大肠杆菌AS1.357 L-天门冬酰胺酶的选择性化学修饰

用九种化学修饰剂研究了大肠杆菌AS1.357 L-天门冬酰胺酶分子中的五种不同氨基酸侧链基团与催化活性的关系。结果说明,渡酶活力与硫氧墓完全无关;与色氨酸、精氨酸和组氨酸亦无直接联系;而酪氨酸残基和羧基的修饰引起酶活力急剧下降。其中酪氢酸残基巳被证实是该酶活力的必需基团,处于该酶分子的活性部位。     

大肠杆菌L-天门冬酰胺酶的研究II．大肠杆菌AS 1.357 L-天门冬酰胺酶的提纯和性质

用硫酸铵盐折,酒精分级沉淀,酸处理和DEAE纤维素层析等方法,从大肠杆菌AS 1．357的无细胞提取液中提纯L天门冬酰胺酶近90倍,比活力达200单位／毫克蛋白质以上,总收率约18％。用葡聚糖凝赕G-100凝胶过滤法测定分子量约为144500,用等电点聚焦电泳测定等电点为pH4.6,最适反应pH和温度分别为7．0和55℃左右,酶的紫外吸收光谱最大吸收值在水溶液中为278毫微米,在0．1NNaOH溶液中为290毫微米,提纯各段均不含无抗癌活力的EC一1组份。酶的冷冻干燥制品在低温下保存一年未见任何酶活力损失。     

R质粒对大肠杆菌L-天门冬酰胺酶活力的影响

对含有不同R质粒的6株大肠杆菌J53和不含质粒的大肠杆菌J53所产生的L-天门冬酰教酶的活力进行了比较,前者的L-天门冬酰胺酶活力比后者的降低了约1/2—3/4。消除大肠杆菌J53细胞中的R质粒后,L-天门冬酰胺酶活力明显增加并与不含质粒的大肠杆菌J53的相近。结果表明,在大肠杆菌内存在的R质粒对寄主的L-天门冬酰胺酶活力具有明显的抑制作用。     

用双水相系统从大肠杆菌细胞内释放L-天门冬酰胺酶

聚乙二醇－磷酸盐双水相系统可以释放大肠杆菌ＡＴＣＣ１１３０３细胞内的Ｌ－天门冬酰胺酶。研究了聚乙二醇、磷酸氢二钾的浓度对酶和蛋白质的释放及分配的影响。在双水相系统中加入适量的盐酸胍和ＴｒｉｔｏｎＸ１００可以提高酶的释放量。实验表明,用新的下相代替富含酶的下相,上相能够重复使用几次。这种方法将酶的释放和萃取结合为一个步骤,使酶的纯化更加简单和有效     

大肠杆菌青霉素酰胺酶高产菌株的选育

应用青霉素酰胺酶裂解青霉素制备半合成青霉素原料6-氨基青霉烷酸(简称6-APA),具有安全、节省费用等优点。为了提高青霉素酰胺酶活力,我们开展了大肠杆菌青霉素酰胺酶的菌种选育工作。     

用盐酸胍和Triton X-100从大肠杆菌细胞内释放L-天门冬酰胺酶

研究了用盐酸胍和TritonX 10 0处理ATCCEscherichiacoli 1130 3细胞 ,使细胞内的L-天门冬酰胺酶 (EC 3.5 .1.1)释放到细胞外的方法 ,发现盐酸胍和TritonX 10 0结合使用的效果好。考察了盐酸胍浓度、TritonX 10 0浓度、大肠杆菌细胞浓度、处理时间、pH值等因素对L -天门冬酰胺酶释放的影响。结果表明 ,0 .75～ 1mol/L盐酸胍、2 %TritonX 10 0、细胞浓度 3.2× 10 8/ml、pH 7.0、15℃处理 16～ 2 0h后 ,酶的释放率达到 6 0 %左右。这种方法操作简便 ,酶的释放率较高 ,但对酶无明显的选择性。     

枯草杆菌(Bacillus subtilis)转化的研究I．受体菌株的筛选

混合两个枯草杆菌抗链霉素突变体的核酸,对149株枯草杆菌进行转化试验,筛选到Ki-2为一可转化的受体菌株。用紫外线诱变,从Ki-2获得的9个营养缺陷型其中包括尿嘧啶、异亮氨酸、褓氨酸、苏氨酸、撷氨酸加异亮氢酸、苏氧酸加蛋氦酸、辙氨酸加亮氨酸加异亮氨酸、苏氨酸加异亮氨酸加檄氨酸、苏氨酸加亮氧酰加异亮氨酸加颛氯酸的缺陷型各一个,都可进行转化。以单独核酸分刖进行转化试验表明,四个抗链霉素突变体中,有一个不能作耠体。观察了有转化活性的DNA与无转化活性的DNA按不同比例混合后对转化作用的影响。讨论了用混合不同耠体核酸从大量菌株中簖选受体菌株的方法。     

