绿豆胰蛋白酶抑制剂┐猪胰蛋白酶复合物的四方晶体结构

本文报道了绿豆胰蛋白酶抑制剂－猪胰蛋白酶（１∶２）复合物的四方晶体的结构测定。晶体属于Ｉ４２２空间群,衍射分辨率为０．２５ｎｍ,共确定了绿豆抑制剂５６个残基的空间位置。与已报道的三方晶体结构相比,其中的抑制剂分子的结构基本相同,并且抑制剂－酶三元复合物在四方晶体中也处于堆积无序状态,即复合物按两种取向进行堆积：Ｔａ∶ＭａＭｂ∶Ｔｂ和Ｔｂ∶ＭｂＭａ∶Ｔａ（Ｔａ,Ｔｂ为胰蛋白酶,Ｍａ为抑制剂结合环Ⅰ,Ｍｂ为抑制剂结合环Ⅱ）。但四方晶体结构比三方晶体结构多测定了一个抑制剂残基Ｐｒｏ１１的位置,同时,四方晶体中的抑制剂不存在膺β－折叠片层结构,其构象与三方晶体中的抑制剂相比有所变化。分析表明抑制剂的两个刚性的结构域之间的连接肽具有一定的柔性,并因此形成不同的晶型。此外,绿豆抑制剂与其他Ｂｏｗｍａｎ－Ｂｉｒｋ抑制剂相比,分子的两个双股的反平行β－折叠片层和抑制活性位点所在的结合环的结构具有很高的保守性     

绿豆胰蛋白酶抑制剂与猪胰蛋白酶复合物分子在四方和三方两种不同晶体中的取向关系

用Crowther的快速旋转函数研究了绿豆胰蛋白酶抑制剂(MBI)-猪胰蛋白酶(PTRY)复合物的四方晶体和三方晶体中胰蛋白酶分子的取向关系,并得出了它们之间的旋转矩阵。此旋转矩阵能和从胰蛋白酶模型分子为出发点在四方和三方晶体中所求得的胰蛋白酶分子的取向相互印证。此结果将促进绿豆胰蛋白酶抑制剂与胰蛋白酶的复合物立体结构及它们在不同晶形中的差异的研究。     

猪胰蛋白酶自溶活性产物—绿豆胰蛋白酶抑制剂复合物的初步晶体学研究

本文报道了猪胰蛋白酶自溶活性产物——绿豆胰蛋白酶抑制剂复合物的晶体生长及晶体学参数的测定。晶体衍射分辨率为2.8A,四方晶系,空间群I422,晶胞参数为a=b=121.6A,c=113.6A,V=1.680×10~6A~3,每个结晶学不对称单位中含一个复合物分子。     

B链氨端去－肽（B1）羧端去五肽（B26—30）猪胰岛素的初步晶体学研究

应用悬滴气相扩散法在含６％氯化钠和１２．５％丙酮的柠檬酸缓冲体系中,获得可供Ｘ射线结构分析用的Ｂ链氨端去－肽（Ｂ１）羧端去五肽（Ｂ２６－３０）猪胰岛素单晶体。晶体属四方晶系,空间群为Ｐ４１２２或Ｐ４３２２,晶胞参数为：ａ＝ｂ＝３６．０Ａ,ｃ＝１２０．０Ａ,α＝β＝γ＝９０度。单位晶胞中每个结晶学不对称单位含有２个ＤｅｓＢ１－ＤＰＩ分子。     

蕃茄蛋白酶抑制剂Ⅱa,Ⅱb的分离纯化及性质研究

经硫酸铵分级、ＣＭ－纤维素柱层析和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－７５柱层析,从野生型秘鲁蕃茄未成熟果实的匀浆液中分离纯化了蛋白酶抑制剂Ⅱａ,Ⅱｂ。纯化的蛋白酶抑制剂经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定呈单一带,分子量均为１７ｋＤ。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ结果表明蛋白酶抑制剂Ⅱａ,Ⅱｂ均与马铃薯蛋白酶抑制Ⅱ有血清学上的交叉反应。抑制蛋白酶活性测定显示两种蛋白酶抑制剂都表现强的抑制胰凝乳蛋白酶的活性,但对胰蛋白酶的     

B链氨端去－肽（B1）羧端去五肽（B26—30）猪胰岛素的初步晶体学研究

应用悬滴气相扩散法在含６％氯化纳和１２．５％丙酮的柠檬酸缓冲体系中,获得可供Ｘ射线结构分析用的Ｂ链氨端去一肽（Ｂ１）羧端去五肽（Ｂ２６—３０）猪胰岛素（ＤｅｓＢ１－ＤＰＩ）单晶体。晶体属四方晶系,空间群为Ｐ４１２２或Ｐ４３２２,晶胞参数为：ａ＝ｂ＝３６．０Ａ,ｃ＝１２０．０Ａ,ａ＝β＝γ＝９０°。单位晶胞中每个结晶学不对称单位含有２个ＤｅｓＢ１—ＤＰＩ分子。     

