富硒转白细胞介素2基因双歧杆菌对小鼠移植瘤H22的治疗作用

目的评价富硒和转白细胞介素2（IL2）基因双歧杆菌对小鼠移植瘤H22的抑制效果。方法通过电转导将含IL2质粒导入到长双歧杆菌（Bifidobacterium longum,B.longum）中,将转IL2基因双歧杆菌接种到添加了亚硒酸钠（Na2SeO3）的培养基中,利用微生物的富集及转化作用,形成富硒的含IL2基因质粒的双歧杆菌（Se-B.longum-IL2）。结果利用双歧杆菌的肿瘤厌氧区靶向性,通过荷肝癌H22的小鼠尾静脉注射Se-B.longum-IL2,取得了良好的抑瘤效果与荷肝癌小鼠生存延长效果。结论转IL2基因双歧杆菌和富硒联合后对小鼠肝癌有明显的基因治疗前景。     

双歧杆菌脂磷壁酸对化疗荷瘤小鼠免疫功能的影响

目的探讨双歧杆菌脂磷壁酸对5-氟尿嘧啶（5-FU）化疗肝癌H22荷瘤小鼠免疫的影响及其作用机制。方法双歧杆菌脂磷壁酸处理5-Fu化疗的H纶荷瘤Balb／c小鼠,MTT法检测NK细胞和CTL细胞杀伤活性;采用流式细胞仪检测荷瘤小鼠脾细胞中T亚群比例;用RT-PCR和Western Not方法分别检测荷瘤小鼠肿瘤组织Foxp3和TIM-3mRNA及蛋白的表达变化。结果荷瘤小鼠脾细胞中CD4^＋ CD25^＋Tmg比例高,并存在Foxp3和TIM-3 mRNA及蛋白的高表达,经双歧杆菌LTA和5．Fu处理后CD4^＋CD25^＋Tmg比例下降,Foxp3和TIM-3mRNA及蛋白表达水平也均呈下调趋势,但5-FU单独处理后的荷瘤小鼠脾细胞中CD4^＋细胞比例也减少,NK细胞和CTL杀伤率均降低,而双歧杆菌LTA处理后CD4^＋细胞比例,NK细胞和CTL杀伤率却明显增加。二者联合处理也能增加CD^＋细胞比例及NK细胞和CTL杀伤率。结论双歧杆菌脂磷壁酸联合5-FU可通过增强NK细胞和CTL杀伤能力,同时抑制TIM-3／TIM-3L途径,降低CD4^＋CD25^＋Tmg的免疫抑制活性,增强机体细胞免疫来提高化疗抗肿瘤效果,减轻化疗副作用,增强宿主对化疗的耐受性,从而提高抗肿瘤作用。     

5-氟尿嘧啶通过下调Wnt/β-catenin信号通路抑制骨髓基质细胞增殖

该研究探讨了5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil, 5-FU)抑制人骨髓基质细胞HS-5增殖的可能机制,寻找改善化疗药物对骨髓基质细胞损伤的治疗靶点。实验分3组,对照组:常规培养; 5-FU组:常规培养基础上加入25μg/mL 5-FU;氯化锂(LiCl)+5-FU组:10 mmol/L LiCl预处理细胞, 6 h后加入25μg/mL 5-FU,各组培养48 h。EdU检测HS-5细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期, Western blot检测β-catenin、Cyclin D1、C-myc蛋白表达, DCFH-DA荧光法检测细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平, Western blot检测缝隙连接蛋白Cx43表达。与对照组相比, 5-FU组HS-5细胞增殖能力下降,细胞阻滞在G0/G1期,胞内ROS水平显著升高,β-catenin、 Cyclin D1、C-myc、Cx43蛋白表达下调。与5-FU组相比, LiCl+5-FU组HS-5细胞增殖能力回升,细胞G1期阻滞减轻,胞内ROS水平降低,β-catenin、Cyclin D1、C-myc、Cx43蛋白表达上调。5-FU可通过下调Wnt/β-catenin信号通路抑制HS-5细胞增殖,其作用机制可能与5-FU诱导细胞发生氧化应激,下调细胞间隙连接蛋白Cx43表达有关。     

