性,B组病变细胞呈CK阳性、EBER呈阴性,未见双阳性表达;EBER-CK双染复染苏木素后的表达与未复染苏木素的表达相同,但对比差,不易观察。结论全自动免疫组织化学仪行EBER-CK双染有助于鼻咽癌组织学诊断,不复染苏木素效果更佳,值得推广。     

不同浓度蛋白酶K对杂交信号的影响

年来原位杂交技术的应用日益广泛,但出现的问题也不少。杂交信号的多少和强弱受到多重因素的影响,特别是蛋白酶Ｋ的作用。本实验比较观察了不同浓度蛋白酶Ｋ对肝癌组织切片杂交的影响,结果表明,用适量的蛋白酶Ｋ消化组织切片不仅能保存组织结构的完整性,并且能使杂交...     

不同脱钙条件下三种脱钙液脱钙效果的比较

目的探讨在常温和加温脱钙条件下,甲酸混合液、Alexander硝酸甲醛液及Jenking脱钙液的脱钙效果和染色结果。方法取小鼠膝关节骨组织分为6份,根据脱钙条件和脱钙液的不同,分为常温脱钙组合加温脱钙组两组。常温脱钙组:三种脱钙液常温(25℃)脱钙48h并石蜡切片HE染色;加温脱钙组:三种脱钙液70℃温箱脱钙6h并石蜡切片HE染色,并分别观察骨组织在不同脱钙液及脱钙条件下的脱钙效果及染色结果。结果常温(25℃)脱钙组标本中,经甲酸混合液脱钙的骨组织较难切片,染色较差;经Alexander硝酸甲醛液脱钙的骨组织较易切片,染色较差;经Jenking脱钙液脱钙的骨组织较易切片,染色较好。加温脱钙组标本中,经甲酸混合液脱钙的骨组织较易切片,染色较好;经Alexander硝酸甲醛液脱钙的骨组织较易切片,染色一般;经Jenking脱钙液脱钙的骨组织较易切片,染色较好。结论不同的脱钙液种类及脱钙条件对脱钙及染色结果有较大的影响,标本经三种脱钙液加温脱钙后,使脱钙时间大大缩短,减少了酸对组织的破坏,在脱钙效果及染色结果方面,均要优于常温脱钙,而Jenking脱钙液无论在常温和加温条件下的脱钙和染色效果均要优于其它两种脱钙液,有一定的应用价值。     

EB病毒变异型EBER2对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响

EB病毒(EBV)编码小RNA(EBERs,包括EBER1和EBER2)的致癌作用已在多种细胞系中得到证实,我们前期研究发现在EBER2基因发生6处突变的EB-8m变异型可能与鼻咽癌(NPC)的发生相关。本研究探讨变异型EBER2对NPC细胞增殖和凋亡的影响,以进一步明确EBER2基因变异在NPC发生中的作用。分别以B95-8原型和EB-8m变异型EBER2稳定转染EBV阴性NPC细胞系,MTT法和平板克隆检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡。与转染原型EBER2细胞及转染载体的对照细胞比较,转染变异型EBER2细胞的MTT吸光度值和平板克隆形成率增高,细胞凋亡率降低(P均小于0.05),原型和对照之间细胞增殖无差异,但原型的细胞凋亡率亦低于对照(P0.05)。上述结果表明,EB-8m变异型EBER2可通过提高NPC细胞增殖及抗凋亡能力而增强其致癌作用。     

EB病毒诱导胸腺恶性T细胞淋巴瘤的研究

为研究EB病毒在恶性T细胞淋巴瘤发生中的作用,将EB病毒感染的人胚胸腺细胞移植于Scid鼠皮下,于移植后第3日起在移植处对侧皮下注射TPA50ng／只,每周1次。于移植后第4周起,移植处皮下有结节状隆起形成,并逐渐增大。于6－15周内行病理学检查和免疫组织化学染色,证实为T细胞淋巴瘤8例。其中实验组胸腺细胞＋EBV的成瘤率为25％（1／4）,胸腺细胞＋EBV＋TPA组的成瘤率为53.8%（7／13）,对照组胸腺细胞＋TPA的成瘤率为0（0／5）。PCR和 闰杂交在诱导肿瘤可可检测到EB病毒的基因EBERs、LMP1和BARF1,并有病毒基因LMP1蛋白编码产物的表达。EB病毒可感染人胚胸腺细胞,并使其发生恶性转化,EB病毒可能在恶性T细胞淋巴瘤的发生中起病因作用。     