琥珀酸弧菌L-天门冬酰胺酶基因的初级克隆和表达

本文以表达型噬菌体λgtll为载体,以及¹²⁵I标记的放射免疫抗体为探针,从EcDR I酶切的琥珀酸弧菌(Vyibrto succinogenes)染色体DNA片段中克隆得到携带天门冬酰胺酶基因的目的片段,在宿主菌E．Coil Y 1090 中得到表达。经酶解和凝胶电泳分析表明该插入DNA片段的分子量为5．8kb．重组DNA感染另一宿主菌E．ColiYl089后所产生的酶蛋白具有L-天门冬酰胺酶活力。用重组DNA(λgt11-AS8)为探针进行southern DNA杂交,琥珀酸弧菌染色体DNA的Ec0R I酶切片段中,出现一条位置在5．8kb处的杂交带,证明我们克隆到的携带L-天门冬酰胺酶基因的目的片段来自琥珀酸弧菌。     

用同位素竞争技术研究与L-天门冬酰胺酶相关的代谢产物

同位素竞争(isotopic competition)技术是揭示各种代谢产物相关性的有效而便捷的手段。Roberts等曾报告借助这一方法考查野生型大肠杆菌氨基酸生物合成的途径。该研究技术基于以下原理:在以~14C-葡萄糖为唯一碳源的培养基上培养微生物,放射性~(14)C将分布于微生物体的各种氨基酸中。倘若同时把某已     

豆豉纤溶酶高产菌株的筛选研究

以中国豆豉为材料,取6个不同来源的样品经富集培养后,用自制血纤维蛋白平板进行初筛;利用LB纤维蛋白平板复筛与血琼脂平板进行体外溶血试验相结合的方法,筛选出安全性良好并有一定纤溶活性的菌株。再对复筛得到的菌株进行摇瓶培养,用纤维蛋白平板法测定并比较不同菌株发酵液的纤溶活性。结果成功地筛选出5株纤溶活性高和通过溶血性实验的芽孢杆菌菌株,其中菌株DC-C4粗酶液的酶活稍高,达到280IU/mL。采用16S-23S rDNA序列分析法及传统的生理生化特征鉴定法对该菌株进行鉴定,确定菌株DC-C4为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)。本实验为开发新型溶栓药物及保健食品提供了实验参考依据。     

漆酶高产菌株的筛选及产酶条件研究

木质素是一种高度复杂的不定形的芳香族化合物 ,是仅次于纤维素的第二大再生有机资源 ,木质素的微生物降解及其有关酶类在制浆造纸工业和环境保护方面具有较大潜力。木质素的生物降解酶主要有木素过氧化物酶、漆酶、锰过氧化物酶和多酚氧化酶等。国外已有该方面的研究报道[5～ 7,9,10 ] ,但多集中在黄孢原毛平革菌 (Ｐｈａｎｅｒｏｃｈａｅｔｅｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ)木素过氧化物酶和锰过氧化物酶方面的研究 ;Ｓｌｏｍｃｚｙｎ ｓｋｉ等[8] 研究了Ｂｏｔｒｙｔｉｓｃｉｎｅｒｅａ的漆酶特性 ;国内有关研究报道较少[3 ,4 ] ,筛选漆酶高…     

蚕氨基酸代谢之研究 Ⅱ.比较家蚕和野蚕谷氨酰胺酶及天门冬酰胺酶,蓖麻蚕丝腺体中天门冬酰胺酶之提取及其性质之研究

(1)比較家蚕(华九-云瀚)和野蚕(萞麻蚕、柞蚕和樗蚕)之谷氨酰胺酶及天門冬酰胺酶之活力,发現在萞麻蚕絲腺体后部之細胞顆粒部分中,存在有活力甚強之天門冬酰胺酶。(2)自萞麻蚕絲腺体后部提取之天門冬酰胺酶制品中,不含有谷丙轉氨酶、谷天轉氨酶及谷氨酰胺酶。(3)L-天門冬酰胺之酶促水解作用在1小时过程中,活力和作用时間基本土表現直线关系。(4)萞麻蚕絲腺体后部之天門冬酰胺酶和哺乳类动物、植物及微生物之pH影响相同;在pH5以下不稳定,最适pH为8。(5)天門冬酰胺酶对热不稳定,先以不同温度和酶溶液作用10分钟,60℃时,活力丧失80%左右。(6)对氯汞苯甲酸(10~(-4)M)抑制天門冬酰胺酶20%,溴化乙酰胺(10~(-3)M)及DL-环絲氨酸(10~(-3)M)抑制15%。     

