小檗碱甲氧苄啶片中大肠杆菌的检验

大肠杆菌来自人和动物的粪便,国际上广泛用以作为卫生指标菌,通过对药品、食品、饮料、水源的常规细菌学检验,施行卫生监督。例如检出大肠杆菌时,证明已被粪便污染;并且有污染肠道致病菌或其他病原微生物的可能性。因此大肠杆菌被许多国家药典列入规定的控制菌之一。《中国药典》2000年版微生物限度标准规定:口服中西及外用药品每1g或每1mL不得检出大肠杆菌。小檗碱甲氧苄啶片收载于国家药品监督管理局、《国家药品标准》。其处方成分主要由盐酸黄连素100g,甲氧苄啶50g组成。甲氧苄啶是抗菌增效药。能增强磺胺类药及某些抗菌素的抗菌作用。…     

嗜酸乳杆菌DOMLa菌株thyA基因突变株的筛选

为构建以ｔｈｙＡ基因为选择标记的嗜酸乳杆菌染色体－质粒致死平衡系统。我们建立了嗜酸乳杆菌ｔｈｙＡ基因突变菌株的筛选方法。从含有三甲氧卞氨嘧啶（ＴＭＰ）２０μｇ／ｍｌ和胸腺嘧啶（ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ）５０μｇ／ｍｌ的改良ＭＲＳ培养基中筛选了１００株突变株,从中确定一株生物学性状稳定的菌株ＤＯＭＬａＦ８４作为进一步研究的受体侯选菌株。     

嗜酸乳杆菌DOMLa菌株thyA基因突变株的筛选

为构建以ｔｈｙ基因为选择标记的嗜酸乳杆菌染色体－质粒致死平衡系统。我们建立了嗜酸乳杆菌ｔｈｙ基因突变菌株的筛选方法。从含有三甲氧卞氨啶（ＴＭＰ）２０μｇ／ｍｌ和胸腺嘧啶（ｔｉｈｙｍｉｄｉｎｅ）５０μｇ／ｍｌ的改良ＭＲＳ培养基因中筛选了１００株突变株,从中确定一株生物学性状稳定的菌株ＤＯＭＬａＦ８４作为进一步研究的受体侯选菌株。     

新型甲氧苄啶耐药二氢叶酸还原酶DfrB7的生化分析与宿主菌耐药机制研究

[目的] 分析新型甲氧苄啶获得性耐药蛋白DfrB7的生化性质,探究其与B家族代表性的二氢叶酸还原酶（DHFR）对甲氧苄啶获得性耐药的生化基础。[方法] 构建系统进化树分析B家族DHFRs与新型DfrB7的进化关系。将dfr基因分别构建到pACYC184和pET15b（+）载体并转化到相应大肠杆菌中。使用微量肉汤稀释法确定克隆菌株对甲氧苄啶的耐药性。测定DHFRs使用NADPH作为质子供体催化二氢叶酸还原的酶活反应参数。通过等温滴定量热法测定甲氧苄啶的解离常数。[结果] 克隆到大肠杆菌中的新型dfrB7基因表现出对甲氧苄啶的高耐药表型。系统进化树确定了dfrB7编码B家族的DHFRs。检测并比较DfrB7和代表性DHFRs的酶活性质、抑制剂的亲和力,与染色体上DHFR相比,DfrB7与DfrB1均表现出显著降低的催化活性,通过生化实验证实B家族二氢叶酸还原酶对甲氧苄啶结合力极差。[结论] 新型dfrB7基因编码的DfrB7具有B家族二氢叶酸还原酶的普遍特征。B家族二氢叶酸还原酶赋予宿主菌对甲氧苄啶的获得性耐药与该酶对甲氧苄啶的低亲和力有关。     

