小鼠DNA的限制性片段长度多态性分析

用人类肌红蛋白基因内含子中３３ｂｐ的小卫星ＤＮＡ重复序列为探针,经ｐＢＲ３２２的ＥｃｏＲ Ｉ正向测序引物和α－３２Ｐ－ｄＣＴＰ在Ｔａｑ ＤＮＡ聚合酶作用下做合成标记,与６种小鼠的ＤＮＡ限制性片段杂交。结果显示,每个品系平均出现可分辨带纹在１３条以上,不同品系小鼠间的杂交带纹表现出高度的多态性。多态性带纹主要分布在６￣２３ｋｂ区段;同一近交系的不同个体间的带纹特点及分布完全一致;ＣＳ７与ＡＫＲ及二者     

人体小卫星DNA探针的制备

根据人体小卫星DNA核心顺序,化学合成长23碱基寡核苷酸探针,筛选人体基因组文库,旨在获得能用作遗传分析探针的小卫星顺序。结果得到15个含小卫星的阳性重组子。随机取其一(C_(35.9))作探针,试做群体分析。所有个体均可检出多条杂交带。其中某些带具有多态性。在一定检测条件下,检出的DNA图谱在有限的个体内具有个体特异性。结果表明筛选文库得到的小卫星顺序可用于小卫星多态性的检测。其它小卫星探针的筛选和应用性研究正在进行。     

利用Pyrobest DNA聚合酶一步法进行大片段基因的定点突变

目的:介绍一种简单、快速、高效和经济的进行大片段基因定点突变的方法。方法:小量抽提含有NM23H1-EGFP融合基因的逆转录病毒真核表达质粒pLXSN-NM23H1-EGFP,体外合成突变引物对,利用高保真Pyrobest DNA聚合酶对质粒DNA进行PCR突变反应,然后用DpnⅠ限制性内切酶消化PCR产物以去除模板DNA,取适量消化产物转化大肠杆菌XL1-Blue,随机挑选克隆进行测序筛选、鉴定所需突变株。结果:在NM23H1-EGFP基因中引入了S44A、P96S、H118F、S120G、P96S-S120G等5个替换突变位点及9bp处的插入突变。结论:该方法简单、快速、高效、经济,不须纯化中间产物,不须亚克隆,突变效率几乎为100%,是一种值得推广应用的方法。     

近交系BALB/c小鼠及先天遗传性白内障突变型BALB/cBk-Cat小鼠的DNA指纹研究

采用人工合成的寡核苷酸探针(GATA)~4|分别与近交系小鼠BALB/c和经10年 30代培育而成的自发突变型近交系先天遗传性白内障BALB/cBk-Cat小鼠进行DNA分杂交,DNA指纹显示:(1)BALB/c小鼠个体之间以及BALB/cBk-C at小鼠个体之间没有差异;(2)BALB/c小鼠与BALB/cBk-Cat小鼠的DNA指纹在23-6kb之间的区域有差异。     

近交系BALB/c小鼠及先天遗传性白内障突变型BALB/cBk-Cat小鼠的DNA指纹研究

采用人工合成的寡核苷酸探针(GATA)~4|分别与近交系小鼠BALB/c和经10年 30代培育而成的自发突变型近交系先天遗传性白内障BALB/cBk-Cat小鼠进行DNA分杂交,DNA指纹显示:(1)BALB/c小鼠个体之间以及BALB/cBk-C at小鼠个体之间没有差异;(2)BALB/c小鼠与BALB/cBk-Cat小鼠的DNA指纹在23-6kb之间的区域有差异。     

微卫星DNA的多态性及其应用

微卫星DNA是广泛存在于各种真核生物基因组中的短串联重复序列,具有突变速率快、多态性高等特点,本分析了微卫星的多态性及其形成机制,并简要介绍其在亲缘关系鉴定、种群遗传结构分析、基因图谱以及基因诊断等方面的应用。     