双歧杆菌脂磷壁酸与5-氟尿嘧啶体内联用对肿瘤细胞凋亡的影响

目的研究双歧杆菌脂磷壁酸与5-氟尿嘧啶联用诱导H22荷瘤小鼠肿瘤细胞凋亡的作用机制。方法双歧杆菌脂磷壁酸联合5-FU处理H22荷瘤Balb/c小鼠,计算抑瘤率,观察小鼠生存期;采用Real time-PCR和Western blot方法分别检测荷瘤小鼠肿瘤组织Bcl-2、Bax和Caspase-3 mRNA及蛋白的表达变化。结果双歧杆菌脂磷壁酸联合5-FU应用,与单独5-FU处理组比较,不仅抑瘤率明显提高（P〈0.01）,且荷瘤小鼠存活时间明显延长（P〈0.01）,肿瘤组织Bcl-2表达下降,Bax和Caspase-3表达升高（P〈0.05）。结论双歧杆菌脂磷壁酸联合5-FU可通过上调Bax和Caspase-3,下调Bcl-2,促进肿瘤细胞凋亡,从而发挥协同抗肿瘤作用。     

富硒双歧杆菌缓解5-FU导致的化疗性肠粘膜炎的药效学研究

通过腹腔注射5-FU建立小鼠肠黏膜炎模型,探讨富硒长双歧杆菌(Selenium-enriched Bifidobacterium longum,Se-B.longum)能否改善5-FU所致的小鼠肠黏膜炎。将健康BALB/c小鼠随机分为对照组、5-FU组和Se-B.longum/5-FU组,分别灌胃生理盐水、生理盐水和Se-B.longum(Se0.3 mg/kg BW,1×106bacteria/只)6 d,然后5-FU组和Se-B.longum/5-FU组小鼠均腹腔注射5-FU(250 mg/kg),观察小鼠腹泻及死亡情况,5 d后处死小鼠,计算体重变化、脏器指数及考察肠道组织变化;将健康BALB/c小鼠随机分为对照组、5-FU组和Se-B.longum/5-FU组,分别灌胃生理盐水、生理盐水和Se-B.longum(Se 0.3 mg/kg BW,1×106bacteria/只)6 d,然后5-FU组和Se-B.longum/5-FU组小鼠均腹腔注射5-FU(300 mg/kg),观察小鼠死亡情况,绘制生存曲线。Se-B.longum能缓解5-FU导致的正常小鼠的肠粘膜炎、降低小鼠死亡率。     

双歧杆菌脂磷壁酸对B16荷瘤小鼠NK细胞受体NKG2D及其配体的影响

目的探讨双歧杆菌脂磷壁酸（LTA）对黑色素瘤B16荷瘤小鼠NK细胞受体NKG2D及其配体的影响。方法将黑色素瘤B16细胞接种于C57BL／6小鼠皮下,待触及肿块后于荷瘤小鼠皮下注射双歧杆菌LTA。采用MTT、流式细胞术（FCM）、RT-PCR方法分别检测经双歧杆菌LTA处理后B16荷瘤小鼠NK细胞杀伤活性、NK细胞NKG2D受体蛋白表达以及肿瘤组织内Rae-1、H60 mRNA表达的变化。结果与对照组相比,经双歧杆菌LTA处理后,B16荷瘤小鼠的NK细胞杀伤活性增强（P〈0．05）,NK细胞受体NKG2D表达明显增加（P〈0．05）,肿瘤组织Rae-1、H60 mRNA表达上升（P〈0．05）,并具有浓度依赖性。结论双歧杆菌LTA能够增强B16荷瘤小鼠NK细胞的杀伤活性,其机制可能与上调NK细胞受体NKG2D的蛋白表达和肿瘤组织Rae-1、H60 mRNA的表达有关。     

双歧杆菌对食管癌细胞增殖的抑制作用及细胞周期的影响

目的探讨青春双歧杆菌对食管癌EC109细胞的增殖抑制作用及对细胞周期的影响。方法用MTT比色法测定EC109细胞活性,用流式细胞仪测定EC109细胞周期。结果青春双歧杆菌对EC109细胞具有显著的增殖抑制作用,并呈剂量和时间依赖性;经青春双歧杆菌处理后,EC109细胞周期发生变化：细胞分裂阻滞于G1期。结论青春双歧杆菌可通过影响细胞周期抑制食管癌EC109细胞的生长。     