多管藻中R－藻蓝蛋自的分离、结晶和初步晶体学研究

从青岛采集的多管藻（Ｐｏｌｙｓｉｐｈｏｎｉａｕｒｃｅｏｌａｔａ）中分离得到的Ｒ－藻蓝蛋白,在ｐＨ＝７．０的０．０５ｍｏｌ／Ｌ磷酸盐－硫酸铵缓冲液中,使用悬滴气相扩散法获得适合Ｘ光衍射分析用单晶。经Ｂｕｅｒｇｅｒ徘循照相和ＸＲＤ—１００面探测仪分析,Ｒ－藻蓝蛋白晶体属于四方晶系,空间群为Ｐ４１（３）２１２,晶胞参数：ａ＝ｂ＝１３７．５ｃ＝２１８．５α＝β＝γ＝９０°。用等比重梯度柱法测定了晶体和母液的比重分别为１．１９和１．０９。根据分子量与晶胞体积估算,一个不对称单位含有一个分子,推测它的分子聚集态形式为（αβ）３。     

多管藻中R－藻蓝蛋自的分离、结晶和初步晶体学研究

从青岛采集的多管藻（Ｐｏｌｙｓｉｐｈｏｎｉａｕｒｃｅｏｌａｔａ）中分离得到的Ｒ－藻蓝蛋白,在ｐＨ＝７．０的０．０５ｍｏｌ／Ｌ磷酸盐－硫酸铵缓冲液中,使用悬滴气相扩散法获得适合Ｘ光衍射分析用单晶。经Ｂｕｅｒｇｅｒ徘循照相和ＸＲＤ—１００面探测仪分析,Ｒ－藻蓝蛋白晶体属于四方晶系,空间群为Ｐ４１（３）２１２,晶胞参数：ａ＝ｂ＝１３７．５ｃ＝２１８．５α＝β＝γ＝９０°。用等比重梯度柱法测定了晶体和母液的比重分别为１．１９和１．０９。根据分子量与晶胞体积估算,一个不对称单位含有一个分子,推测它的分子聚集态形式为（αβ）３。     

抗人α2a型基因工程干扰素单克隆抗体及亲和层析柱的研制

应用鼠－鼠杂交瘤细胞技术建立了三系稳定分泌抗重组人α２ａ型干扰素（ｒＨｕ－ＩＦＮ－α２ａ）单克隆抗体细胞系１Ａ５、１Ｂ５和２７Ａ７。细胞连续传代和在液氮中冻存后复苏,分泌抗体能力不变,并且维持在较高水平,细胞培养上清效价１∶２５６～１∶４０９６,腹水１∶２６×１０５～１∶２７×１０８。Ｉｇ亚类测定,１Ａ５和１Ｂ５ＭｃＡｂ为ＩｇＧ１,２７Ａ７为ＩｇＧ２ａ。三系ＭｃＡｂ均识别ｒＨｕ－ＩＦＮ－α２ａ和－α２ｂ,与ｒＨｕ－ＩＦＮ－α１和正常大肠菌体裂解液无反应。竞争ＥＬＩＳＡ试验,三系ＭｃＡｂ分别针对ｒＨｕ－ＩＦＮ－α２ａ上三个不同表位。同ＭｃＡｂ建立双抗体夹心ＥＬＩＳＡ对ｒＨｕ－ＩＦＮ－α２ａ和－α２ｂ均可检测到１５０ｐｇ／ｍｌ,约１０ＩＵ／ｍｌ的敏感度。用提纯的单抗制备亲和层析柱,单抗偶联率９５％以上。三系单抗亲和层析柱均可将粗制ｒＨｕ－ＩＦＮ－α２ａ提纯到９７％以上纯度。平均回收率为：１Ａ５单抗柱９０２％,１Ｂ５单抗柱９５３％,２７Ａ７单抗柱９４７％。比活性平均值依次为１９４×１０８ＩＵ／ｍｇ,１９７×１０８ＩＵ／ｍｇ和１６４×１０８ＩＵ／ｍｇ,残余鼠ＩｇＧ量均符合规程要求。纯化ｒＨｕ－ＩＦＮ?     

