白喉毒素-白细胞介素2重组嵌合毒素的克隆表达及特异性细胞毒作用的研究

应用PCR技术分别扩增出编码白喉毒素氨基端 389个氨基酸 (DT3 89)的基因片段及人IL 2全基因 ,将两基因串连插入 pET3a载体 ,构建成含有DT3 89 IL 2融合基因的表达载体 ,转化大肠杆菌BL2 1,经表达、纯化后 ,用3 H Leucine掺入法测定其对HUT 10 2细胞的蛋白合成抑制作用。SDS PAGE电泳分析表明 ,表达产物分子质量 (Mr)约为 5 8kD ;重组嵌合毒素能够特异性地抑制高表达IL 2受体的HUT 10 2细胞的蛋白生物合成 ,且有一定的剂量反应关系 ,其细胞半数抑制浓度 (IC50 )约为 3 3× 10 -11mol/L。为进一步研制特异性的抗IL 2受体高表达肿瘤和相关疾病的药物打下了基础。     

Balb／c小鼠左右两侧大脑皮层IL—1β，IL—6含量的不对称性

为探讨左右侧大脑皮层白细胞介素1β（interdeukine-1β,IL-1β）和白细胞介素6（interleukine-6,IL-6)的含量状况及与左右侧大脑皮层免疫调控异质性的关系,。分别取正常及细胞菌脂多糖（lipopolysaccharuide,LPS)刺激2h后的Balb/c小鼠的左右侧大脑皮层,制备匀浆液,用ELISA法检测匀浆液中IL－1β,IL-6的含量,结果显示,正常小鼠大脑皮层IL－1β,IL-6含量均为右侧显著高于左侧;LPS刺激后,左侧大脑皮层IL－6含量明显升高,右侧大脑皮层IL－6含量显著高于左侧大脑皮层,而左右侧大脑皮层IL－1β含量无明显差异,该实验结果表明,Balb/c小鼠在正常生理状态下两大脑皮层IL－1β,IL－6含量存在不对称性,左右侧大脑皮层免疫调控异质性可能与细胞因子的不对称性有关。     

肝包虫病患者血清中IL—6和TNF—α的研究

IL—6和TNF－a是重要的炎症和免疫反应介质,它们参与多种感染性疾病的炎症反应和免疫应答【川。肝包虫病患者细胞因子的水平如何,国内尚未见报道,为此我们测定了27例肝包虫病患者血清TNF－a的含量,其中20例病人同时检测IL－6的含量,初步探讨其与发病机理的关系及在临床中的意义。1材料与方法1．1研究对象27例肝包虫病患者均系新疆医学院就诊检查或手术的病人。诊断依据：肝区B超可见液性暗区,免疫系检测3项（点免疫、间接血凝、对流免疫电泳）中2项以上阳性或手术证实。年龄10一63岁,男16例,女11例。抽取病人静脉血,常规分离…     

双歧杆菌对裸鼠腹腔巨噬细胞产生IL—1及IL—6的影响

给裸小鼠腹腔注射活的青春型双歧杆菌,并以小鼠胸腺细胞增殖法及ＥＬＩＳＡ法分别检测了裸鼠腹腔巨噬细胞分泌的ＩＬ１活性及ＩＬ６含量。结果表明：实验组裸鼠腹腔巨噬细胞分泌的ＩＬ１活性以及ＩＬ６含量均显著高于对照组,两者均具有统计学意义（ｐ＜００１）。这提示青春型双歧杆菌可激活巨噬细胞产生ＩＬ１以及ＩＬ６,它们在该菌调节机体免疫反应中可能起一定作用。     

人IL—6及其受体拮抗剂的研究进展

人IL－6及其受体拮抗剂的研究主要集中于两个方面：单克隆抗体和突变体,针对人IL－6和人IL－6R的活性区域构建的单克隆抗体对于临床治疗多发性骨髓瘤显示出了很好的短期疗效,根据与生长激素（GH）及其受体复合物GH／（GHbp)2的结构对比,推测人IL－6和IL－6Ra的活性位点,结合定点突变技术,设计IL－6突变体,IL－6R突变体和IL－6突变体－IL－6Ra融合蛋白,它们对天然hIL-6的生物活性显示出了明显的拮抗作用。     