石蜡组织荧光原位杂交关键实验步骤探讨

目的：探讨石蜡组织荧光原位杂交（FISH）技术中关键实验步骤的最佳条件,以期提高石蜡切片FISH阳性细胞检出率和实验成功率。方法：在前期标本处理方面,进行双蒸水、0．5×SSC溶液、0．1％硫代亚硫酸钠溶液煮沸对比;在蛋白酶消化方面,设置胃蛋白酶和蛋白酶K两种消化方法,并在37℃条件下设置时间的梯度变化,比较其消化效果;对石蜡切片的变性设置温度梯度,比较杂交检出率;比较DAPI复染时不同浓度对单色、双色FISH结果的影响;应用抗淬灭剂后不同保存时间的对比。结果：采用0．5×SSC溶液煮沸15min,用200μg／mL蛋白酶K在37℃、6～10min条件下消化,可以取得较好的FISH效果;变性温度为81℃时检出率更高,DAPI复染浓度为1000ng／mL时针对单色FISH较合适,而浓度为500、150ng／mL时针对双色／多色FISH有较好的效果。结论：FISH条件经过对比得到优化,对石蜡组织FISH实验具有一定的指导意义。     

周末组织处理程序的改进

目的探讨周末切取组织处理程序的改进方法。方法收集40例乳腺癌根治术标本,每例连续取3块组织,随机分为日常程序处理组(常规组)、延时程序处理组(延时组)和改进程序处理组(改进组),比较3组切片裂痕或脱片的发生率、HE染色质量、免疫组织化学检测质量、荧光原位杂交实验结果。结果切片裂痕或脱片的发生率在延时组明显高于常规组,改良组与常规组基本相同;改良组与常规组切片核质对比清晰,红蓝适度,延时组稍不清晰,组织结构稍模糊;免疫组织化学检测阳性率在3组基本相同,但常规组和改良组切片染色更强,背景清晰,而延时组切片染色强度较弱、背景欠清晰;FISH结果阳性率在常规组和改良组相同,而延时组显著低于常规组和改良组。结论改进的周末切取组织处理程序固定、透明、浸蜡3个环节与标准程序相同,而将多余的时间分配给脱水环节,组织脱水彻底,有利于后期制片,特别是有利于后期的HE染色、免疫组织化学检测或FISH检测,值得推荐。     

非小细胞肺癌患者中EGFR突变、ALK和ROS1融合基因表达变化及其临床病理学意义

目的探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者中表皮生长因子受体(epidermic growth factor receptor,EGFR)突变、间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase,ALK)和ROS1融合基因的表达情况及其与临床病理特征的关系。方法应用ARMS法检测379例非小细胞肺癌患者中EGFR突变、ALK和ROS1融合基因的表达情况,并分析其与患者临床病理特征的关系。结果 379例非小细胞肺癌患者组织中,EGFR突变率为36.15%(137/379),19del和L858R突变为其主要突变类型,同时检出L858R和T790双突变4例,L858R和19del双突变2例;EGFR突变人群主要是女性、腺癌、非吸烟患者(P<0.05)。ALK融合基因阳性率为3.43%(13/379),其中ALK-M1融合基因型4例,ALK-M2融合基因型3例,ALK-M3融合基因型3例,ALK-M4融合基因型1例,ALK-M6融合基因型2例。ROS1融合基因阳性率为3.17%(12/379),主要为ROS1-M8融合基因型(8例),存在1例ROS1-M3和ROS1-M8融合基因型双融合。不同性别、年龄、组织学和吸烟状况的NSCLC患者ALK和ROS1基因突变率无统计学差异。结论 EGFR基因在NSCLC患者中存在较高的突变率,而ALK、ROS1融合基因在NSCLC患者中突变率较低,但代表了非小细胞肺癌的特点分子亚型,为指导临床靶向治疗提供依据。     

