核糖核酸一级结构微量分析方法的研究——Ⅱ.萤光试剂及其核苷腙的一些性质

使用化学降解核苷腙的方法证明核苷二醛与DNS-Gly-NHNH_2的结合为1:1。观察了DNS-Gly-NHNH_2及其核苷腙的聚酰胺薄板层析及电泳行为;测定了在水、乙醇、二氧六环中的紫外吸收光谱与克分子消光系数以及萤光光谱和量子产率。DNS-Gly-NHNH_2及其核苷腙的萤光强度随溶剂极性降低而增大。在二氧六环中它们的量子产率为0.4左右。     

核糖核酸一级结构微量分析方法的研究 Ⅲ.萤光标记法测定寡核糖核苷酸3′端及核苷酸顺序

本文报导了一种新的萤光试剂DNS-Gly-NHNH_2在寡核糖核苷酸一级结构分析中的应用。寡核糖核苷酸3′端经高碘酸氧化后能与萤光试剂DNS-Gly-NHNH_2反应,经红酵母RNase酶解后得到DNS-Gly-核苷腙。通过聚酰胺薄板层析鉴定DNS-Gly-核苷腙,从而能测定寡核糖核苷酸3′端核苷。另外,运用β消去循环,对寡核糖核苷酸进行化学逐步降解,在此基础上结合上述萤光标记测定寡核糖核苷酸3′端技术,对化学合成片段UpCpCpA进行了顺序分析。片段用量为0.16A_(260)单位。这一方法较紫外吸收法灵敏,易在一般实验室中使用。     

核糖核酸一级结构微量分析方法的研究 Ⅲ.萤光标记法测定寡核糖核苷酸3′端及核苷酸顺序

本文报导了一种新的萤光试剂DNS-GIy-NHNH_2在寡核糖核苷酸一级结构分析中的应用。寡核糖核苷酸3′端经高碘酸氧化后能与萤光试剂DNS-Gly-NHNH_2反应,经红酵母RNase 酶解后得到DNS-Gly-核苷腙。通过聚酰胺薄板层析鉴定DNS-Gly-核苷腙,从而能测定寡核糖核苷酸3′端核苷。另外,运用β消去循环,对寡核糖核苷酸进行化学逐步降解,在此基础上结合上述萤光标记测定寡核糖核苷酸3′端技术,对化学合成片段UpCpCpA 进行了顺序分析。片段用量为0.16A~(260)单位。这一方法较紫外吸收法灵敏,易在一般实验室中使用。     

核糖核酸一级结构微量分析方法的研究——Ⅰ.萤光试剂的制备和核苷二醛、5′-次甲基核苷二醛的萤光标记

本文报告了两种萤光试剂的制备方法并用一种萤光试剂标记了四种核苷二醛和四种5'-次甲基核苷二醛。萤光试剂Ⅰ,1-二甲氨基萘-5-磺酰-甘氨酰肼(DNS-Dly-NHNH_2)的制备方法:1-二甲氨基萘-5-磺酰氯(DNS-Cl)与甘氨酸乙酯(Gly-OC_2H_5)反应,得1-二甲氨基萘-5-磺酰-甘氮酸乙酯(DNS-Gly-OC_2H_5),DNS-Gly-OC_2H_5经肼解得DNS-Gly-NHNH_2。萤光试剂Ⅱ,1-二甲氨基萘-5-磺酰肼(DNS-NHNH_2)的制备方法:1-二甲氨基萘-5-磺酰氯直接肼解得1-二甲氨基萘-5-磺酰肼(DNS-NHNH_2)。DNS-Gly-NHNH_2与腺苷二醛,鸟苷二醛,胞苷二醛以及尿苷二醛反应,分别得到四种萤光标记的核苷腙:DNS-Gly-_(HO)A_R,DNS-Gly-_(RO)G_R,DNS-Gly-_(HO)C_R,以及DNS-Gly-_(HO)U_R。DNS-Gly-NHNH_2与5'-次甲基腺苷二醛,5'-次甲基鸟苷二醛,5'-次甲基胞苷二醛以及5'-次甲基尿苷二醛反应,分别得到四种萤光标记的5'-次甲基核苷腙:DNS-Gly-_(H_2)A_R,DNS-Gly-_(H_2)G_R,DNS-Gly-_(H_2)C_R以及DNS-Gly—_(H_2)U_R。     

