牙龈卟啉菌特异性克隆探针的筛选

目的 从牙龈卟啉菌47A－1的基因文库中筛选出特异性片段,制备成特异性克隆探针,方法 将牙龈卟啉菌47A－1基因文库中的重组质粒大量扩增和纯化,采用地高辛标记法制备成探针,与口腔中14种常见细菌DNA进行杂交鉴定,检测其特异性,从中筛选出对牙龈叶卟啉菌具有特异性的克隆探针。结果 重组质粒pZJ1与牙龈卟啉菌47A－1杂交,而与其它细菌DNA均不杂交,包括牙龈卟啉菌ATCC33277和W83。结论 重组质粒pZJI可制备成高特异笥克隆探针。     

特异性的蛋白小分子荧光探针及其标记技术

活体蛋白荧光标记技术已经被广泛应用于蛋白质功能的可视化研究中。荧光蛋白常被用来研究蛋白质在生物体内的表达和定位,但由于它本身体积比较大,往往会影响目标蛋白的生物活性。特异性的小分子荧光探针以其体积小、膜透性好、背景噪音低以及制备方便的优点成为蛋白质研究的一个有力工具。本文将简要介绍近几年来各类特异性小分子蛋白荧光探针的研究进展。     

14个染色体区带特异性探针池的构建

本文运用人类染色体显微切割和ＰＣＲ技术,成功地构建了１４个染色体区带特异性探针池,并通过染色体原位杂交证明它们均分别来源于相应的被切割的染色体区带。     

植物特异性DNA探针的制备与应用研究进展

本文简述了植物特异性DNA探针的种类,介绍了特异性探针的制备方法,主要是特异性DNA序列的分离与筛选,总结了植物特异性DNA探针在种质鉴定、外源染色体识别、核型分析和基因组研究等方面的应用,提出了存在的问题与应用前景。 Abstract:In this paper,the types of specific DNA probes from plant were briefly described,and some methods of constructing specific probes were introduced,mainly were the isolation and screening of specific DNA sequences.The applications of the specific probes in the germplasm and foreign chromosome identifications,the karyotype and genome analyses were also summarized and discussed.     

基于马尔可夫链的基因芯片特异性探针选择方法

对于基因表达芯片,特异性探针的选择是探针设计的重要环节,由于基因组序列数据量极大,不可能对每个候选探针都在全序列中进行特异性评价并进行取舍。对此问题,提出了一种采用马尔可夫链概率准则的探针特异性选择方法,即把基因组序列看作马尔可夫链,任何探针序列的互补序列作为它的一个子序列,都具有一定的出现概率,概率越小,越可能具有特异性。据此,选择其中概率最小的N个候选探针,能够大大减少进行特异性评价的探针数量,缩短探针设计的计算时间。对实际数据的测试结果表明,该方法选择的探针具有很高的特异性。     

14个染色体区特异性探针池的构建

本文运用人类染色体显微切割和ＰＣＲ技术,成功地构建了１４个染色体区带专特性探针池,并通过染色体原位杂交证明它们均分别来源于相应的被切割的染色体区带。     

新型肿瘤特异性核医学分子探针及应用展望

<正>近年来发展非常迅速的分子影像技术已经将肿瘤的影像学诊断提高到肿瘤细胞或组织特异性表达分子的水平,有助于肿瘤的早诊、早治和个体化治疗。从而有效降低肿瘤死亡率。在各种分子影像模态当中,核医学的PET和sPECT最先进入了临床应用。核医学分子探针是核医学分子影像的核心所在。与最常规使用的~(18)FDG相比,文章将主要介绍新型特异性核医学分子探针在肿瘤诊断、疗效评估及个体化治疗方面的应用。     