甲状腺组织冷冻切片的优化

目的优化冷冻切片的关键条件,以期提高甲状腺组织冷冻制片效率、切片质量与染色效果。方法收集术中新鲜送检的甲状腺标本,通过对比实验,比较冷冻切片制作环节中取材厚度、速冻方法与染色方法等因素对制片质量的影响。结果甲状腺组织冷冻切片取材厚度以0.2~0.3cm为佳;预先制作“冰垫”的托头并于上方加盖冷冻冰锤,有利于提高速冻效率、提高组织结构清晰度、减少组织块崩裂、减少冰晶、减少裂隙;机染有利于提高染色优良率并减少染色时间。结论选择适当的取材厚度、优化速冻方法、采用优质的染色方法,可显著提高甲状腺组织冷冻切片的制片质量,为精准的术中病理诊断奠定基础。     

肺隐球菌病标本在六胺银染色中的最佳温育时间

目的探索肺隐球菌在六胺银染色中的最适当温育时间,以期获得最佳染色效果,提高病理标本肺隐球菌病的诊断率。方法收集厦门大学附属第一医院病理科2017年1月—2017年12月确诊的30例肺隐球菌感染病例,每例病例选取最具代表意义的一个蜡块连续切片3张,不同蜡块为区组因素,将每个蜡块切取的3张切片简单随机化分为3组,每组1张,通过区组随机化将90张切片随机分为A、B、C 3组,A组切片在六胺银染液步骤中采用水温箱60℃温育20～25min,B组切片在六胺银染液中温育30～35min,C组切片在六胺银染液中温育40～50min。以10分制对90张六胺银染色片进行评分,比较3组切片得分情况、显微镜下的染色效果与诊断准确率。结果 B组切片镜下显示:隐球菌染成空心黑色,细胞核呈蓝色,周围肺纤维组织呈淡棕色至棕色,隐球菌与周围肺纤维组织染色对比清晰,染色效果显著高于A组与C组。结论在六胺银染色中,采用六胺银染液在水温箱60℃温育30～35min,病理切片六胺银染色评分结果得分更高、六胺银染色效果更好、肺隐球菌病的诊断准确率更高。     

滨海城市土地利用格局演变及对生态系统服务价值的影响

土地利用变化改变土地原有的生态系统服务价值(ESV)和功能,关系地区可持续发展。选择沿海城市厦门市为研究区,利用1989、2000、2010年3期土地利用数据和相关文献数据,采用土地利用动态度、转移矩阵方法,ESV等指标计算分析了厦门市土地利用的变化及其对ESV的影响。研究结果表明:1989—2010年厦门市土地利用综合动态度为同时期全国水平的5倍多。该时期厦门市和全国建设用地动态度均高于其他地类。其中2000—2010年间,厦门市土地利用综合动态度是1989—2010年间近5倍(458.94%);在厦门市与各沿海地区对比中发现,1989—2010年整个沿海地区建设用地的动态度都高于其他各个单一地类。各沿海地区建设用地动态度大小排序为浙江沿海厦门福建沿海江苏沿海,厦门市排序靠前。空间特征上,厦门市建设用地的增加主要是由滨海带滩涂的填埋和耕地的占用,处于北部的林地基本稳定。研究期1989—2010年间,厦门市ESV总量一直处于下降趋势,其中2000—2010年ESV总减少量(1.2亿元)是1989—2000年总减少量(1000万元)的十余倍(1382.57%)。研究区由于水域和耕地的大面积减少,导致水源涵养、废物处理等生态系统服务功能趋于弱化,最终致使各类ESV成分在1989—2010年间整体上均处于下降趋势。下降幅度最大的仍然是水文调节和废物处理,食物和原材料生产变化幅度最小。1989—2000阶段中保持土壤ESV变化的贡献最大,2000—2010阶段中水文调节ESV变化的贡献最大。2010年厦门市单位面积ESV在东部沿海地区中处于较低水平。反观厦门市2000—2010年远高于全国水平的土地利用动态度,表明厦门市在未来的城市建设中应当划出生态红线,加强对具有关键生态功能的生态用地保护,特别是水域和北部的林地。     

