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反相胶束体系中辣根过氧化物酶的活力和动力学性质 总被引:4,自引:2,他引:4
本文系统研究辣根过氧化物酶在CTAB/H2O/CHC.3-isooctane(1∶1,V/V)反相胶束体系中的催化行为。在一定条件下酶反符合Michaelis-Menten动力学。研究水含量、底物浓度、PH、温度、表面活性剂的浓度等对酶反应的影响,结果表明表面活性剂对酶表现非竞争性抑制作用,高浓度的过氧化氢抑制酶活,最适PH为7.0。在低水含量(W0<5)的胶束体系中保温后,酶的活力发生不可逆的改 相似文献
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研究了辣根过氧化物酶在三种表面活性剂(SDS,TritonX-100及CTAB)的水相胶束中催化联苯胺聚合反应的动力学。结果表明水相胶束体系有利于反应的进行。辣根过氧化物酶在水相胶束体系中遵循米氏反应,K_m在SDS、TritonX-100及CTAB三种体系中分别为3.014×10~(-4)mol/L、1.728×10~(-4)mol/L和5.664×10~(-5)mol/L。由于微环境的不同,HRP在三种体系中表现出不同的最适反应温度和最适pH。 相似文献
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实验研究Ag 对HRP的影响对检测银的污染有重要意义。以ABTS[2,2-连氮-双-(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)]和H2O2为底物,在pH值5.0的条件下,用分光光度法考察了Ag 存在下的辣根过氧化物酶催化氧化反应。Ag 对辣根过氧化物酶的催化活性显示出抑制作用,并进一步分别探讨了对两种底物的抑制类型和对酶结构的影响。结果表明Ag 对底物H2O2而言,对酶的抑制效应属于反竞争性抑制类型,抑制常数Ki=14.83mmol/L;对底物ABTS而言,对酶的抑制效应属于非竞争性抑制,抑制常数Ki=16.139mmol/L。不同浓度Ag 分别与酶作用后,测定酶的内源荧光光谱。光谱结果表明Ag 影响酶活性的同时也影响酶的构象。 相似文献
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辣根过氧化物酶 (HRP)是一种常用的工具酶 ,对其模拟酶的研究是近年来生物化学和有机化学的重要课题 ,具有重要的理论意义和应用价值。本文评述了近十年来HRP模拟酶的研究进展。 相似文献
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中性辣根过氧化物酶制法新进展 总被引:1,自引:0,他引:1
中性辣根过氧化物酶制法新进展季钟煜,费锦鑫(上海普洛麦格生物产品有限公司,上海200233)关键词中性辣根过氧化物酶辣根过氧化物酶(HRP)是生物检测中用得非常多的工具酶,其应用和经济价值都很大。因此,制备HRP的技术和方法也是相关行业的一个重要研究... 相似文献
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辣根过氧化物酶产品的测定 总被引:5,自引:0,他引:5
辣根过氧化物酶产品的测定季钟煜,陈佩颖(上海普洛麦格生物产品有限公司,上海200233)关键词辣根过氧化物酶(HRP),邻苯三酚辣根过氧化物酶(HRP)是从辣根植物块根中提取制造的。它的实用价值很高,在临床检验上用作为酶指示剂和酶标记,藉以检验体液和... 相似文献
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辣根过氧化物酶在一种新型有机介质中的催化反应 总被引:4,自引:0,他引:4
选择合适的酶反应介质体系,是酶应用于有机合成的一个重要环节。利用适宜分子量的聚乙二醇(PEG)可以将辣根过氧化物酶(HRP)分散在甲苯中,摸索了HRP在聚乙二醇(PEG)-甲苯互溶体系反应的适宜条件,即PEG/甲苯的比例、含水量、pH值、底物浓度等对酶活性影响,结果发现PEG含量越低,含水量越高,酶的活力越高;酶在此体系中的最适pH值为7.0,最适过氧化氢浓度为20mmol/L,愈创木酚的浓度为0 相似文献