药物代谢酶特异性探针底物的研发与应用进展

人体内分布数百种结构多样、功能各异的药物代谢酶,其表达和功能易受遗传和环境因素的影响,导致其在不同人种、个体及组织 中的分布都不尽相同。特异性探针底物作为药物代谢酶活性表征的关键工具分子,其在新药发现、药-药相互作用评价、临床药理学及精准 医学检测等领域具有重要的应用价值。围绕人体分布的重要药物代谢酶,综述其特异性探针底物的设计研发及生物医学应用进展,以期为 药物代谢酶的精准检测及相关应用研究提供参考。     

人巨细胞病毒的分子克隆及其特异性DNA探针的制备

从人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）培养物中提取ＨＣＭＶ并抽提其ＤＮＡ,经限制性内切酶ＢａｍＨＩ完全消化后,与质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ－ＳＫ重组建立了ＨＣＭＶ的ＤＮＡ文库,从此文库。中随机筛选出两个重组质粒（ｐＣＭＶ－１和ｐＣＭＶ－２）,用ＢａｍＨＩ分析证明其中所含的病毒ＤＮＡ片段的大小分别为１．０ｋｂ和７．５ｋｂ,将这两种质粒大量扩增纯化后,用光生物素进行标记作为探针,证明其只与ＨＣＭＶ反应,与正常人细胞ＤＮＡ及Ⅰ型和Ⅱ型单纯疤疹病毒ＤＮＡ无交叉反应。     

判断基因中点突变使用的寡聚核苷酸探针

本文简明扼要地介绍了人工合成寡聚核苷酸探针的设计原则,以及用 ³²P标记等方法。同时还从理论上阐述了19聚体探针在生物实验使用中的合理性,并强调在检测基因的点突变时,设计人工合成的寡聚核苷酸探针应将点突变位点置于探针序列的中间为宜。在选择序列时,要注意避免发生G-T错配,这样有利于鉴别基因的点突变。     

单纯疱疹病毒通用及Ⅱ型特异性DNA探针的制备及应用研究

单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）Ⅰ型及Ⅱ型之间有很多共同抗原,能引起血清学交叉反应,鉴别诊断比较困难。本实验利用重组ＤＮＡ技术,将部分ＨＳＶ－２ＤＮＡ的ＰｓｔＩ片段克隆到载体质粒ＰＳＫ中,并筛选出两个重组质粒（Ｐ和Ｐ）只与ＨＳＶ－２反应,与ＨＳＶ－１不反应,这两个重组质粒中所含的ＨＳＶ－２ＤＮＡ片段大小分别是３．１和４．３ｋｂ,另外,还筛选了一个重组质粒（ＰＨＳＶ２－１,含５．８ｋｂＨＳＶ－２ＤＮＡ片段）与ＨＳＶ－１和ＨＳＶ－２均反应。将４．３ｋｂ的片段用光生物素标记后作为探针检测了１５９份人阴道拭子,其中２３份样品呈阳性反应,其余均为阴性,从２３份阳性样品中挑选１２价涂片用间接荧光抗体法检测也都呈阳性反应,随机挑选的几份杂交反应阴性样品在间接荧光试验中也是阴性。本实验制备的ＨＳＶ通用及ＨＳＶ－２型特异性探针将比常规的血清学方法诊断和鉴别ＨＳＶ－１和ＨＳＶ－２感染更为可靠。     

生物素标记贾第虫全基因组DNA探针的制备及其特异性敏感性测定

用生物素标记的贾第虫全基因组ＤＮＡ探针,在斑点杂交试验中显示高度的敏感性和特异性。用它可检出１０ｎｇ贾第虫ＤＡ,１０＾３个贾第虫滋养体或包囊,且不与阴道毛滴虫、溶组织内阿米巴、弓形虫和ＢＡＢＬ／ｃ小鼠肝细胞ＤＮＡ,以及贾第虫患者粪便上清液发生交叉反应。本探针可用于贾第虫病病原体检测和虫株鉴定研究。     