人白介素6受体功能区片段在E.coli中的表达

通过ＤＮＡ体外重组技术,以ｐＥＴ－３ｂ为表达载体,构建了重组表达质粒ｐＥＴ－６Ｒ（Ｂ）和ＰＥＴ－６Ｒ（Ｂ）４,分别编码２８ｋＤ和ｈＩＬ－６Ｒ配基结合区片段及其５３ｋＤ的二联体蛋白,并为酶切分析和ＤＮＡ序列分析所证实,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明,含有重组表达质粒的菌株可分别表达出２８ｋＤ的蛋白ｒＩＬ６Ｒ－２８和５３ｋＤ的ｒＩＬ６Ｒ－５３重组蛋白分别占菌体总蛋白的４５％和２９％左右,重组蛋白主要包涵体形     

IL—2重组杆状病毒载体的构建及表达

将人白细胞介素２（ＩＬ－２）ｃＤＮＡ插入苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＮ－ＰＶ）的转移载体ｐＶＬ１３９２中。经限制性酶切和ＤＮＡ杂交筛选、鉴定出重组转移载体ｐＶＬ１３９２－ＩＬ２。重组载体通过在昆虫细胞内共转染将ＩＬ－２ｃＤＮＡ转移到野生型ＡｃＮＰＶＤＮＡ中。经３２Ｐ标记探针鉴定出重组病毒Ａｃ１３９２－ＩＬ２。用重组病毒感染昆虫细胞,结果表达产物有明显刺激ＣＴＬＬ细胞生长,［３Ｈ］－ＴｄＲ掺入法检测ＩＬ－２活性为１５００ＩＵ／ｍ１。     

IL—12抗病毒作用的研究

白细胞介素－１２（ＩＬ－２）是一种异源二聚体细胞因子。ＩＬ－１２通过调节Ｔｈ１／Ｔｈ２细胞分化,诱导ＩＦＮ－γ等细胞因子的生成,与ＩＬ－１２雷同作用增强ＮＫ细胞、ＬＡＫ细胞及ＣＴＬ细胞活性发挥抗病毒作用。本文介绍ＩＬ－１２的分子生物学,生物学活性及抗病毒作用的研究进展。     

中枢去甲肾上腺素通路和前列腺素参与IL—6,TNFα对大鼠下丘脑室旁核…

应用免疫组织化学方法研究了６－羟多巴胺化学性损毁中枢去甲肾上腺素通路和中枢引入前列腺素合成抑制剂消炎痛对脑室注射白细胞介素６,肿瘤坏死因子α诱导下丘脑室旁核小细胞Ｆｏｓ表达的影响。结果显示,这两种处理均可使Ｆａｓ表达细胞数目明显减少,说明显细胞介素６,肿瘤坏死因子诱导室旁核小细胞神经元Ｆｏｓ表达的作用与中枢去甲肾上腺素和中枢前列腺素有关。     

重组人白细胞介素—6与肿瘤坏死因子突变体融合蛋白的构建及表达

针对肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）在肿瘤治疗剂量下产生的严重毒副作用及一些肿瘤细胞上的白细胞介素－６（ＩＬ－６）受体明显增高的事实,根据ＴＮＦ结构与功能研究的最新信息,利用ＰＣＲ技术,对人ＴＮＦα基因进行了改造,并将共与ＩＬ－６成熟肽编码区ｃＤＮＡ通过人工接头进行融合,融合蛋白在大肠杆菌表达后,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析表明,分子量约为３７ｋＤ,活性检测结果证实,该融合蛋白兼具有ＴＮＦ抗肿瘤活性和结合ＩＬ     

IL－6受体结构与功能的研究进展

ＩＬ－６是一个多功能的细胞因子,其生物学作用在很大程度上受ＩＬ－６受体（ＩＬ－６Ｒ）结构和功能的影响。ＩＬ－６Ｒ由两条多肽链组成,即配体结合链ｇｐ８０和信号传导链ｇｐ１３０。它们在结构和功能上既有分工又有合作。两种亚基组成的高和力ＩＬ－６Ｒ是介导细胞效应所必需的。ＩＬ－６Ｒα中的造血功能区属于造血因子受体超家族成员,它决定着结合ＩＬ－６的能力,然而ｇｐ１３０则是多种细胞因子共用的信号传递分子,其胞     