一株对棉铃虫高效的苏云金杆菌

１９７９年从舍蝇（Ｍｕｓｃａｖｉｃｉｎａ）幼虫中分离出一株能够形成伴孢晶体的芽孢杆菌７９００７。该菌具有苏云金杆菌天门变种（７２１６）的典型特征。血清型属Ｈ_{３ａ－３ｂ},但培养特征,生化特征与知的Ｈ_{３ａ－３ｂ}的戈尔斯德变种（ＨＤ－１）、天门变种（７２１６）略有不同,特别是对棉铃虫的毒力大大高于巳知的菌株,预示着将成为我国防治棉铃虫的一株高效菌。     

表型相似的热带假丝酵母和麦芽糖假丝酵母在脉冲电泳核型上的差异

热带假丝酵母Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ （Ｃａｓｔｅｌｌａｎｉ ）Ｂｅｒｋｈｏｕｔ和麦芽糖假丝酵母Ｃ． ｍａｌｔｏｓａＫｏｍａｇａｔａ, Ｎａｋａｓｅ ＆ Ｋａｔｓｕｙａ是两种可利用烃类作为碳和能量来源的酵母菌,前者还是一种条件致病菌,可引起系统感染。这两种假丝酵母菌在形态和生理生化性状上非常相似,用常规分类方法不易准确地鉴别。本研究对Ｃ． Ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ和Ｃ ｍａｌｔｏｓａ的模式菌株以及中国普通微生物菌种保藏中心（ＣＧＭＣＣ）保藏的归于这两个种名下的其它菌株进行了脉冲电泳核型比较分析。发现这两个表型相似的种具有明显不同的染色体ＤＮＡ分子带型,而同一种内的不同菌株却具有相同或相似的分子核型。Ｃ．Ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ的特异染色体ＤＮＡ分子带谱为２条８．５—１．２ Ｍｂ的带, ４条２．３－３．４ Ｍｂ的带。 Ｃ ｍａｌｔｏｓａ的特异带谱为： ３～４条分子量在１．１－１．３Ｍｂ范围内的带, １条约为２．２Ｍｂ的带以及２－３条大小为３．２－３．５Ｍｂ的带。 Ｃ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ与Ｃ ｍａｌｔｏｓａ在染色体ＤＮＡ分子带型上的差异与二者在可溶性淀粉的同化能力和４０℃下的生长能力上的差异具有明显的相关性…     

补体激活第三途径——凝集素途径

ＭＢＬ与Ｃ１ｑ,ＭＡＳＰ－１和ＭＡＳＰ－２与Ｃｌｒ与Ｃｌｓ具有同源结构和功能,ＭＢＬ与ＭＡＳＰ－１,ＭＡＳＰ－２组成类似Ｃ１的复合物,ＭＢＬ识别相应糖结构后,ＭＡＳＰ－１和ＭＡＳＰ－２相继激活,裂解Ｃ４和Ｃ２生成Ｃ３转化酶Ｃ４ｂ２ｂ,活化ＭＡＳＰ－１还直接裂解Ｃ３由此形成补体激活第三途径即凝集素途径,作为第一线天然免疫防御系统,该途径在种系进化,个体发育及病原体感染的早期均具有十分重要的生物学意义     

重组人a2b型干扰素的纯化与鉴定

采用单克隆抗体亲和层析一步纯化法对大肠杆菌表达的重组人ａ２ｂ型干扰素进行了纯化,然后利用凝胶过滤高压液相层析、ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳和Ｎ端２５个氨基酸的序列测定等方法对纯化产品进行了鉴定。表明一步纯化的ＩＦＮ－ａ２ｂ达到９５％以上的统一计划,其比活性为２．５４×１０×８ｕ／ｍｇ．但重组ＩＦＮ－ａ２ｂ产品Ｎ端不均一,含有约３０％的去Ｍｅｔ分子和约７０％的带Ｍｅｔ分子。从蛋白质序列的水平上证实,本     

单斜Al－（L－丙氨酸）胰岛素初步晶体学研究

用微量气相扩散方法在含酚的柠檬酸缓冲体系中,得到了可供Ｘ射线晶体学分析用的Ａｌ－（Ｌ－丙氨酸）胰岛素晶体,晶体衍射能力为２．５Ａ。经Ｘ射线衍射分析确定,该晶体属于单斜晶系,空间群为Ｐ２_１,晶胞参数：ａ＝６１．５Ａ,ｂ＝６２．２Ａ,ｃ＝４８．３Ａ,α＝γ＝９０．０°,β＝１１０．９°。晶胞中每个结晶学不对称单位含有一个Ａｌ－（Ｌ－丙氨酸）胰岛素六聚体。     

