M－CAT盒在鸡AchR γ－亚基基因转录激活中的作用

原代培养鸡胚肌细胞瞬时转染结合氯霉素乙酰基转移酶水平测试表明：鸡ＡＣｈＲγ－亚基基因缺失近起始点一对Ｅ盒（ＣＡＮＮＴＧ）的－２０４／－５０片段与含Ｅ盒的－２０４／＋３６片段一样,均可独立激活ｔｋ启动子的转录活性,证明了该片段的增强子样作用,利用鸡胚肌肉核抽提物与－２０４／－５０片段进行胶阻滞分析,检出了明显的迁移位移条带的发生;迁移条带不仅可被未标记的－２０４／－５０片段消除,而且还可被含Ｍ－ＣＡＴ盒（ＣＡＴＴＣＣＴ）的２３ｂｐ寡核苷酸竞争阻断,说明胶阻滞分析中出现的迁移条带系由核内因子特异结合－２０４／－５０片段中的Ｍ－ＣＡＴ序列所致,上述结果证明,Ｍ－ＣＡＴ盒对鸡ＡＣｈＲγ－亚基基因－２０４／－５０片段的转录激活功能起作用。     

发育阶段M-CAT结合因子的组织分布及表达动力学

采用胶阻滞和DNA-蛋白质印迹技术分析了鸡胚和雏鸡发育不同阶段骨骼肌、心肌、胗、肝和脑组织核抽提物中M-CAT结合因子(MCBF)与含CATTCCT、CATTGCT核心序列的寡核苷酸的相互作用.胶阻滞实验结果表明,被检的五种组织均有MCBF结合活性存在,但结合模样不完全相同;两寡核苷酸探针与同一骨骼肌核抽提物结合模样也不相同.采用两寡核苷酸为探针对五种组织核抽提物进行DNA-蛋白质印迹分析均检出一分子质量约30 ku 核因子,提示30 ku核因子是存在于五种组织中的普遍因子,该因子可直接或以同二/多聚体结合CATTCCT、CATTGCT序列,属MCBF结合活性的基本组成成分.除普遍因子外,胶阻滞分析结果不排除各组织存在的特异因子通过蛋白质-蛋白质相互作用、与30 ku因子形成杂聚体结合DNA的可能性.骨骼肌组织30 ku因子在胚胎发育18天前表达,出生后消失.