蛋白质和多肽 C 端氨基酸序列研究进展

C 端序列测定长期以来是蛋白质化学领域中的一大难题,但是生物化学与分子生物学中的许多研究表明了 C 端序列的重要性.文中介绍了 C 端测定的一些最新技术,尤其侧重于化学降解法,特别是运用商品化的 N 端分析仪器分析 C 端序列,增强了仪器的通用性.文中还推荐了几种 C 端标记进而分离 C 端肽段,然后用 Edman化学法测定 C 端序列的简便方法,有一定的可行性.     

蛋白质C端(异)硫氰酸法序列测定反应机理及进展

蛋白质C端测序是蛋白质化学与分子生物学中一门有重要意义的技术,由Schlack和Kumpf于1926年提出的(异)硫氰酸法在该领域发展迅速并占主导地位.对(异)硫氰酸法的反应机理,最新进展以及标准乙内酰硫脲氨基酸制备进行了较详尽的介绍.     

一种优化的MALDI-TOF质谱分析多肽C端序列方法

利用基质辅助激光解吸飞行时间 (MALDI TOF)质谱技术 ,测定羧肽酶Y消化蛋白质和多肽 .所产生的缩短肽片段的质量 ,在一张谱图上得到各个不同酶解时间所形成的肽质量梯度 .根据谱图中相邻两肽峰的质量差得到切去氨基酸的信息 ,从而读出C端氨基酸序列 .在pmol水平下对人促肾上腺皮质激素片段 (ACTH 1 3 9) ,人血管紧张肽片段 (angiotensin Ⅰ ,angiotensin Ⅱ )的C端序列进行了测定 .讨论了在不同浓度 ,不同时间 ,不同温度下酶解所得到的序列测定结果 .在优化条件下 ,人ACTH片段得到了C端 2 0个氨基酸残基顺序 ,为目前C端序列分析所得到的最长序列     

蛋白质和多肽分离分析技术的新进展

本文介绍了蛋白质和多肽分离分析的一些最新进展。对氨基酸分析中水解及衍生化这二个步骤由手工发展到自动化进行了简要的阐述.关于HPLC则主要侧重于微柱分析和制备分离,这是与生物工程有关的二个重要技术。本文还用几个例子说明了毛细管电泳的高分辨力。并对蛋白质顺序分析技术进行了概括与评价。     

多肽和蛋白质药物的吸入给药

概述了多肽和蛋白质药物的肺吸收机制和用于吸入给药的研究进展,并简要讨论了多肽和蛋白质药物在用于吸入给药时存在的问题及今后的发展方向,为多肽和蛋白质药物的吸入给药研究提供一定的参考。     

蛋白质多肽类药物的脂肪酸修饰研究进展

随着基因工程技术的发展,蛋白质多肽药物的应用越来越受到人们的青睐。但此类药物具有血浆半衰期较短、免疫原性较强等不足 之处,在很大程度上限制了其临床应用。因此,研究人员尝试采用各种化学方法对蛋白质多肽类药物加以修饰,以弥补这一不足。与 PEG 修饰、 糖基化修饰、定点突变等方法相比,脂肪酸修饰除了可获得良好的生物活性、提高稳定性、降低免疫原性外,更重要的是由于脂肪酸是构 成人体脂肪、类脂和细胞膜磷脂的重要成分,可有助于提高药物的脂溶性,增大肠道黏膜透过性,增强药物与受体的结合。对蛋白质多肽 药物的脂肪酸修饰研究进展进行综述。     

蛋白质C

血液中的蛋白质C被激活后,通过多种方式促进凝血因子Xa和Ⅱa的形成．起到抗血液凝固、抗血栓形成的作用。蛋白质C功能异常,是一些血栓形成的原因。     

油松雌性不育系的POD同工酶和蛋白质多肽分析

用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术分析了油松雌性不育系和可育系雌配子体发育关键时期的POD和蛋白质多肽的变化。结果表明不育系POD同工酶在雌配子体处于几十个游离核时期活性较高,在雌配子体游离核停止分裂期活性降低,雌配子明显败育的后期,该酶的活性又有所增强。不育系的POD同工酶谱与可育系存在差异,出现了Rf值分别为0.39、0.77两条特异谱带,Rf为0.77的谱带不仅稳定而且表达量很高,Rf值为0.56的谱带表达量明显低于可育株。蛋白质多肽的分析结果表明不育系中存在分子量为18．7kD的特异蛋白质多肽,分子量为38．3kD的蛋白质多肽表达量明显低于可育系。     