腺苷对豚鼠蜗内直流电位的影响

用外淋巴灌流给药方法,观察了腺苷及其摄取抑制剂对嘧啶氨醇、以及腺苷受体拮抗剂茶碱对豚鼠蜗内直流电位（ＥＰ）的影响,并进行了耳蜗组织学观察。发现腺苷对ＥＰ有明显压抑作用,氧法观察负ＥＰ（Ｎ－ＥＰ）无明显改变;灌流双嘧啶氨醇,增加内源性腺苷,出现相似变化;灌流茶碱则使ＥＰ升高。本文讨论了腺苷对ＥＰ可能作用机制。     

氨甲酰磷酸不同合成途径在大肠杆菌中的比较

【背景】氨甲酰磷酸是生物合成代谢中精氨酸与嘧啶的重要前体物质,在工业微生物生产精氨酸与嘧啶及其衍生物中发挥关键作用。【目的】在大肠杆菌Escherichia coli BW25113中比较氨甲酰磷酸不同合成途径的催化效率。【方法】在大肠杆菌Escherichia coli BW25113中过表达鸟氨酸氨甲酰基转移酶(OTC)的基础上,分别过表达大肠杆菌自身的氨基甲酸激酶(CK)和氨甲酰磷酸合酶(CPSⅡ)并表征其反应效果。通过优化底物供应(调整底物浓度与引入L-谷氨酰胺合成酶)对CK与CPSⅡ的催化反应进行优化。【结果】在大肠杆菌中过表达OTC,建立细胞水平氨甲酰磷酸检测体系。在此基础上比较不同来源的CK,发现大肠杆菌来源的CK效果最好,50mmol/LNH4HCO3条件下全细胞催化9h得到2.95±0.15mmol/LL-瓜氨酸;过表达CPSⅡ时,50mmol/LL-谷氨酰胺催化9h得到3.16±0.29 mmol/L L-瓜氨酸。通过改变底物NH4HCO3浓度和引入外源L-谷氨酰胺合成酶(GS)等方式对CK与CPSⅡ的催化反应分别进行优化后,100 mmol/L NH4HCO3条件下,L-瓜氨酸浓度分别提高至4.67±0.55mmol/L和6.12±0.38mmol/L,且过表达GS后CPSⅡ途径可以利用NH3,不需要额外添加L-谷氨酰胺。【结论】引入L-谷氨酰胺合成酶后的CPSⅡ途径合成氨甲酰磷酸的能力优于CK途径,为精氨酸、嘧啶及其衍生物的合成提供了一种更加高效的策略。     

高效液相色谱法同时测定17种磺胺类药物的研究

建立了高效液相色谱-紫外法同时测定17种磺胺类药物的分析方法.主要研究了色谱柱、流动相配比对磺胺类药物分离的影响.通过研究,确定了最佳液相色谱分析条件.分离条件为:YMC ODS-C18柱;以2%乙酸溶液、乙腈和甲醇作为流动相,进行梯度洗脱;检测波长为270 nm.该方法的检测限为:磺胺胍和磺胺为2.0 ng/ml,磺胺二甲氧哒嗪、磺胺二甲基嘧啶、磺胺多辛、磺胺胍、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺甲基异噁唑、磺胺甲氧哒嗪、磺胺6-甲氧嘧啶、磺胺二甲基噁唑、磺胺、磺胺吡啶、磺胺喹噁啉、磺胺噻唑和磺胺异噁唑均为5.0 ng/ml.各组分的回收率在81.3%～97.9%,相对标准偏差在0.1%～4.3%.     

抗寄生虫药的作用机理

介绍了当前国内常用的抗原虫药氯喹伯氨喹啉、乙氨嘧啶、青蒿素、甲苯咪唑和抗蠕虫药丙硫咪唑、甲苯哒唑、左旋咪唑、噻嘧喧、吡喹酮及槟榔、南瓜子等的驱杀机理、服用剂量、疗效及副作用。     

