斑玉蕈酸性磷酸酯酶的酶学性质研究

以斑玉蕈为材料分别从菌盖和菌柄中提取一种酸性磷酸酯酶（ACPase,EC.3.1.3.2）,进一步用硫酸铵沉淀分离,Sephadex G-200柱纯化,从菌盖中分离到3个酶组分,从菌柄中分离到4个酶组分,分别对菌盖和菌柄的酶Ⅰ和酶Ⅰ′进行聚丙烯酰胺凝胶（PAGE）电泳纯度鉴定,均呈现单一酶蛋白带。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）测定酶Ⅰ和酶Ⅰ′的相对分子量均为65kDa,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及Sephadex G-75凝胶过滤测定分析,酶Ⅰ和酶Ⅰ′均为单亚基蛋白。紫外吸收光谱（UV）测     

BamHI DNA甲基化酶的提纯及物理化学性质

 通过硫酸铵盐析,DEAE-纤维素柱层析,磷酸纤维素亲和层析及SephadexG-100凝胶过滤法,从噬淀粉芽孢杆菌HI(Bacillus amyloliguefaciens HI)提纯了DNA甲基化酶。用聚丙烯酰胺凝胶电泳检查,已达电泳均一,比活力提高了326倍。并用聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳和Sephadex G-100凝胶过滤法测得其天然酶的分子量为273000,又用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测得它的亚基分子量为34500,故该酶有8个分子量相同的亚基。用凝胶电聚焦法测得其pI_(22 c)=9.0。     

一种检测聚丙烯酰胺凝胶中蛋白质免疫活性的方法

聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)已成为最有效的分离蛋白质手段。在免疫学研究中,经常遇到的问题是从聚丙烯酰胺凝胶中回收被分开的蛋白质组分,然后测其免疫活性。从聚丙烯酰胺凝胶中回收蛋白质的方法已有许多报道,其中以Hartvig的方法为最简便。该法以溴酚蓝为指示剂,利用电泳系统本身使     

红苋P104种子谷蛋白的电泳分析

通过单向不平变性聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦（ＩＥＦ）、十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）和双向电泳（ＩＥＦ×ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）分析了红苋Ｒ１０４种子谷蛋白的亚基组成,亚其分子量和等电点分布。谷蛋白的双向电泳图谱可分辨出１００多个亚基成分,其主要亚基为：５４ｋＤ（ｐＩ７．１５）;３３ｋＤ（ｐＩ５．８２）;３１ｋＤ（ｐＩ６．９２;ｐＩ６．７０;ｐＩ６．６５）;２２ｋＤ（ｐＩ８．３４）;２     

丁氏双鳍电鳐(Narcine timlei)电器官烟碱型乙酰胆碱受体(AChR)某些生化性质的研究

本文报道了丁氏双鳍电鳐（Narcine timlei）电器官烟碱型乙酰胆碱受体蛋白（AChR）的某些生化性质。纯化的AChR经聚丙烯酰胺梯度（4％—30％）凝胶电泳,呈现一个主要蛋白带,经测定,表观分子量为440,000,与~（125）I-α-Bgt-AChR复合物的分子量相一致。等电聚焦电泳测得纯化AChR和~（125）I-α-BgtAChR的等电点（pI）分别为4.9和5.2;经SDS—聚丙烯酰胺梯度（4％—30％）凝胶电泳,纯化的AChR解离成三个主要亚基蛋白带,它们的表观分子量分别为38,000,42,000和66,000,其中前两个亚基的含量很高,约占总数75％。氨基酸组成分析表明,丁氏双鳍电鳐电器官AChR由18种氨基酸组成,（色氨酸未测定）,其中酸性氨基酸含量很高,占总数的20％以上,说明纯化的AChR是一个复杂结构的酸性蛋白大分子。     

植物组织中蛋白质及同功酶的聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳

聚丙烯酰胺凝胶电泳是鉴定蛋白质、酶的有力工具,是生物化学研究上不可缺少的实验技术。聚丙烯酰胺凝胶是一种合成的凝胶,是由丙烯酰胺单体和交联剂甲义丙烯酰胺在催化剂的作用下聚合而成的大分子。不同的甲义丙烯酰胺在和丙烯酰胺浓度可制成孔径不同大小的电泳基质。电泳时蛋白质混     