东方肉座菌EU7-22纤维素内切酶Ⅰ的异源表达

[目的]实现东方肉座菌纤维素内切酶EGⅠ在毕赤酵母中的表达,获得重组EGⅠ。[方法]通过RT-PCR获得EGⅠ开放阅读框。将EGⅠ成熟肽和PHO1信号肽的DNA片段插入p PIC3. 5K后,重组表达载体电转化毕赤酵母。通过甲醇诱导表达和镍柱纯化获得EGⅠ。以羟甲基纤维素钠检测活性,以肽N-糖苷酶F分析N-糖基化,以SDSPAGE分析表达情况和糖基化修饰。[结果]获得EGⅠ分泌表达菌株,诱导96 h后上清液活性为0. 513±0. 002 U/m L,纯化后的EGⅠ活性为0. 558±0. 012 U/mg。SDS-PAGE表明EGⅠ分子量在100～180 k Da,远高于预测值47. 3k Da,经肽N-糖苷酶F处理后,降至63～75 k Da。[结论]实现了EGⅠ的分泌表达,获得活性为0. 558±0. 012 U/mg的糖基化重组EGⅠ。     

沉默Wnt4基因抑制大鼠肾间质纤维化

目的探讨沉默Wnt4基因对肾间质纤维化的影响,为慢性肾病的治疗提供理论依据。方法 128只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阴性对照组和Wnt4基因沉默组,每组32只。构建Wnt4 siRNA慢病毒载体体内转染沉默组的大鼠,于转染后第3、7、10、14天分为四个亚组,每组8只大鼠。通过H&E染色病理检查、RT-PCR技术检测肾间质改变及β-连环蛋白、Wnt4、α-SMA表达情况。结果 H&E染色病理检查结果表明:假手术组四个时间点未见肾间质改变;UUO组、阴性沉默组及沉默组造模后3 d出现肾间质水肿、少量肾间质纤维化,10、14 d肾间质弥漫性巨噬细胞、淋巴细胞浸润,呈加重趋势;阴性沉默组基因与UUO组相同;沉默组四个时间点均出现不同程度肾间质纤维化,14 d肾间质纤维化程度低于阴性沉默组及UUO组(P<0.05);Wnt4基因沉默后UUO组mRNA表达量的相关性分析显示,Wnt4与β-catenin mRNA表达量具有显著相关性(r=0.886,P<0.001)。Wnt4与α-SMA mRNA表达量具有显著相关性(r=0.930,P<0.001)。Wnt4基因沉默后沉默组mRNA表达量的相关性分析显示,Wnt4与β-catenin mRNA表达量无显著相关性(r=0.204,P=0.263)。Wnt4与α-SMA mRNA表达量具有显著相关性(r=0.753,P<0.001)。结论沉默Wnt4基因在肾间质纤维化大鼠中可明显抑制肾间质纤维化,可能对其有治疗作用。     

沿海快速城市化地区能值生态足迹变化分析

当前我国经济的快速发展和生态环境之间的矛盾日益显著,不利于城市可持续发展。生态足迹目前已成为普遍接受的可持续发展指标,选定生态足迹改进方法——能值生态足迹模型,以城市化地区厦门市为研究区进行计算分析,以期发现快速城市化过程中可能面对的问题。首次计算分析了厦门市1980年至2010年的能值生态足迹动态变化,并对其可持续发展进行了评价。结果表明,30年间厦门市人均生态足迹需求从1980年的8.6 ghm2持续增长至2010年的52.8 ghm2,而供给方面的人均生态承载力却从1980年的181.2 ghm2持续下降为47.5 ghm2,2009、2010年该市由生态盈余转为生态赤字。同时,从生态足迹组分及其比例来看,30年间化石燃料用地和建设用地的生态足迹增长迅速,二者对厦门市人均能值生态足迹变化贡献最大,并且成为2000年后总体足迹中所占比例最大的组分,各自占比超过20%。结果分析显示,厦门市开始面临逐渐加重的生态环境压力,需要开始重视其可持续发展。因此调整厦门市的产业结构和控制城市化发展非常必要。一方面,应该降低第二产业的比例,降低对化石能源的使用,同时促进第三产业的发展和第一产业的现代化,以此为城市提供更多的资源供给并降低资源需求,特别是化石能源的需求。     