大肠杆菌可溶性核糖核酸结构的研究 Ⅱ.可溶性核糖核酸的RNase Ⅰ降解产物的双向电泳层析图谱

(一)应用双向电泳层析图谱法分析了大肠杆菌S-RNA的RNase I降解产物。结果表明成堆排列的嘧啶核苷酸占核酸重量的17.1%;二核苷酸占12.7%。成堆排列的嘧啶约占嘧啶总量的45—60%左右,证明在S-RNA分子中核苷酸的分布是不均一的。(二)在76个核苷酸链中成堆排列的嘧啶核苷酸残基,—PypCpNp—,—PypUpNp—分别是13.7和5.5;在低聚核苷酸中,—GpCp—,—ApCp—,—GpUp—和—ApUp—分别是2.5,2.O,1.4和1.1。Pyp(?)Up占1.1。(三)核苷酸在S-RNA链中的排列形式不符合按无规排列的计算结果,说明核苷酸的排列具有一定程度的规律性。     

小分子功能化的金纳米粒子对革兰氏阴性多药耐药细菌的抗菌特性

[目的]研究大肠杆菌tRNA合成底物类似物4,6-二氨基-2-巯基嘧啶功能化的金纳米粒子(gold nanoparticles,AuNPs)对革兰氏阴性多药耐药细菌的抗菌特性.[方法]以4,6-二氨基-2-巯基嘧啶为表面配体合成AuNPs,采用肉汤稀释法测定其对4种临床分离的革兰氏阴性多药耐药细菌的最低抑菌浓度(MIC...     

几种除草剂对薇甘菊的防控效果

【背景】薇甘菊是一种外来入侵的恶性杂草,对当地农、林业造成了严重的危害。【方法】研究了草甘膦、氨氯吡啶酸、甲嘧磺隆、噻吩磺隆、苯磺隆、百草枯、五氟磺草胺、单嘧磺隆和单嘧磺脂9种除草剂对薇甘菊的化学防治,调查各药剂对薇甘菊的植株鲜重抑制率、叶片覆盖度和抑花率。【结果】氨氯吡啶酸25～100gai.hm-2、草甘膦1538～2306gai.hm-2、甲嘧磺隆100～400gai.hm-2、百草枯750、1125gai.hm-2、五氟磺草胺125gai.hm-2、噻吩磺隆11.25～33.75gai.hm-2和单嘧磺脂15～60gai.hm-2对薇甘菊营养生长控制效果较好。其中,百草枯短时间有效,草甘膦、五氟磺草胺、单嘧磺脂、单嘧磺隆、氨氯吡啶酸和甲嘧磺隆对薇甘菊的抑花率较高,苯磺隆和单嘧磺隆基本无效,且9种药剂对橡胶树均未表现出药害。【结论与意义】适当降低氨氯吡啶酸、甲嘧磺隆、草甘膦、五氟磺草胺、噻吩磺隆和单嘧磺脂的浓度可以保持薇甘菊营养生长而扼制种子蔓延。本研究首次发现五氟磺草胺、噻吩磺隆和单嘧磺脂对薇甘菊有良好的抑制效果。     

新喀里多尼亚弧菌CGJ02-2中四氢嘧啶合成基因簇ectABC的克隆及其功能鉴定

研究旨在克隆新的四氢嘧啶合成基因簇,并对其功能进行鉴定,为应用于四氢嘧啶的生产奠定基础。从新喀里多尼亚弧菌CGJ02-2中克隆获得四氢嘧啶合成基因簇ectABC,ectABC与表达载体pBAD连接后转化至大肠杆菌BW25113中,通过L-阿拉伯糖诱导表达。采用SDS-PAGE和液质联用鉴定重组表达蛋白,利用全细胞催化合成四氢嘧啶,通过高分辨质谱鉴定四氢嘧啶,并从天冬氨酸浓度、KCl浓度、温度和pH 4个方面优化催化条件。结果表明,来自新喀里多尼亚弧菌CGJ02-2基因组的ectABC大小为2 235 bp。SDS-PAGE显示表达产物中有3个重组蛋白产生,液质联用鉴定表明其分子量分别与ectA、ectB、ectC的理论分子量一致。高分辨质谱分析发现全细胞催化上清中有四氢嘧啶产生。优化后的最适全细胞催化条件为：天冬氨酸浓度100 mmol·L^-1,KCl浓度100 mmol·L^-1,温度30℃,pH 7.0,最优条件下产量为1.11 mg·mL^-1。研究从弧菌中克隆了四氢嘧啶合成基因簇ectABC,并在大肠杆菌BW2511...     