一种用于蛋白质C端序列测定的脯氨酸乙内酰硫脲(TH-Pro)新制备方法

采用Ｌ－型脯氨酸（Ｌ－Ｐｒｏ）作为原料,三甲基硅烷异硫氰酸酯（ＴＭＳ－ＩＴＣ）作为偶联试剂制备脯氨酸乙内酰硫脲（ＴＨ－Ｐｒｏ）．产物经反相ＨＰＬＣ分离纯化,并通过氨基酸组成分析,紫外光谱扫描,质谱和核磁共振等方法鉴定．反应产率高达９６％．     

应用N端Cys-free断裂蛋白质内含子标记蛋白质N端

蛋白质的特异位点修饰可以帮助了解蛋白质的结构与功能.但是,现有的蛋白质特异位点标记方法种类有限,而且存在局限性,所以有必要开发新的蛋白质特异位点标记方法．以谷胱甘肽-S-转移酶(GST)为研究对象,借助蛋白质反式剪接技术,建立了利用新型断裂蛋白质内含子对蛋白质进行N 端标记的新方法.在这个方法中,通过简单的重组表达、标记和纯化得到带有荧光基团的小肽,经过蛋白质反式剪接,荧光基团被标记到蛋白质的N 端. 初步研究结果显示,标记效率可达到12 %.     

血浆低分子量蛋白与多肽的研究进展

血浆是临床上使用频率最高的体液样本,具有采样无创、使用便捷以及内含物丰富等特点,是挖掘疾病相关潜在生物标志物的重要来源.血浆中低分子量蛋白与多肽(low molecular weight proteins and peptides,LMWPs)包括细胞因子、生长因子、多肽类激素和蛋白质降解产物等,其以分子质量较小、序列...     

地衣芽孢杆菌DSM13分泌蛋白信号肽分析

地衣芽孢杆菌是重要的工业微生物,对于其分泌途径及信号肽进行预测和分析,有助于改善影响蛋白分泌的关键因素,高效生产异源蛋白。本研究首次在全基因范围内,利用SignalPv3.0等方法识别了地衣芽孢杆菌DSM13中各种分泌蛋白的信号肽。DSM13信号肽类型包括分泌型Sec信号肽、双精氨酸Tat信号肽、脂蛋白信号肽、IV型纤毛结构信号肽及生物信息素信号肽。同时分析了分泌途径组成,信号肽长度,氨基酸组成,各分泌信号肽特征,与枯草芽孢杆菌的异同以及重要工业酶制剂的分泌途径。该研究对使DSM13成为更有效分泌表达外源蛋白表达系统,具有重要的理论指导意义。     

综述与专论：血浆低分子量蛋白与多肽的研究进展

血浆是临床上使用频率最高的体液样本,具有采样无创、使用便捷以及内含物丰富等特点,是挖掘疾病相关潜在生物标志物的重要来源。血浆中低分子量蛋白与多肽(low molecular weight proteins and peptides,LMWPs)包括细胞因子、生长因子、多肽类激素和蛋白质降解产物等,其以分子质量较小、序列可表征、来源广泛等优势,得到了研究人员的青睐。近年来,随着高分辨率、高灵敏度质谱仪与计算科学的不断发展,新技术新方法的融入,LMWPs相关研究也有了新的发展。本文结合当前本领域的研究热点,介绍了血浆LMWPs的分类,包括完整小蛋白、蛋白质降解物、神经肽、免疫多肽、载体蛋白结合的LMWPs和小开放阅读框编码的多肽,同时总结了血浆LMWPs在富集方法、研究策略、功能研究以及疾病相关生物标志物方面的研究进展,并对血浆LMWPs面临的挑战和未来的研究方向进行了讨论。     

中国家蚕抗菌肽CBM1、CBM2的克隆和表达研究

根据所测定的中国产家蚕CBM1和CBM2 cDNA序列,设计成熟肽的特异性引物,将此基因与凝血因子Xa（FXa）的切割序列以PCR方法连接起来,克隆至pGEX—KG表达质粒中。该载体为改进的GST融合表达质粒,所携带的6个Gly有助于提高FXa的切割效率。克隆得到的融合载体在大肠杆菌JM109中扩增和筛选。经DNA测序,证实为含有正确序列的乙酰化的pGEX—KG—FXa—NCBM1（pKG—FXa—NCBM1）、非乙酰化的pGEX—KG—FXa—CBM1（pKG—FXa—CBM1）和乙酰化的pGEX—KG—FXa—NCBM2（pKG—FXa—NCBM2）、非乙酰化的pGEX—KG—FXa—CBM2（pKG—FXa—CBM2）。将该载体在BL21中诱导表达,得到GST-FXa切割位点NCBM1、CBM1、NCBM2、CBM2等4种融合蛋白。经SDS—PAGE,考马斯亮兰染色后,Lab—Work扫描,其表达产物达到15％～20％,每升培养液平均可得20mg融合蛋白。菌体总蛋白经GST-亲和层析柱得到纯的GST—FXa—NCBM1、GST—FXa—CBM1、GST—FXa—NCBM2、GST—FXa—CBM2融合蛋白,再经FXa酶切后,透析过柱得到重组的NCBM1和CBM1。平板抑菌试验证明,4种融合蛋白均有明显的生物学活性,且没有显著的差异。     