箬叶多糖的分离纯化及其理化性质的研究

采用分步提取的方式从中药箬叶中分离得到８种多糖组分：酸性杂多糖ＦＳ、ＦＥ、ＦⅠ,β－Ｄ－葡萄糖醛酸聚糖ＦⅡ和四种半纤维素多糖α－Ｄ－木聚糖ＦⅢ－ａ、ＦⅢ－ｂ、ＦⅣ－ａ及ＦⅣ－ｂ．紫外光谱、红外光谱、凝胶色谱、元素分析等结果表明８种箬叶多糖为纯品．并采用纸层析,气相色谱分析确定其单糖组成．采用高效凝胶渗透色谱ＧＰＣ法测定了４种箬叶多糖ＦＥ、ＦⅠ、ＦⅢ－ａ及ＦⅣ－ａ的重均分子量Ｍｗ、数均分子量Ｍｎ,均为大分子,分子量分布较窄,纯度较高．     

轻稀土离子对钙调蛋白激活的磷酸二酯酶活力作用的影响

研究了轻稀土离子（Ｌｎ３＋）对钙调蛋白（ＣａＭ）调控的磷酸二酯酶（ＰＤＥ）活力的影响。结果表明,在无Ｃａ２＋的ＣａＭ（Ａｐｏ—ＣａＭ）体系中,由ＣａＭ调节的ＰＤＥ的活力随Ｌｎ３＋浓度的变化曲线是双相效应,即在高浓度时,Ｌｎ３＋具有抑制ＣａＭ调节ＰＤＥ活力的能力;低浓度的Ｌｎ３＋可以提高ＣａＭ调节ＰＤＥ活力的能力。在Ｃａ２＋４－ＣａＭ－ＰＤＥ体系中,高浓度的Ｌｎ３＋的加入能抑制ＣｈＭ调节ＰＤＥ活力的能力,其抑制程度因其离子不同而异。ＣａＭ的两类拮抗剂ＪｕＡ（非竞争性抑制剂）和ＴＦＰ（竞争性抑制剂）都能抑制ＣａＭ－Ｌｎ３＋－ＰＤＥ系统的活性。最后对Ｌｎ３＋和ＣａＭ相互作用的分子机制进行了初步的讨论。     

北京鸭(Anas platyrhynchos)氧合血红蛋白的晶体生长和X射线晶体学的初步研究

北京鸭氧合血红蛋白晶体在以聚乙二醇６０００为沉淀剂,在ｐＨ７．１,血红蛋白浓度为２５ｍｇ／ｍｌ条件下采用一批结晶法培养得到,并且适合于Ｘ射线衍射分析。经Ｘ射线平面探测仪收集衍射强度数据和处理,确定晶体属四方晶系,空间群为Ｐ４２２１２,晶胞参数为ａ＝ｂ＝８．１１３ｎｍ,ｃ＝１０．７０７ｎｍ,α＝β＝γ＝９０°,每个不对称单位中包含半个四聚体分子。进一步得到北京鸭氧合血红蛋白高分辨率晶体结构,通过与其高海拔同类－斑头雁分析比较深入研究斑头雁血红蛋白分子的高氧亲和性机制。     

1．9A分辨率Al－（L－丙氨酸）胰岛素晶体结构研究

使用Ｘ－ＰＬＯＲ及立体化学制约最小二乘精化技术,并结合差值Ｆｏｕｒｉｅｒ图人工分析,测定了１．９　分辨率Ａｌ修饰丙氨酸胰岛素的晶体结构,晶体空间群为Ｒ３,晶胞参数：ａ＝ｂ＝８０．８９,ｃ＝３７．６４。精化后的结构模型最终偏离因子Ｒ＝０．１８５,同理想键长和键角的均方根偏差分别为０．０１８和３．５°,独立区内二个分子的Ａ链Ｎ端Ａｌ－丙氨酸残基清晰可见。     

Ca^2＋与CaM对大白鼠离体叶圆片Ca^2＋—ATPase和β—1,3—葡聚糖？…

经Ｃａ＾２＋与ＣａＭ促进剂和抑制剂处理的大白菜离体叶圆片,其细胞膜Ｃａ＾２＋－ＡＴＰａｓｅ活性同进受Ｃａ＾２＋与ＣａＭ的调节,而β－１,３－葡聚糖合成酶活性仅受Ｃａ＾２＋的调节,与ＣａＭ无关。     

具有中等毒性的马氏钳蝎神经毒素的纯化和初步晶体学…

运用柱层析技术对产自淅川和常德的马氏钳蝎毒素进行分离纯化,得到８种哺乳动物神经毒素。运用制备型等电聚焦电泳技术,对常德样品中具有中等毒性的蝎神经毒素进一步纯化,获得了高纯度样品。两个产地的蝎毒素ＢｍＫ５均已经成功地获得了大晶体。空间群均为Ｐ２１２１２１,晶胞参数分别为：ａ＝３８．４６埃,ｂ＝３７．２８埃,ｃ＝３６．９７埃;ａ＝３８．４４埃,ｂ＝３７．５５埃,ｃ＝３６．８３埃。对两个产地的晶体分别收