嘧啶核苷的研究进展

嘧啶核苷包括尿嘧啶核苷和胞嘧啶核苷,其在食品工业和医药行业上应用广泛。介绍了嘧啶核苷的用途、测定方法、生产方法等;根据代谢控制发酵原理,以尿苷生产菌的选育为例,详细介绍了嘧啶核苷生产菌的育种策略,并对嘧啶核苷生产菌的育种实例、育种展望进行了综述。     

Cobetia marina CICC10367渗透压冲击下羟基四氢嘧啶的合成及释放

摘要:【目的】筛选获得耐受渗透压冲击的羟基四氢嘧啶合成菌株,利用“细菌挤奶”工艺提高羟基四氢嘧啶的产率。【方法】从盐池中分离羟基四氢嘧啶合成菌株,并对其进行形态、生理生化及16S rDNA鉴定。考察了培养基及其NaCl浓度对羟基四氢嘧啶合成的影响,在优化的条件下利用“细菌挤奶”工艺制备羟基四氢嘧啶。【结果】筛选获得的一株羟基四氢嘧啶合成菌株,鉴定为Cobetia marina CICC10367（C. marina CICC10367）。NaCl浓度为90 g/L的、谷氨酸单钠为唯一碳氮源的培养基有利于羟     

23种农药对松毛虫赤眼蜂的急性毒性及安全性评价

采用管测药膜法测定了23种常用杀虫剂、杀菌剂和除草剂对松毛虫赤眼蜂的急性毒性,并参考各药剂的田间推荐剂量进行了安全性评价。结果表明,在供试的7种杀虫剂中,噻唑膦、噻虫胺、虫螨腈、硫双威、啶虫脒和烯啶虫胺对松毛虫赤眼蜂成蜂均表现为极高风险性,多杀菌素为高风险性,在田间放蜂期应避免喷洒上述杀虫剂。供试的10种杀菌剂和6种除草剂对松毛虫赤眼蜂的风险普遍低于杀虫剂。其中,仅杀菌剂代森锰锌和戊唑醇对松毛虫赤眼蜂表现为高风险性;杀菌剂乙嘧酚磺酸酯、氰霜唑、百菌清和除草剂氟唑磺隆、五氟磺草胺、草甘膦异丙胺盐具有中等风险性;杀菌剂甲基硫菌灵、苯醚甲环唑、啶氧菌酯、氟啶胺、粉唑醇和除草剂氯氟吡氧乙酸异辛酯、高效氟吡甲禾灵、甲基二磺隆具有低风险性,但在生产应用中仍需谨慎操作,以减轻对天敌昆虫的杀伤作用并保护生态平衡。     

头孢羟氨苄甲氧苄啶胶囊致固定性药疹1例

目前,头孢羟氨苄甲氧苄啶胶囊致固定性药疹尚未见有文献报道,作者2012年1月10日诊治1例,现报告如下。1临床资料患者,男,49岁,干部。因口腔、包皮及龟头红斑、糜烂,伴痒痛2天入院。患者2天前因咽痛、咳嗽在个体门诊诊治,诊断：上呼吸道感染。     

MS-551抗缺血性室性心律失常的实验研究

目的：研究新型Ⅲ类抗心律失常药物ＭＳ－５５１,即１,３二甲基－６「２－（Ｎ－２羟乙基－３－４硝苯丙氨基）乙氨基」－２,４（１Ｈ,３Ｈ）－盐酸嘧啶二酮（ＭＳ）,对麻醉犬心肌的电作用和对缺血性室性心律失常的防治效果。方法：测定用药（ＭＳ首剂０．５ｍｇ／ｋｇ于５ｍｉｎ内静推,维持量０．５ｍｇ／ｋｇ静滴３０ｍｉｎ）前后下沉犬心肌房室不应期,并观察ＭＳ「首剂０．３ｍｇ／ｋｇ于５ｍｉｎ内静推,维持量０．５ｍｇ     