南方滨海地区盐雾沉降的时空分布——以福建古雷半岛为例

研究滨海地区盐雾沉降的时空分布及其影响因素,以期为滨海绿化植物的选择与配置提供依据.以福建省古雷半岛为研究站点,设置盐雾沉降缸研究离海岸线距离和防护林对盐雾沉降量的影响;同时模拟不同生活型植物的高度,研究不同高度盐雾沉降量的差异.结果表明:春夏秋冬四季,盐雾沉降量均表现出随离海距离的增加逐渐降低的趋势,冬季盐雾沉降量在离海岸线500 m内快速下降,在500 m以外则下降速度趋缓;防护林的存在能减少盐雾沉降量,这种效果在盐雾危害严重的冬季更明显,可使盐雾沉降量降低15.4%;在无防护林遮挡条件下,盐雾沉降量在不同高度上差异不显著;主成分分析(PCA)和冗余分析(RDA)显示,离海距离、平均风速和东北风向频率是3个影响盐雾沉降量的主要环境因子.南方沿海地区盐雾沉降量存在明显的时空变化,离海500 m范围为盐雾危害重点防范区域,防护林或类似遮挡物的存在,可以显著减少盐雾沉降量.     

福建厦门地区棕榈科植物资源及其园林应用

调查了厦门地区棕榈科植物资源状况及其绿化应用,并结合多年来对厦门市园林植物园棕榈植物保育中心内棕榈科植物的物候期观察,选出适合厦门地区推广应用的棕榈科植物104种,同时对厦门地区棕榈科植物应用的种类、数量、分布以及应用频度等进行统计分析。     

基于能值分析的厦门城市代谢可持续性评估

生态城市建设是中国城市转型发展的关键节点,对中国生态文明和新型城镇化发展具有推动作用。研究以中国典型的生态城市厦门市为例,基于城市代谢框架结合能值分析法,对厦门市代谢系统进行各项能值流的核算,构建2010-2017年厦门市能值指标评估体系,选用可持续发展指数、可持续发展能值指标、城市健康水平能值指数3项指标综合评价其生态可持续性,选取部分能值指标与珠海市、深圳市进行对比分析,以期为中国生态城市的可持续发展提供科学参考。结果表明：（1）2010-2017年,厦门市总能值呈上升趋势,2017年的总能值为2.51×10²⁴ sej,是2010年总能值的1.65倍,货币流能值显著增加,废弃物流能值下降。能值自给率由98.30%逐渐递增至99.20%,能值产出率由8.30%逐渐递增至15.20%,环境承载率小于3,属于环境低负荷状态。（2）厦门市可持续发展指标处于1-10之间,表明其生态经济系统具有活力和发展潜力,可持续发展能值指标由2010年的3.67增加至2017年的7.76,表明厦门市的可持续发展性能愈来愈好,城市健康水平能值指数由2010年的6.21上升至2017年的25.80,表明厦门市生态系统处于健康可持续发展的状态。（3）厦门市与珠海市、深圳市的能值指标对比分析表明,厦门市与珠海市均处于富有经济活力与生态可持续发展潜力阶段,且厦门市代谢系统的可持续发展水平整体优于珠海市与深圳市。（4）总体来看,厦门城市代谢系统处于可持续发展阶段,生态城市的建设有利于厦门市实现生态经济的可持续发展,研究对同类型生态城市的建设与可持续发展具有理论参考价值。