双歧杆菌培养滤液中核酸的提取及对肠癌细胞cAMP,cGMP的影响

实验观察了对数期长双歧杆菌、青春双歧杆菌培养滤液中提取的总核酸对肠癌细胞ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ的影响。结果发现,双歧杆菌培养中滤液中存在大量核酸,将双歧杆菌培养滤中的核提取纯化作用于大肠癌细胞ＣＣＬ１８７,ｃＡＭＰ增高,ＣＧＭＰ没有变化,提示核酸可能作为细胞膜外的第一信使物质腺苷环化酶活性。     

长双歧杆菌BBMN68 可溶性蛋白质图谱的建立

为了建立长双歧杆菌BBMN68蛋白质图谱,采用双向电泳的方法建立了2-D参考图谱,通过MALDI-TOF/MS质谱鉴定和数据库搜索,鉴定到206个蛋白质(占长双歧杆菌BBMN68基因预测总蛋白的11.4%)。通过2-D胶分析,共有800±15(对数期)和800±20(稳定期)个蛋白质,其中282个蛋白点成功鉴定,代表206个不同的蛋白质。另外,分析了实验鉴定蛋白质的等电点和分子量,蛋白功能,密码子偏好性,蛋白质疏水性以及蛋白质细胞定位的分析。研究结果为长双歧杆菌的比较蛋白质组学研究提供了参考图谱和蛋白质基础信息数据。     

长双歧杆菌NQ-1501脂磷壁酸提取及免疫功能的研究

目的确定长双歧杆菌脂磷壁酸的最佳提取工艺及其免疫调节作用。方法通过对不同方法提取长双歧杆菌脂磷壁酸含量的测定及对昆明小鼠免疫球蛋白含量和T细胞、B细胞的增殖检测来探讨长双歧杆菌脂磷壁酸对小鼠细胞免疫的调节作用。结果采用10%TCA水浴(38℃、3 h)提取脂磷壁酸效果最好,LTA对体液免疫有一定的刺激作用,并且能够促进T细胞和B细胞的增殖。结论长双歧杆菌LTA具有免疫功能。     

DHA联合5-FU通过Rho/ROCK调控胃癌SGC7901细胞增殖、凋亡的体外实验

该文研究了二十二碳六烯酸(doeosahexaenoic acid,DHA)联合5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)对胃癌SGC7901细胞增殖、凋亡及其Rho家族基因表达的影响。实验分为对照组、DHA组、5-FU组和DHA联合5-FU组,用CCK-8法分别检测药物作用24、48、72 h后对人胃癌细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Real-time PCR和Western blot分别检测细胞RhoA、RhoC和ROCK1的mRNA水平和蛋白质水平。结果显示,5-FU单独作用时,随着作用时间延长和剂量加大,对胃癌细胞的增殖抑制作用增强,DHA单独作用时,低浓度抑制作用不明显,较高浓度时有显著抑制作用,40μg/mL DHA与4μg/mL 5-FU联合时有明显的增效作用。与对照组相比,40μg/mL DHA对细胞凋亡作用不明显,60μg/mL DHA主要引起细胞晚期凋亡,16μg/mL 5-FU主要引起细胞早期凋亡,两者联合时对细胞晚期凋亡有显著的增强作用。与对照组相比,DHA组及5-FU组RhoAmRNA水平下降,5-FU及联合组RhoC mRNA水平升高。与对照组相比,DHA组RhoA、RhoC蛋白质水平下降,5-FU组RhoA、ROCK1蛋白质水平下降,而联合组RhoA蛋白质水平下降显著。综上所述,DHA联合5-FU可增强对胃癌SGC7901细胞增殖的抑制作用,两者作用于细胞凋亡的不同时期且联合用药对晚期凋亡有增强作用。DHA与5-FU联合应用对细胞增殖和凋亡作用机制可能通过抑制RhoA蛋白表达起作用。     