高特异性HER2/CEP17双色探针的制备与临床应用

目的:探讨高特异性HER2/CEP17双色探针在浸润性乳腺癌中的诊断价值。方法:制备高特异性HER2/CEP17双色探针,通过外周血细胞核型滴片检测该探针的特异性,同时用传统探针和新制备探针对425例浸润性乳腺癌患者进行FISH检测,并对结果进行对比分析,评估高特异性HER2/CEP17探针在浸润性乳腺癌中的临床诊断价值。结果:染色体定位显示,传统的CEP17探针在17号染色体着丝粒处杂交信号明亮,在Y染色体着丝粒处可见一个较17号染色体略弱但肉眼可辨的杂交信号点;而新制备CEP17探针在17号染色体着丝粒处具有明亮的杂交信号,在其余染色体中未见明显的杂交信号点,表明该探针具有较高的特异性。临床样本检测中,新制备探针与传统探针对浸润性乳腺癌HER2基因扩增的检测无统计学差异(P=0.500,χ~2=0.5),然而,对于CEP17杂信号,统计结果表明新制备探针明显少于传统探针(P=0.013,χ~2=5.29)。结论:新方法制备HER2/CEP17探针具有较高的特异性,相比于传统探针更具有临床应用优势。     

开发使用DNA探针结合粒子的检体DNA浓缩法

日本合成橡胶公司和日本罗氏公司小组使用结合了DNA探针的胶乳粒子,开发了简便且高灵敏地提取、浓缩检体中的病原菌和病毒DNA的技术。与神奈川县卫生研究所病毒部部长今井光信等合作使用这项技术用AIDS患者的血液进行检测实验。结果表明,比用普通聚合酶链反应法(PCR)的检测灵敏度高数十倍。 PCR反应是用基因扩增法扩增检测对象——基因高效率地检测的方法。但是,PCR反应的试剂量限于数十微升,所以其界限为数十微升。一旦不含检测对象就检测不出来。如果使用日本合成橡胶公司和日本罗氏开发的技术,在PCR前就能浓缩标记DNA(约330倍),据说在1ml血液中有1个分子,使用PCR     

人结核分枝杆菌特异性核酸探针制备及结核病PCR检测技术的初步临床应用

采用人结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis TB)染色体DNA为模板,选择位于插入片段IS6110中884～865和568～588碱基对处的两个片段为引物,扩增出317bp的特异性片段．将其克隆进pUCl9载体。酶切图谱分析和DNA序列测定证实为目的片段。该片段经DIG标记,分别与11种分枝杆菌DNA进行Southern杂交,结果证明只与人型复合分枝杆菌发生杂交反应。利用该对引物建立的PcR检测拄术对74份结核病痰液标本进行检测,并与临床细菌快速培养结果相比较,发现48份临床阳性均为PcR阳性,在26份临床阴性标本中亦发现11份PCR检测阳性。将标本PCR产物与克隆探针进行杂交,显示两者结果完全一致。说明PCR检测体系结果可靠,其灵敏度明显高于目前临床所采用的方法,可作为一种常规技术用于结核病的临床检测。     

利用锌特异性探针HL~1示踪植物细胞外Zn~(2+)的分布

以拟南芥(Arabidopsis thaliana)和谷子(Setaria italic)为研究材料,利用锌特异性探针HL1,使用荧光分光光度仪、等温滴定热量测定仪(ITC200)和倒置荧光显微镜等仪器探究了该化学探针的特性以及植物细胞外游离Zn~(2+)的分布。结果表明,当HL1与不同元素溶液混合时,只与Zn~(2+)特异性结合,在紫外光(UV)激发下,发射出波长为500 nm的蓝色荧光;生成物的平衡解离常数KD=7.02×10–4 mol·L–1,具有很好的稳定性。拟南芥叶片中的Zn~(2+)分布于细胞间隙及叶表皮毛的外周和表层,且叶表皮毛的荧光强度具有明显的浓度依赖性;谷子叶片中的Zn~(2+)分布在细胞间隙以及维管组织。拟南芥根中的Zn~(2+)分布于根的伸长区,且荧光强度也明显地表现出与浓度相关。由此推断,根伸长区与Zn~(2+)运输有关,叶的维管组织是植物细胞外运输Zn~(2+)的主要途径,细胞间隙和叶表皮毛是植物储存Zn~(2+)的主要区域。HL1适用于检测细胞外Zn~(2+)的分布。     