核糖核酸一级结构微量分析方法的研究——Ⅰ.萤光试剂的制备和核苷二醛、5′-次甲基核苷二醛的萤光标记

本文报告了两种萤光试剂的制备方法并用一种萤光试剂标记了四种核苷二醛和四种5′-次甲基核苷二醛。萤光试剂Ⅰ,1-二甲氨基萘-5-磺酰-甘氨酰肼(DNS-Gly-NHNH_2)的制备方法:1-二甲氨基萘-5-磺酰氯(DNS-Cl)与甘氨酸乙酯(Gly-OC_2H_5)反应,得1-二甲氨基萘-5-磺酰-甘氨酸乙酯(DNS-Gly-OC_2H_5),DNS-Gly-OC_2H_5经肼解得DNS-Gly-NHNH_2。萤光试剂Ⅱ,1-二甲氨基萘-5-磺酰肼(DNs-NHNH_2)的制备方法:1-二甲氨基萘-5-磺酰氯直接肼解得1-二甲氨基萘-5-磺酰肼(DNs-NHNH_2)。DNs-GIy-NHNH_2与腺苷二醛,鸟苷二醛,胞苷二醛以及尿苷二醛反应,分别得到四种萤光标记的核苷腙:DNs-GlY-_(Ho)A_R,DNS-Gly-_(Ho)G_R,DNs-Gly-_(Ho)C_R,以及DNS-Gly-_(HO)U_R。DNS-Gly-NHNH_2与5′-次甲基腺苷二醛,5′-次甲基鸟苷二醛,5′-次甲基胞苷二醛以及5′-次甲基苷二醛反应,分别得到四种萤光标记的5′-次甲基核苷腙:DNS-Gly-_[H(?)]A_R,DNS-Gly-_[H(?)]G_R,DNS-Gly-_[H(?)]C_R 以及DNS-Gly-_[H(?)]U_R。     

过碘酸氧化的腺嘌呤核苷及其衍生物与苯肼纤维素作用的观察

过碘酸氧化磷位二羟基的性质会用于区分脱氧核糖核苷及核糖核苷,并用以确证核糖核苷键的立体构型。Khym及Cohn用过碘酸氧化核苷及核苷酸所形成相应的二醛与苯肼作用生成苯腙。本文探索了过碘酸氧化的腺嘌呤核苷及其衍生物与苯肼纤维素的作用情况,发现二者颇有差异。     

3种根皮素酰腙衍生物的合成及抑制酪氨酸酶和抗氧化活性

以根皮素为母体,设计合成了三种新的酰腙类化合物1～3:根皮素苯甲酰腙(1)、根皮素2-羟基苯甲酰基腙(2)和根皮素4-羟基苯甲酰基腙(3).采用UV、IR、1H NMR、13C NMR及MS等手段对产物进行结构表征;测定了根皮素及其酰基腙的抑制酪氨酸酶的能力、清除DPPH自由基能力和清除ABTS自由基能力.结果表明化合物2(IC50 =13.4±1.1 μM)和化合物3(IC50=19.1±0.82μM)抑制酪氨酸酶能力比母体根皮素(IC50=23.7±1.8 μM)有了明显提高;化合物1～3清除DPPH和ABTS自由基的能力均得到显著提高;通过构效关系探讨,表明化合物芳酰基苯环上羟基数目和位置在抑制酪氨酸酶和清除自由基能力中发挥着重要作用.     

三尖杉酯碱抑制脱氧核糖核酸生物合成机制的研究——Ⅰ.对DNA模板及其合成代谢的影响

本文应用吸收光谱移动法、萤光光谱移动法、~(3)H-药物与DNA 结合实验以及~(3)H-胸腺嘧啶核苷连续标记技术研究了三尖杉酯碱抑制L_(1210)细胞DNA 生物合成的机制。结果表明,DNA合成的受抑可能是由于该药干扰其代谢过程而非直接损伤其模板所致。     

萤光抗体技术非特异染色因素去除方法的研究

近年来萤光抗体技术有了很多改进,但萤光血清的非特异染色问题,仍未获得满意的效果。本文报告消除异硫氰酸萤光黄标记抗体的非特异性萤光染色的试验结果。一、萤光血清的制备及染色法 1.免疫血清直接染色法免疫血清甲型流感病毒PR8株,用豚鼠血球吸附游离法提纯病毒,心脏注射免疫豚鼠（400-500克）,每只1毫升,2周后取血测效价为1:640-1:2560.（血球凝集抑制试验） 间接染色法免疫血清取正常豚鼠血清,用10%甲明矾沉淀,沉淀物用生理盐水洗两次,然后溶解在适量的生理盐水中,肌肉注射家免,每周1次,共两次,第二次注射后两周取血测效价为I:16000。（沉淀试验） 2.提取球蛋白用半饱和硫酸铵法提取球蛋白。一般总蛋白量为3.5%-5%。     