大肠杆菌-长双歧杆菌穿梭载体的构建及PTEN在长双歧杆菌中的表达

长双歧杆菌可特异地定植于实体瘤低氧区,可用做肿瘤靶向性基因治疗的载体,而构建大肠杆菌-长双歧杆菌穿梭质粒则被证明是外源基因在长双歧杆菌中稳定表达的有效途径。为了构建能在长双歧杆菌中稳定表达外源基因的穿梭质粒并检测携带抑癌基因的工程菌对小鼠实体瘤的抑制效果,利用软件设计并合成了48条部分序列相互重叠的引物,通过PCR合成了长双歧杆菌质粒pMB1序列及长双歧杆菌HU启动子区序列,插入克隆载体pMD18-T,构建穿梭载体pMB-HU,该载体可在大肠杆菌DH5α及长双歧杆菌L17中稳定复制。PTEN基因编码具有蛋白质和酯类双重特异性磷酸酶活性的抑癌因子。将PTEN基因cDNA序列插入载体pMB-HU中HU启动子下游,构建重组质粒pMB-HU-PTEN,电击转化长双歧杆菌后,Western blot检测表明,表达产物中存在55kDa的PTEN蛋白特异条带。抑癌试验表明:与对照组相比,携带PTEN基因的长双歧杆菌可显著抑制小鼠实体瘤的生长。上述结果为以长双歧杆菌为载体的实体瘤靶向性基因治疗研究奠定了基础。     

双歧杆菌对EPEC和ETEC粘附的竞争抑制作用

观察双歧杆菌与肠上皮细胞系Lovo 细胞粘附后对肠致病性大肠杆菌(EPEC)及产毒性大肠杆菌(ETEC)粘附的竞争性抑制作用。发现双歧杆菌能完全抑制EPEC与ETEC的粘附,这种作用可能是由于双歧杆菌的占位性保护机制,在空间上阻止了病原菌与Lovo细胞的进一步接近     

双歧杆菌多元蛋白酸奶的免疫调节和抑瘤作用的研究

目的 :通过观察双歧杆菌多元蛋白酸奶对S1 80 荷瘤小鼠瘤组织、脾细胞代谢水平及吞噬功能的影响以及志愿者体内IL 6、TNF α、IFN γ生成的影响 ,探讨含青春双歧杆菌酸奶的免疫调节和抑瘤作用机制。方法 :采用含青春双歧杆菌酸奶灌胃S1 80 荷瘤小鼠 1ml/(天·只 ) ,连续 1 0d ,测量肿瘤大小 ,脾重、脾指数 ,计算抑瘤率 ,取脾细胞中性红法测脾细胞吞噬功能 ,MTT法测脾细胞增殖能力。自愿者口服酸奶 30 0ml(d·人 ) ,连续 1 5d ,用酶标试剂盒测量IL 6、TNF α、IFN γ三种细胞因子水平。结果 :含青春双歧杆菌酸奶对小鼠S1 80 肉瘤有明显的抑制作用 ;对志愿者IL 6、TNF α、IFN γ的生成有明显的促进作用。结论 :含青春双歧杆菌酸奶有免疫调节和抑瘤作用     

双歧杆菌脂磷壁酸和总DNA对小鼠免疫功能的影响

目的比较双歧杆菌2种组分即双歧杆菌脂磷壁酸（LTA）和总DNA的免疫调节作用。方法分别提取和制备双歧杆菌LTA和总DNA。采用淋巴细胞转化法和溶血空斑法分别研究它们对小鼠细胞和体液免疫的调节作用。结果与对照组比较,双歧杆菌和总DNA对T细胞和B细胞都有明显的刺激作用（P〈0．05或P〈0．01）,但是LTA的作用更强（P〈0．01）。结论双歧杆菌细胞壁的LTA和细胞核的总DNA均具有免疫调节作用,但前者效能优于后者。     