渗透压冲击下中度嗜盐菌Halomonas sp. Y四氢嘧啶类相容性溶质的合成与释放

【背景】四氢嘧啶类物质在高温、冷冻和干燥等逆境条件下,对酶、蛋白质、核酸及整个细胞具有良好的保护作用,已经应用于酶制剂、生物医药及护肤品等相关领域。目前此类物质只能依赖中度嗜盐菌采用细菌泌乳工艺进行商业化生产,因此四氢嘧啶类高产菌株及其发酵技术的研究日益受到国内外研究者关注。【目的】分离获得高产合成四氢嘧啶类相容性溶质的中度嗜盐细菌,研究渗透压冲击对其胞内四氢嘧啶合成与释放的影响,探索细菌泌乳法制备四氢嘧啶的可行性。【方法】采用涂布平板法分离中度嗜盐菌,对分离菌株进行形态、生理生化和16S rRNA基因序列分析,鉴定其种属;采用高效液相色谱法(HPLC)和质谱法(MS)分析四氢嘧啶类物质,细菌泌乳法制备四氢嘧啶类物质。【结果】从盐池土样中分离到一株以四氢嘧啶类物质为主要相容性溶质的中度嗜盐菌Y,鉴定为盐单胞菌(Halomonas sp.)Y。盐单胞菌Y能在NaCl质量浓度为10-250 g/L的培养基中生长,最适生长的NaCl浓度为100 g/L;HPLC-MS测试结果证明盐单胞菌Y可同时合成四氢嘧啶和羟基四氢嘧啶2种相容性溶质,在最适生长的盐浓度下其合成量分别达175.5 mg/g和47.9 mg/g;在NaCl质量浓度为0-30 g/L的低渗溶液中胞内四氢嘧啶类物质经5 min即可达到最大释放率,而细菌泌乳工艺中最适合诱导四氢嘧啶释放的低渗溶液为质量浓度为10 g/L的NaCl溶液;采用细菌泌乳工艺制备四氢嘧啶,经连续11轮的高渗/低渗冲击,四氢嘧啶总合成量为6.0 g/L,总释放量为5.7 g/L,平均释放率为64.5%,底物转化率为128.9 mg/g。【结论】盐单胞菌Y是一株较高产合成四氢嘧啶类的中度嗜盐菌,能够耐受反复的渗透压冲击,采用细菌泌乳工艺显著提高了四氢嘧啶的制备效率。     

腺苷对豚鼠耳蜗功能的影响

腺苷作为一种神经调质,能抑制多种递质的释放,发挥负反馈调节作用,用外淋巴灌流给药方法,观察了腺苷及其摄取抑制剂双嘧啶氨醇、受体拮抗剂茶 对豚鼠复合听神经动作电位、微音器电位、蜗内直流电位的影响。     

脆弱拟杆菌β-内酰胺酶的理化及酶学特性

本文对临床分离的脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis),55的β-内酰胺进行了理化及酶学特性的研究。该酶为非诱导性,以头胞菌素酶活性为主．分子量为4 3000,等电点pl为4.95,酶反立最适pH为7.2,最适温变为37℃。该酶对各种底物的Km(μmol／L)值为：头孢噻吩185,头孢噻啶103、头孢唑琳200,头孢羟唑263．头孢氧哌羟苯唑830。对各种底物的相对水解率为头孢羟唑>头孢噻吩>头孢唑啉>头孢塞啶>头孢氧哌羟苯唑>青霉素>氧苄青霉素>头霉甲氧噻吩>羟羧氧酰胺菌素。该酶对羧苄青霉素、头霉甲氧噻吩棒酸青霉烷砜、对氯安息香酸汞及邻氯青霉素的抑制作用敏感。