应用PCR技术定向引入DNA小片段的策略

描述一种应用PCR技术定向引入DNA小片段和特异酶切位点的方法。为了获得m2/loxp66EGFPloxp71基因片段。根据EGFP基因序列,设计一对特异引物,上、下游引物分别引入m2/loxp66、loxp71序列和Xhol、Mlu1酶切位点。以pEGFPN1质粒为模板,采用PCR扩增以合成DNA双链,插入到克隆载体pMD18T。对重组子测序结果表明,实现了DNA小片段和酶切位点的定向引入。     

线粒体T12338C突变可能是与Leber遗传性视神经病变相关的突变位点

Leber遗传性视神经病变变(Leber’s hereditary optic neuropathy,LHON)是一种与线粒体DNA(Mito-chondrial DNA,mtDNA)突变相关的母系遗传性眼科疾病。文章报道了两例具有典型LHON临床、分子遗传特征的中国汉族家系。首先通过对家系先证者和其他成员进行眼科相关检查,发现两个家系成员中视力都仅有先证者一人损害严重,即外显率很低。经常规的方法对母系成员进行mtDNA测序及相关软件分析,结果发现携带ND4 G11696A和ND5 T12338C同质性突变位点,多态性变异位点均属于东亚单体型F2。线粒体DNA ND4 G11696A是一个已知的与LHON相关的突变位点,而T12338C位于线粒体氧化磷酸化复合体I亚基ND5的第2个碱基,该突变使起始密码子由蛋氨酸转变成苏氨酸,并且紧连tRNALeu(CUN)的3′末端。这可能影响tRNA Leu(CUN)空间结构和稳定性发生改变,以及起始密码子改变导致线粒体ND5蛋白合成功能受损和ATP障碍,最终导致需求能量高的视神经受损和视力损害。因此,线粒体ND4 G11696A和ND5 T12338C突变可能协同作用Leber遗传性视神经病变的发生,是与LHON相关的mtDNA突变位点,但外显率很低说明突变本身不足以造成LHON的表型表达,提示其他修饰因子(核修饰基因、环境等)可能对这两个家系发病起协同作用。     

DNA指纹在近交系动物遗传污染检测中的应用

在用ＤＮＡ指纹为建立葡萄胎动物模型选择动物的过程中,发现“三种”不同来源的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠的ＤＮＡ指纹出现了明显差别。与标准的保种品系Ｂ１和Ｂ２有１２ｋｂ各缺铁了一条ＤＮＡ片段,Ｂ１还缺失了６．６ｋｂ的片段,而在６ｋｂ处Ｂ１和Ｂ２都增加了一条ＤＮＡ片段。     

金属硫蛋白融合蛋白的分离纯化

采用IPTG诱导新1#菌BL21（DE3）（pET21a-MT)高效表达Balb/C小鼠金属硫蛋白融合蛋白,并采用包涵体分离纯化方法及Sephadex G-75柱层析得到SDS－PAGE电泳为一条带的金属硫蛋白融合蛋白收集液。     

小鼠生态条件对Friend小鼠白血病病毒感染的影响

本文探讨了Ｆ１小鼠生态条件（鼠龄和免疫状态）对Ｆｒｉｅｎｄ小鼠白血病病毒（Ｆｒ．ＭｕＬＶ）感染的影响。利用对Ｆｒ．ＭｕＬＶ抗性的Ｆｖ４小鼠（含Ｆｖ４抗性基因纯合子的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠）与对Ｆｒ．ＭｕＬＶ敏感的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠交配，获得含Ｆｖ４抗性基因杂合子的Ｆ１小鼠（ＢＡＬＢ／Ｃ×Ｆｖ４）。然后经小鼠腹腔接种Ｆｒ．ＭｕＬＶ病毒液进行攻击，并检查不同鼠龄和免疫状态下的Ｆ１小鼠对Ｆｒ．ＭｕＬＶ的敏感性，以阐明Ｆ１小鼠的鼠龄和免疫状态对Ｆｒ．ＭｕＬＶ感染的影响。结果表明，新生Ｆ１小鼠可发生Ｆｒ．ＭｕＬＶ感染，脾脏中有大量病毒增殖，并引起白血病；免疫抑制剂Ｆｋ５０６投与下的成年Ｆ１小鼠亦可发生Ｆｒ．ＭｕＬＶ的感染，脾脏中有病毒增殖，但不引起白血病；而新生或成年Ｆｖ４小鼠以及成年Ｆ１小鼠可抵抗Ｆｒ．ＭｕＬＶ的感染，脾脏中无病毒增殖，不发病。说明Ｆ１小鼠的鼠龄和免疫状态等生态条件可影响其对Ｆｒ．ＭｕＬＶ感染的敏感性，并且可影响Ｆｖ４基因抗病毒作用。     