E.aero高产1.3-丙二醇菌株发酵条件的研究(Ⅱ)

建立了1.3-丙二醇高产菌株(Enterobacter aerogenes简写为E.aero-N-56)1.3-PD厌氧发酵最适pH值、温度、时间、接种量分别为7.0、30℃、48h、9％;在最适发酵条件下,30L发酵罐中E.aero-N-56菌株1.3-PD产量为47.36g/L,生产率为23.68g/L·d。     

果胶酶高产菌株的筛选及产酶条件的研究

从富含果胶质的果园的土壤中,通过对初筛的定性研究,对几种筛选培养基的比对选择和对复筛时Dp/Dc值的测定,确定出一系列有效可行的筛选方法,从而获得一株能较强分解果胶质能力的菌株,然后对该菌株进行了初步的形态观察和鉴定.通过对发酵周期,温度,pH值几种因素对产酶影响的研究,经过对粗酶液的提取和对酶活的测定,确定了该菌株的基本发酵条件.在此条件下产酶最高可达到13968U/mL,从而最终确定了该菌株为一高产菌株.     

香菇漆酶高产菌株筛选及漆酶基因的表达研究

漆酶是一种含铜的多酚氧化酶,其作用底物范围广,在食品、能源和环保等领域具有重要的应用价值,因此筛选高产漆酶菌株对于其工业应用具有重要意义。本实验以78株香菇菌株为实验材料,利用愈创木酚平板法初筛,液体发酵复筛的方法筛选高产漆酶香菇菌株,并通过实时定量PCR分析香菇漆酶同工酶在不同菌株之间转录表达的差异性和特异性。结果表明,不同香菇菌株的生长速度、变色圈大小存在差异,以菌丝圈和变色圈大小及其比例为依据,从78株香菇菌株中筛选出19株潜在的漆酶高产菌株;液体发酵从这19株菌株中复筛出3株高产漆酶的菌株:香240、15和冕宁浅灰,其中香240在培养第3天酶活达到最高(3.583U/m L),香15和冕宁浅灰则在培养第7天酶活达到最高(分别为3.842U/m L和2.806U/m L);实时荧光定量PCR结果显示,10个漆酶同工酶基因在两株香菇菌株中的表达存在差异性和特异性,其中Lelac5和Lelac9只在菌株香240中检测到转录本;Lelac1–4在菌株15中表达量较高,而Lelac8、Lelac10和Lelac11在香240中的表达量较高。研究结果将为香菇漆酶的进一步研究提供基础。     

中性植酸酶高产菌株的筛选及产酶条件研究

以地衣芽孢杆菌为原始出发菌株,用紫外线反复诱变,最终获得一株中性植酸酶高产菌株B.licheniformis LL8,其酶活性约为原始出发菌株的2倍。该菌株具有稳定的遗传性能。通过单因素试验和正交试验对发酵条件进行了优化,当培养温度为55℃,pH为7.5,接种量为10%时,经30h培养后,中性植酸酶活力最高达到2268.4U/mL。     

利用利福平抗性突变(Rif~r)选育L-多巴高产菌株的研究

<正> 左旋多巴(Levodopa),即B—3.4一二羟基苯丙氨酸,是用于预防和治疗帕金森氏综合症(Parkinsonis)的有效药物,对精神病的治疗也有较好的效果。七十年代初,国外采用化学合成法生产L-Dopa,但工艺复什,产物D,L型不易分开。微生物不仅具有生长迅速、培养成本较低等特点,而且催化系统具专一性,转化率高且反应条件温和。所以利用微生物来生产L-Dopa     

Raoul Combes (1883–1964) et la S.I.G.M.A.

Sans résumé     

抗幼畜腹泻病原菌E. coli表面抗原(K99)单克隆抗体细胞株的建立与抗体特性分析

本文概述了抗幼畜腹泻病原菌细胞表面抗原K 99蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立与抗体特性的鉴定。经过近半年的体外培养,大多细胞株仍能持续分泌较高滴度的单克隆抗体。腹水中抗体的ELIS．~反应滴度可达2 x 10’。通过EL[SA、免疫荧光、斑点试验、免疫扩散和玻板凝集等多种免疫学方法证明了该抗体是抗K 99蛋白的单克隆抗体。该抗体的特异性与稳定性分析,为使单克隆抗K 99抗体成为幼畜细菌性腹泻病的大规模诊断与防冶的标准免疫学试剂提供了基础。