可溶性白细胞介素6受体基因在链霉菌的克隆表达研究

以分离提取的ＨｅＬａ细胞总ＲＮＡ为模板,通过ＲＴ－ＰＣＲ反应扩增得到了１０１７ｂｐ的人可溶性白细胞介素６受体（ｓＩＬ－６Ｒ）ｃＤＮＡ片段,将扩增片段克隆到ｐＵＣ１９质粒中进行序列测定。结果证明该片的序列与文献报道的ｓＩＬ－６ＲｃＤＮＡ的序列完全一致,将ｓＩＬ－６ＲｃＤＮＡ与链霉素信号肽ｍｅｌＣｌ的编码序列融合后得到的融合基因ｍｅｌ／ｓＩＬ－６Ｒ克隆到链霉菌质粒ｐＬＪ４５９中,构建成重组表达质粒ｐＬ     

人重组IL6／IL2融合蛋白的变化,复性及纯化

经超声破碎,分离已表达ＣＨ９２５包涵体,较系统地研究变性剂浓度、融合蛋白浓度对蛋白折叠的影响,在还原型及氧化型谷胱复性条件下,成功地将融合蛋白ＣＨ９２５折叠成具有ＩＬ６及ＩＬ２双活性蛋白,ＩＬ６的比活为２．３×１０＾８Ｕ／ｍｇ,ＩＬ２比活为２．２×１０６Ｕ／ｍｇ。经阴离子交换,凝过滤层析,获得一定纯度的ＣＨ９２５,配合反相ＨＰＬＣ,洗脱收集蛋白峰,ＣＨ９２５纯度为９８％。     

IL—2重组表达研究现状及发展趋势

IL－2对某些恶性肿瘤的显治疗作用为恶性肿瘤的生物治疗带来了希望，发展高纯度，高活性，高产量的IL－2基因工程产品也成为近年来研究的热点，本比较了大肠杆菌，酵母菌，哺乳动物细胞及昆虫细胞表达体系的优缺点和它们在IL－2重组表达中的应用，并对其发展趋势作了预测。     

白喉毒素突变体CRM197在大肠杆菌中的高效可溶表达、纯化及免疫原性分析

CRM197(Cross-reacting material 197)是白喉毒素的无毒突变体,在生物制药领域具有非常广泛的应用前景。为了实现CRM197在大肠杆菌中的无标签、可溶表达,以替代现有昂贵、复杂的白喉杆菌分泌发酵工艺,文中对目的蛋白的序列进行优化,转化大肠杆菌经IPTG诱导,目的蛋白获得了可溶性高表达,目的蛋白约占碎菌上清总蛋白的40%。超声破菌后、经阴离子交换、肝素亲和以及脱盐三步柱上层析获得纯度高于95%的CRM197样品。细胞毒性实验证明,CRM197的IC_(50)值是白喉毒素IC_(50)值的2.1×10~7倍,是白喉类毒素IC_(50)值的9.6倍,表明文中表达的CRM197是安全无毒的。随后,比较了高、低剂量的CRM197在小鼠体内的免疫原性,发现2μg组三免后的抗体滴度与20μg组的相当,可达1︰409 600。文中建立了CRM197的无标签、高效、可溶表达的大肠杆菌表达系和快速纯化体系,获得了具有较好免疫原性和安全性的重组蛋白,为该蛋白的进一步应用奠定了基础。     

IL—13：一种作用于单核细胞及B细胞的IL—4样细胞因子

IL－13为最近发现的由活化T细胞产生的一种细胞因子,分子量约为10－17KD,染色体定位于5q31,研究表明：IL－13与IL－4的基因在人和小鼠的基因组中紧密连锁,又发现功能性IL－4受体与IL－13受体共用一个在信号传导中起重要作用的受体亚单位,IL－13与IL－4有许多相同的活性,可抑制单核／巨噬细胞产生炎性因子,促进Ig类型转换和Ig 的产生,但IL－3不作用于T细胞,本对这种新型细胞因子的结构及生物学活性进行了综述。     

白细胞介素2-绿脓杆菌外毒素融合基因的克隆及高效表达

利用聚合酶链式反应和寡核苷酸介导的定向诱变技术构建了白细胞介素2-绿脓杆菌外毒素IL2-PE40、IL2-PE40KDEL、IL2-PE66~(4Glu)和IL2-PE66~(4Glu)KDEL融合基因的原核表达重组质粒,并实现了高效表达,表达产物占菌体总可溶蛋白的20％～30％。此外,由于这一表达质粒在IL-2cDNA与PE基因连接处引入了唯一的SmaⅠ位点,其5＇、3＇端分别含有唯一的EcoRⅠ、PstⅠ位点,因此可方便地用其它基因替换IL-2或PE基因而获得相应融合蛋白的表达质粒。