树鼠mtDNA限制性内切酶图谱及其与小家鼠褐家鼠的亲缘关系

本实验用ＡｐｅⅠ,ＡｖａⅠ,ＢａｍＨⅠ,ＢｃｌⅠ,ＢｇｌⅠ,ＣｌａⅠ,ＥｃｏＲⅠ,ＥｃｏＲＶ,ＨｐａⅠ,ＰｓｔⅠ,ＰｖｕⅡ,ＳｃａⅠ,ＸｂａⅠ等１３种限制性内切酶分析树鼠（Ｃｈｉｒｏｍｙｓｃｕｓｃｈｉｒｏｐｅｓ）的ｍｔＤＮＡ限制性片段长度多态性,并用双酶解法构建了其中８种酶的限制性内切酶图谱。根据限制性片段差异法和分子钟,计算并讨论树鼠和小家鼠（Ｍｕｓｍｕｓｃｕｌｕｓ）、褐家鼠（Ｒａｔｔｕｓｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）的ｍｔＤＮＡ遗传距离和亲缘关系。结果表明树鼠与褐家鼠的关系较接近,两者的分歧时间在距今１５００─２０００万年前,即处于中新世早中期。     

C57BL／6J小鼠ES细胞系的建立及其特性分析

本文报道从C57BL/6J个鼠的囊胚中,建立了三个ES细胞系MESPU17,MESPU18,MESPU19。这些细胞的细胞学特征和强AKP反应,表明这三个细胞系具有干细胞的特征。这三个细胞系均为XY型,正常二倍体核型分别占70％、88％和59％。体外分化可形成简单类胚,体内分化可形成瘤块。与国际上通用的CCE和来自129/ter的ES细胞MESPU13相比,这三个细胞系的ES细胞较大;在体外培养时,生长较慢;细胞也较粘,进行显微注射时,很容易粘在注射针壁上。MESPU17,MESPU18进行了嵌合体制作,以BALB/c和昆明鼠的囊胚为受体,采用囊胚注射法未获嵌合体,但使用昆阴鼠的8细胞胚注射法和共培养法得到嵌合体。     

系统性红斑狼疮(SLE)患者血清免疫复合物中DNA的提取及电镜观察

从活动期SLE患者血清DNA/抗-DNA免疫复合物中分离DNA,用电镜观察结果表明:这些DNA是很不均质的双链片段。它们的分子量范围很宽,镜下可见的最小片段长553A(约150bp),最大片段长10431A(约2800bp),多数DNA片段长约200—400bp,与正常对照相比较有明显区别。另外,还观察到具有单链末端的双链DNA片段。     

晶状体生化的研究——亚硒酸钠诱发大鼠白内障晶状体中巯基、二硫键及维生素C的含量

我们测定了正常及亚硒酸钠诱发的白内障大鼠晶状体中非蛋白质巯基、蛋白质巯基、蛋白质结合巯基和维生素C的含量,发现随着白内障的进展非蛋白质巯基及蛋白质巯基均减少,蛋白质结合巯基在核混浊时增加,而在整个晶状体混浊时下降到与正常对照组相近,在白内障形成过程中二硫交联的蛋白质含量明显增加,而维生素C含量似乎无明显变化。     