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BSA和PEG可以有效地提高固定化辣根过氧化物酶(HRP)在有机相中的活力。固定化酶活力的提高与试剂加入的顺序有密切的联系;不同载体对酶的影响不同,Gelite,alumina,XAD-7,Kiselgel和Florisil为载体,分别以吸附法制备固定化酶。实验表明固定化过程中保护剂和酶的加入顺序与国家化酶活力密切相关,而这些载体的固定化效果又以Celite最佳,Florisil最差。Floris 相似文献
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辣根过氧化物酶的热稳定剂 总被引:1,自引:1,他引:1
保持酶的天然状态和高催化特性具有重要的意义。本研究筛选了辣根过氧化物酶(HRP)的稳定剂并研究了其作用机制。结果发现硫酸镁和明胶能够显著提高HRP的热稳定性,并且两者具有协同作用。在硫酸镁和明胶组成的酶稳定剂存在的条件下,HRP在50oC保温80h后仍能保持89%的活性,常温下存放90d后可保持57%的活性,而未加稳定剂的对照样品中HRP的残留活性分别为6%和小于1%。通过对HRP的Soret带吸收光谱,色氨酸内源荧光,ANS荧光进行分析,揭示酶稳定剂可以明显降低在加热条件下HRP的变性程度,从而维持较为稳定的天然构象。 相似文献
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甲醇酵母Pichia pastoris高水平表达有活性的辣根过氧化物酶 总被引:1,自引:0,他引:1
表达有活性的辣根过氧化物酶(HRP) 不仅可以深入揭示HRP 结构与功能及其生理作用规律, 而且为HRP的广泛需要提供新的来源. 为了在甲醇酵母P. pastoris 中成功表达, 将编码HRPC成熟肽的cDNA 构建到pPIC9 上, 再转化到P. pastoris 中, 筛选到了分泌表达非糖基化HRP 和高糖基化HRP( 分子质量超过100 ku) 两种主要产物的重组细胞株. 优化表达条件, 目标产物在摇瓶发酵液中高效表达, 可达4~6 g/L. 并且直接从发酵液中可获得具有活性的高糖基化HRP, 每毫升发酵液中酶活力约有2 U, 经初步的纯化HRP具有最大吸收峰403 nm . 相似文献
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建立了一种分析HRP催化活力的新方法。该方法基于单体(底物)、聚合物(产物)的荧光发射光谱不重叠,使用荧光光谱仪,通过测量底物荧光淬灭来检测HRP在非水介质中(二氧六环一水、乙醇-水、丙酮-水体系)催化酚类、芳香胺类物质聚合的活力。此方法迅速、简便,结果是定量并可重复的,并能定量地计算底物转化率。 相似文献
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反相胶束体系中的酶学研究 总被引:14,自引:1,他引:13
反胶束是新的酶学研究体系,酶在反胶束体系中的性质与在水溶液中相比有较大区别.评述了反胶束体系的性质及酶在其中的催化活性及构象变化,讨论了影响酶活性及构象变化的各种因素,并简单介绍了反胶束酶学研究及应用的最新进展. 相似文献
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为研究固定化的辣根过氧化物酶降解酚类有机污染物及检测环境有毒物质过程的动力学机制 ,利用伴刀豆蛋白A与糖蛋白的特异性吸附性质将辣根过氧化物酶层层固定在玻碳电极表面 ,制备了一种灵敏度高、性能稳定的辣根过氧化物酶多层膜生物传感器 ,并推导出了辣根过氧化物酶对过氧化氢、对苯二酚的催化反应以及苯肼对该反应的抑制作用的动力学模型。运用酶传感器实验数据 ,对推导出的动力学模型进行了拟合与参数估计。 相似文献
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目的:克隆与表达辣根过氧化物酶同功酶C3(HRPC3)基因。方法:用PCR方法从辣根的总DNA中,扩增得到一种辣根过氧化物酶同功酶C3基因,将PCR产物连接到pMD18-T载体上,测序证明正确后,再将目的基因正确插入到巴斯德毕赤酶母表达载体pPIC9K中,含有目的基因的重组pPIC9K质粒在毕赤酶母中进行表达与分析。结果:应用毕赤酶母作为受体菌,成功表达了HRPC3基因,其活性为56IU/L。结论:毕赤酶母直接表达出了具有生物活性的辣根过氧化物酶同功酶C3。 相似文献