嗜酸氧化亚铁硫杆菌基因组分泌蛋白的初步分析

利用信号肽预测软件SignalP v3.0、跨膜螺旋结构预测软件TMHMM v2.0和非经典分泌蛋白预测软件SecretomeP对嗜酸氧化亚铁硫杆菌全基因组的3 218个氨基酸序列进行预测分析.结果表明在嗜酸氧化亚铁硫杆菌中有507个蛋白为分泌蛋白,其中分泌型信号肽120个(其中有9个为RR-motif亚组型信号肽),脂蛋白信号肽3个,Prepilin-like信号肽4个,非经典分泌蛋白380个.并对分泌型信号肽的长度分布、氨基酸使用频率和酶切位点的氨基酸使用频率作了统计.得分最高的100个非经典分泌蛋白中,有36个具有功能分类,主要是参与细胞壁、能量代谢及转运和结合的蛋白质.嗜酸氧化亚铁硫杆菌的这507个分泌蛋白所参与的生化过程可能发生在膜外的周质空间或是菌体外的场所,为该物种与矿物相互作用,以及对环境做出响应服务.     

噬菌体phi29末端酶gp16蛋白C端结构域在溶液中的构象分析

噬菌体phi29是一种双链DNA病毒,它的增殖和成熟过程需要将较大的子代DNA包装入一个空间极其有限的新生病毒衣壳中,这一步骤由其转运马达完成.转运马达具有三个部分:头颈连接器蛋白(the connector)、pRNA和ATP水解酶蛋白(gp16).在结构预测中发现gp16蛋白的C端结构域可能与pRNA或DNA结合,但尚未有相关文献可以证明这种相互作用,因此其结构的解析成为研究其功能的关键.本文利用大肠杆菌SUMO表达系统,对噬菌体phi29 gp16蛋白的C端结构域进行重组构建并诱导表达后,通过Ni-NTA亲和层析纯化,再用分子排阻色谱获得高纯度的目的蛋白质单体,纯度达到95%左右.最后用X射线小角散射技术(small angle X-ray scattering)对其构象进行分析,收集小角散射数据,当目的蛋白的浓度为1.3 g/L、所得到的目的蛋白的三维结构与同源蛋白FtsK的晶体结构高度拟合,且通过CRYSOL软件反推计算的曲线与实验曲线高度重合.通过原核表达、纯化及结构分析,成功获得了该结构域在溶液中的状态信息.这一研究不仅为后续关于该结构域的功能研究奠定基础,也为病毒感染的诊断和治疗提供新思路.     

Complement Activation Products C3a and C4a as Endogenous Antimicrobial Peptides

All vertebrate species are constantly challenged by infectious agents and pathogens. In order to fight these infectious agents the human host has developed a sophisticated and powerful immune defense. The complement system, which represents the first defense line of innate immunity is activated immediately, within seconds. The activated immune system recognizes and damages an invading microbe, coordinates the host immune response and further orchestrates the adaptive immune response. Activation of the complement system leads to a rapid and amplified response which includes the generation of small peptides like C3a and C4a that display antimicrobial, anti-fungal and anaphylactic activity. Here we report how these antimicrobial peptides are generated during the immune response and summarize the functional mechanisms of these intrinsically generated anti microbial peptides.     

去B链羧端七肽人胰岛素的分离纯化及性质研究

在大肠杆菌温度诱导体系中以非融合方式进行去Ｂ链羧端七肽人胰岛素原基因的表达,获得去Ｂ链羧端七肽人胰岛素原,表达产物占细胞总蛋白量的１３％,表达产物经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０柱层析分离及胰蛋白酶和羧肽酶Ｂ的酶促转化等步骤,可得到纯度达９４％以上的去Ｂ链羧端七肽人胰岛素,其氨基酸组成与预期值相符,受体活性是标准猪胰岛素的１％．     

植物小分子肽的研究进展

植物信号肽的研究主要集中在小分子肽.小分子肽作为胞间通讯的关键成分,主要参与信号干扰、反应途径、显示抗菌活性,并以配体的形式与细胞膜表面的受体激酶相互作用,从而实现细胞之间的信号交流.小分子肽是重要的胞间信号感应分子,在植物的不同器官组织、发育阶段主要参与调节植物的生长发育过程和应答生物和非生物胁迫的应激反应,以协调和...