Anti-leishmanial Effects of Trinitroglycerin in BALB/C Mice Infected with Leishmania major via Nitric Oxide Pathway

This study investigated whether trinitroglycerine (TNG) as nitric oxide (NO) releasing agent had anti-leishmanial effects and mediated pathology in BALB/c mice infected with Leishmania major. Cutaneous leishmaniasis (CL), a zoonotic infection caused by leishmania protozoa is still one of the health problems in the world and in Iran. NO is involved in host immune responses against intracellular L. major, and leishmania killing by macrophages is mediated by this substance. Moreover, application of CL treatment with NO-donors has been recently indicated. In our study, TNG was used for its ability to increase NO and to modify CL infection in mice, in order to evaluate NO effects on lesion size and formation, parasite proliferation inside macrophages, amastigote visceralization in target organs, and NO induction in plasma and organ suspensions. Data obtained in this study indicated that TNG increased plasma and liver-NO, reduced lesion sizes, removed amastigotes from lesions, livers, spleens, and lymph nodes, declined proliferation of amastigotes, hepatomegaly, and increased survival rate. However, TNG reduced spleen-NO and had no significant effects on spelenomegaly. The results show that TNG therapy reduced leishmaniasis and pathology in association with raised NO levels. TNG had some antiparasitic activity by reduction of positive smears from lesions, livers, spleens, and lymph nodes, which could emphasize the role of TNG to inhibit visceralization of L. major in target organs.     

四个鲫鱼品系线粒体DNA的限制性酶切分析

用差速离心和核酸酶消化法从红鲫 (C auratusredvar .)、湘鲫 [F1hybridsofredcruciancarp (♀ )×commoncarp (♂ ) ]、野鲫 (C auratusauratus)和白鲫 (C auratuscuvieri)的肝组织及白鲫的卵巢中提取和纯化线粒体DNA。用 9种内切酶 (EcoRⅠ、HindⅢ、PstⅠ、BglⅡ、BamHⅠ、XhoⅠ、XbaⅠ、SalⅠ和KpnⅠ )进行单酶酶解 ,经琼脂糖凝胶电泳分析 ,检测出PstⅠ、KpnⅠ和BglⅡ 3种酶在品系间存在限制性片段长度多态性 ,但并未检测出品系内的限制性片段长度多态性。计算出红鲫、湘鲫、白鲫和野鲫的mtDNA大小分别约为 16 19、 16 0 2、 16 6 0和 16 0 6kb。根据限制性酶切片段共享度 ,计算出 4个品系间的遗传距离 ,结果表明存在直接亲缘关系的红鲫与湘鲫之间的遗传差异最小 ,证实了红鲫与子代湘鲫之间mtDNA遵循母系遗传的特性。     

Performance of BALB/c and C57BL/6 mice under an incremental repeated acquisition of behavioral chains procedure

BALB/c (n = 8) and C57BL/6 (n = 11) male mice were trained under an incremental repeated acquisition (IRA) procedure using two distinct training procedures: forward and backward chaining. A new metric for assessing progress on the IRA procedure, progress quotient (PQ), quantified progress as the product of chain length and number of reinforcers earned during a session divided by the total number of reinforcers earned. BALB/c mice progressed further, had higher overall responding, earned more reinforcers, and acquired the response sequences faster than the C57BL/6 mice on both training procedures. There were only minimal effects of training procedure for either strain. The strain differences found between BALB/c and C57BL/6 mice confirm the importance of genetic background to behavior. C57BL/6 mice may be deficient in learning as compared with BALB/c mice but other contributing factors probably include overall responding, motivation, and more rapid satiation or habituation to sucrose reinforcement by the C57BL/6 mice. PQ is a sensitive and valid measure of progress for use in studies of mastery-based incremental repeated acquisition and BALB/c mice perform this challenging learning task better than do C57BL/6 mice.