胎儿血红蛋白 Gγ丁与 Aγ电泳区带的双波长扫描法定量

用双波长扫描法测定改良Triton X-100酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离的 ^Gγ和 ^Aγ链比值,具有准确、快速和步骤简便等优点。将凝胶干燥后作区带的双波长扫描定量,不影响测定结果,有利于标本的长期保存和进行大量的筛选工作。     

微量聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳

聚丙烯酰胺凝胶作为电泳分离的支持物于1959年首次得到应用,而聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳则是于1964年发展起来的。同年在分离脑蛋白时,首先应用了微量聚丙烯酰胺凝胶电泳。1965年有人将毛细管用于微量盘状电泳技术并报道了毫微克(ng)蛋白的分离及定量。     

LDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析植物过氧化物酶同工酶

以高粱和甘蓝型油菜叶片为材料,用十二烷基磺酸锂不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳（LDS-PAGE）检测过氧化物酶同工酶的结果表明,LDS-PAGE的酶带条数比非变性不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳（native PAGE）明显增加,分辨率大大提高,上样量少,胶片易保存;比复性电泳（G-PAGE）的步骤简单,电泳后无需除去LDS即可直接按常规活性染色方法染色。     

圆弧青霉碱性脂肪酶的分离纯化的特性

圆弧青霉突变株ＰＧ３７发酵液经离心、硫酸铵盐析、疏水层析、阴离子交换层析和凝胶过滤分离纯化得到了比活性为每毫克蛋白质５２００ｕ的碱性脂肪酶,纯化倍数１６．５,得率３３．２％,在聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）和ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电脉（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）上均呈现单一 白质条带。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和凝胶过滤分别测得酶的分子量为２７．５ｋＤ和２９．ｋＤ,表明该酶以单体形式存在。Ｎ末端１０个氨基酸的序列测     

胎儿血红蛋白~Gγ丁与~Aγ电泳区带的双波长扫描法定量

用双波长扫描法测定改良Triton X-100酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离的~Gγ和~Aγ链比值,具有准确、快速和步骤简便等优点。将凝胶干燥后作区带的双波长扫描定量,不影响测定结果,有利于标本的长期保存和进行大量的筛选工作。     

红苋R104种子谷蛋白的电泳分析

通过单向水平变性聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦（ＩＥＦ）、十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ—ＰＡＧＥ）和双向电泳（ＩＥＦ×ＳＤＳ—ＰＡＧＥ）分析了红苋Ｒ１０４种子谷蛋白的亚基组成,亚基分子量和等电点分布。谷蛋白的双向电泳图谱可分辨出１００多个亚基成分．其主要亚基为：５４ｋＤ（ｐＩ７．１５）;３３ｋＤ（ｐＩ５．８２）;３１ｋＤ（ｐＩ６．９２;ｐＩ６．７０;ｐＩ６．６５）;２２ｋＤ（ｐＩ８．３４）;２０ｋＤ（ｐＩ６．９２;ｐＩ６５６）;１８ｋＤ（ｐＩ６．９２;ｐＩ７３５;ｐＩ７．７２;ｐＩ８．０５）。另外,还对ＩＥＦ方法进行了讨论。     

聚丙烯酰胺凝胶电泳脂蛋白带的耐尔氏蓝染色法

目前聚丙烯酰胺凝胶电泳用考马斯亮蓝G或R染蛋白带、用过碘酸-Schiff试剂染糖蛋白带,均取得了满意的结果.至于用油红(OR)、苏丹黑(SB)对琼脂、醋酸纤维膜等凝胶中的脂蛋白带的染色鉴定是成功的,但对聚丙烯酰胺凝胶中的脂蛋白带的染色则不够满意.我们应用耐尔氏蓝[Nile’s blue] 染色法染盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳的脂蛋白带取得了较好的结果.现介绍如下:     