青春型双歧杆菌生态制品对小鼠肝癌抑制作用的初步研究

本文观察了青春型双歧杆菌(Bif.a)对小鼠肝癌移植瘤的抑制作用。结果发现,青春型双歧杆菌在瘤细胞移植前或移植后应用均显示了抑制肿瘤生长的作用。将青春型双歧杆菌注入肤腔可激活肤腔巨噬细胞,提高其吞噬功能和非特异性酯酶活性,而加入体外培养的小鼠肝癌细胞未显示有杀伤瘤细胞作用。认为青春型双歧杆菌的抑瘤作用可能是该菌刺激了宿主的免疫活性细胞杀伤了瘤细胞,而非直接杀伤作用。     

富硒猴头菇对小鼠肠道菌群的调节作用

目的以昆明小鼠为实验对象,观察富硒猴头菇对小鼠肠道菌群的影响。方法设高、中和低3个剂量组和1个普通猴头菇对照组,1个蒸馏水对照组,搜集粪便,用细菌16S rDNA荧光定量PCR法测定3大类肠道菌的数量。结果富硒猴头菇冻干粉灌胃后,中剂量组和高剂量组小鼠肠道中大肠埃希菌明显减少,低、中剂量组双歧杆菌增多,高剂量组乳酸菌增多,差异有统计学意义(P0.05)。且断药3 d后,中剂量组的大肠埃希菌、双歧杆菌数量,高剂量组的大肠埃希菌、乳酸菌数量与正常对照组相比差异仍有统计学意义。结论富硒猴头菇对小鼠肠道菌群有明显调节作用。     

双歧杆菌对大肠癌细胞ccL187cAMP,cGMP影响的实验研究

双歧杆菌对维持机体正常微生态平衡具有重要作用。本文研究了长双歧杆菌对大肠癌细胞ｃｃＬ１８７内第二信使ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ浓度的影响,对长双歧杆菌的对数期培养物分别进行下列处理：活菌、死菌、代谢产物作用ｃｃＬ１８７细胞２小时后分别收集ｃｃＬ１８７细胞内的ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ浓度。实验表明长双歧杆菌的不同状态及代谢产物对ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ产生显著影响,且存在时间依赖关系,三种处理作用ｃｃＬ１８７细胞内的ｃ     

当归多糖延缓5-氟尿嘧啶所致人骨髓基质细胞衰老

探讨5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)对人骨髓基质细胞(human bone marrow stromal cell,h BMSC)的损伤作用机制;当归多糖(angelica sinensis polysaccharides,ASP)对5-氟尿嘧啶损伤h BMSC的保护作用。采用CCK-8法测定人骨髓基质细胞株HS-5对不同浓度5-FU(0μg/mL,12.5μg/mL,25μg/mL,50μg/mL和100μg/mL)的敏感性。流式细胞术分析细胞周期;β-半乳糖苷酶染色检测衰老细胞;DCFH-DA荧光染色流式检测胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;酶学法检测谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)含量;流式细胞术分析γH2AX表达水平;ELISA检测8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxydeoxyguanosine,8-OHd G)的含量;5-FU 12.5~100μg/mL抑制HS-5增殖,抑制作用具有浓度依赖性和时间依赖性。5-FU组较与对照组相比细胞周期发生G1期阻滞,β-半乳糖苷酶染色阳性率升高;胞内ROS含量显著升高;细胞抗氧化能力降低;γH2AX和8-OHd G表达水平增高。ASP治疗组较5-FU组细胞相比细胞周期阻滞减少;衰老细胞比率降低;胞内ROS含量显著降低;细胞抗氧化能力升高;DNA损伤指标表达水平降低。5-FU可通过增强氧化应激诱发DNA损伤致骨髓基质细胞衰老;ASP对骨髓基质细胞损伤有保护作用,其机制可能与ASP降低损伤后骨髓基质细胞氧化应激减轻DNA损伤从而延缓骨髓基质细胞衰老有关。     

嗜酸乳杆菌的生长与富硒的动态关系研究

目的考察嗜酸乳杆菌在添加Na2SeO3的MRS培养基中的生长与富硒的关系和规律.方法以未添加Na2SeO3的MRS培养基的对照相比.结果加硒培养基中嗜酸乳杆菌生长较为缓慢,生长的延滞期增加,对数期缩短.结论处于延滞期的嗜酸乳杆菌细胞对硒的吸收作用比较强,富硒量迅速增加至最高达62.054 μl/g菌细胞.