人结核分枝杆菌特异性核酸探针制备及结核病PCR检测技术的初步临…

采用人结核分枝杆菌染色体ＤＮＡ为模板,选择位于插入片段ＩＳ６１１０中８８４￣８６５和５６８￣５８８碱基对处的两个片段为引物,扩增出３１７ｂｐ的特异性片段,将共克隆进ｐＵＣ１９载体,酶切酶谱分析和ＤＮＡ序列测定证实为目的片段。     

肠出血性大肠杆菌(O157：H7)的特异性荧光探针检测方法的建立

目的:建立一种real-time PCR,快速准确检测肠出血性大肠杆菌O157:H7。方法:以肠出血性大肠杆菌0157:H7 rfbE为待检靶基因,设计一对引物和一条Taqman探针,探针5’端用FAM基团标记,3’端用TAMRA标记。通过重组质粒的构建,建立并优化了大肠杆菌0157:H7的荧光定量PCR检测方法。结果:在人工污染样本无需富集的情况下,检测的最低DNA浓度是10拷贝/反应(3CFU/mL);特异性检测实验中,0157菌株检测结果均为rfbE阳性,而非0157:H7菌株检测结果均为阴性;重复性实验中,批内、批间变异系数均小于3%。结论:实验结果显示此荧光定量PCR方法特异性、灵敏度高,重复性好,可对分离的可疑大肠杆菌0157:H7菌株进行快速鉴定。     

两种基因编码的探针特异性检测小鼠脑5-HT信号的比较

摘要 目的：五羟色胺（5-HT）对中枢神经系统发挥着重要的调控作用,其功能失调与许多精神类疾病密切相关,因此开发能实时灵敏检测5-HT的工具对研究此类疾病及研发靶向药物至关重要。最近新开发的iSeroSnFR和GRAB_5-HT1.0两类5-HT荧光探针,具有细胞特异性、反应灵敏以及高时空分辨率等显著优势,已经成为深入探究5-HT作用机制的有力工具。本研究旨在探究荧光探针iSeroSnFR和GRAB_5-HT1.0哪种能更有效地检测5-HT递质释放及动态变化,从而为后续优化5-HT荧光探针和利用这一有力工具解析神经疾病中的递质异常提供新思路。方法：将iSeroSnFR或GRAB_5-HT1.0探针的基因序列插入到Sindbis病毒表达载体,然后把病毒分别转染到培养的小鼠离体脑片的海马CA1区,比较两种探针在神经元中的表达差异;并检测其对外源性5-HT药物诱导产生的荧光反应。另外,将上述病毒转染到急性小鼠脑片中缝核（DRN）区,给与电刺激检测两种探针响应内源5-HT释放的荧光信号差异。结果：在转染iSeroSnFR的海马CA1区神经元中均有荧光表达,但细胞边界不清晰;而转染了GRAB_5-HT1.0的神经元细胞膜上表达有强烈的绿色荧光信号。用1 μM 5-HT处理培养的小鼠脑片海马CA1神经元时,iSeroSnFR探针没有明显的荧光强度变化;而GRAB_5-HT1.0探针产生的荧光强度显著增强;用1 mM 5-HT处理时,iSeroSnFR探针产生一定强度的荧光反应,但响应幅度弱于GRAB_5-HT1.0探针。另外,利用上述病毒转染急性小鼠脑片DRN区,通过电刺激诱导内源性5-HT释放,发现仅在表达GRAB_5-HT1.0探针的DRN神经元中观察到显著增强的荧光反应;而iSeroSnFR探针几乎未产生明显荧光变化。结论：在小鼠脑中,GRAB_5-HT1.0荧光探针对外源性及内源性的5-HT的亲和力更高、灵敏度更强。