蝮蛇突触前神经毒素的纯化及其生化性质的进一步研究

本文在前文的基础上,改进了蝮蛇神经毒素的分离方法,纯化了蝮蛇毒中的两个神经毒素之一,突触前神经毒素Agkistrodotoxin(简写为ATX),并对其生化特性进行了分析。应用DEAE-纤维素柱层析、CM-葡聚糖凝胶柱层析和聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳等方法分离纯化,得到一个均一的神经毒素蛋白,经聚丙烯酰胺凝胶在pH 碱性和pH 酸性电泳鉴定,都呈现一条区带。氨基酸定量分析结果表明,此神经毒素由121个氨基酸组成,由此计算出的分子量为13,700,与用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得值接近。N 末端是门冬酰胺,C 末端是丝氨酸。纯化后的神经毒素显示磷脂酶A 活性,比活相当于粗毒的11倍。     

蝮蛇突触前神经毒素的纯化及其生化性质的进一步研究

本文在前文的基础上,改进了蝮蛇神经毒素的分离方法,纯化了蝮蛇毒中的两个神经毒素之一,突触前神经毒素Agkistrodotoxin(简写为ATX),并对其生化特性进行了分析。应用DEAE-纤维素柱层析、CM-葡聚糖凝胶柱层析和聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳等方法分离纯化,得到一个均一的神经毒素蛋白,经聚丙烯酰胺凝胶在pH碱性和pH酸性电泳鉴定,都呈现一条区带。氨基酸定量分析结果表明,此神经毒素由121个氨基酸组成,由此计算出的分子量为13,700,与用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得值接近。N末端是门冬酰胺,C末端是丝氨酸。纯化后的神经毒素显示磷脂酶A活性,比活相当于粗毒的11倍。     

简易平板聚丙烯酰胺凝胶干燥及保存装置

平板(Slab)聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)与含有十二烷基磺酸钠的聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)是一种重要的生化技术,在蛋白质与多肽的分析鉴定上,应用十分普遍。但电泳后的凝胶脆弱易碎,难长期保存。近年来,国外已有凝胶干燥保存装置的商品,但价格较贵,效果也不很理想。在干燥过程中有时胶片会干裂,尤其是对一些含聚丙烯酰胺浓度较高(20％以上)的胶或较厚的胶片(1.5—2mm)。在工作中,我     

简易平板聚丙烯酰胺凝胶干燥及保存装置

平板(Slab)聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)与含有十二烷基磺酸钠的聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)是一种重要的生化技术,在蛋白质与多肽的分析鉴定上,应用十分普遍。但电泳后的凝胶脆弱易碎,难长期保存。近年来,国外已有凝胶干燥保存装置的商品,但价格较贵,效果也不很理想。在干燥过程中有时胶片会干裂,尤其是对一些含聚丙烯酰胺浓度较高(20％以上)的胶或较厚的胶片(1.5—2㎜)。在工作中,我     

改良聚丙烯酰胺凝胶电泳检测DNA

本文介绍了应用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测DNA的改进方法。与以往方法相比,本方法从配制凝胶储备液,无需封口的水平灌胶,适当地提高电泳的电压梯度,采用改良银染法检测,省却凝胶固定,银染法DNA的纯化方法,及溴化乙锭染色法的操作等一系列改进措施,使聚丙烯酰胺凝胶电泳检测DNA的操作得到简化,更便捷,并减小了对人与环境的毒害作用。     

蝮蛇Agkistrodon halys Pallas蛇毒纤溶酶对纤维蛋白质的作用

应用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法证明蝮蛇毒纤溶酶对人体纤维蛋白原的α(A)链和β(B)链都有作用。借助酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳观察到人纤维蛋白原经蝮蛇毒纤溶酶水解后,产生一系列分子量大小不等的碎片X′、Y′、D′和E′。     

猪血小板外廓蛋白（profilin）的分离纯化和鉴定

本文合成了一种聚脯氨酸亲和层析凝胶,并用这种凝胶纯化了猪血小板外廓蛋白。纯化的外廓蛋白在ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳中呈单一蛋白带,分子量１４ｋＤ;在体外能显著抑制肌动蛋白聚合。