疾病干预的新靶点:嘌呤与嘧啶受体

内源性核苷、核苷酸通过嘌呤与嘧啶受体(P受体),参与机体组织器官多种功能的调节。在肿瘤、细胞凋亡、局部缺血、伤口愈合、骨质疏松、药物毒性、炎症及痛觉等病理状态下,P受体的内源性配体核苷与核苷酸发挥保护作用,P1、P2受体及其受体亚型的选择性激动剂和桔抗剂具有宽广的临床应用前景。     

根皮素异烟酰基腙的合成、表征及抗氧化活性研究

本文旨在提高根皮素的生物活性,以其作为母体通过与异烟肼结合引入C=NNH活性基团,合成了一种新型酰腙类化合物。采用UV,IR,1H NMR,13C NMR及元素分析等手段对产物进行结构表征,并测定了根皮素及其异烟酰基腙的还原能力,清除DPPH自由基及清除ABTS自由基能力。结果表明根皮素异烟酰基腙的抗氧化活性显著优于根皮素。     

生物膜能量偶联ATP酶的比较研究——Ⅰ.鼠肝线粒体内膜与ATP酶(F_1)的人工重组及ANS萤光探针与ATP酶的结合

本文报导了大鼠肝线粒体内膜ATP酶的析离和重组,以及膜对ATP酶的结构和功能的影响。用(1)胰蛋白酶-尿素、(2)硅钨酸盐和(3)枯草杆菌蛋白酶三种方法分别制备的去ATP酶(F_1)的线粒体内膜与可溶性的F_1重组后,完全恢复或部分恢复到天然线粒体内膜的ATP酶活力水平。寡霉素敏感性测定、ANS结合的发射萤光光谱测定、电镜负染标本观察和低温处理试验等都一致证明,ATP酶与膜重组后表现了一系列与天然膜相似的性质。ANS萤光探针与线粒体内膜结合的萤光增强效应主要在于ANS与ATP酶(F_1)的结合并与F_1的分子构象有密切关系。经胰蛋白酶-尿素处理去掉F_1的线粒体内膜基本上丧失了ANS的萤光增强效应。可溶性F_1经0℃处理2小时后,丧失酶水解活力的84%和ANS萤光增强效应的96.4%。F_1与膜结合后,则表现了对0℃低温的稳定性。结果提示,ANS可能与ATP酶分子的疏水微区相结合;ATP酶分子疏水结构的存在对于表现酶的水解活力和ANS的萤光增强效应是必要的条件;低温处理破坏了酶分子内的疏水结构;膜与ATP酶结合则有稳定酶分子的疏水结构和分子构象的作用。     

凝胶上测定糖蛋白的荧光标记法

凝胶上测定糖蛋白及含糖酶是研究它们的性质和纯度的一种有效的方法。文献中报告的方法,有的不够灵敏,有的则非常麻烦。我们约在20年以前合成了一种荧光酰肼:dansyl glycyl hydrazide(DNS-Gly-NHNH_2),用以     

嘌呤核苷及其衍生物的代谢工程

嘌呤核苷及其衍生物被广泛应用于食品和医药领域。利用诱变筛选技术可以获得嘌呤核苷类产品的工业生产菌株,但往往耗时,效率低,而且获得的某些高产菌株还存在不稳定的缺陷。菌株代谢调控与生理生化的研究为代谢工程优化嘌呤核苷类产品的合成提供了理论基础,利用代谢工程改造菌株合成嘌呤核苷也引起了研究人员的关注。系统地介绍了微生物嘌呤生物合成途径及其调控机制,综述了嘌呤核苷类产品及其衍生物的代谢工程研究进展,最后讨论了利用代谢工程改造菌株合成这些产品面临的问题及今后的研究方向。     

超氧自由基与嘧啶碱基及其核苷反应的ESR研究

用自旋捕集技术和ＥＳＲ方法,以ＭＮＰ为捕集剂,研究了紫外线辐照核黄素产生超氧自由基等活性氧与嘧啶碱基及其核苷的反应,确定了尿嘧啶,胞嘧啶和胸腺嘧啶及其核苷所产生的自旋加合物自由基的类别,讨论了自由基的形成机制,揭示了超氧自由基与嘧啶碱基及其核苷的反应是不是直接进行的,而是通过羟基自由基来实现的。     

0.7％氟蚁腙饵剂对红火蚁的毒杀效果及行为影响

本文评价了0.7%氟蚁腙饵剂对红火蚁Solenopsis invicta Buren中型工蚁毒杀效果、聚集率、抓附能力和行走能力的影响。试验结果表明0.7%氟蚁腙饵剂对红火蚁具有较好的毒杀效果,并能有效降低红火蚁的聚集、抓附和行走能力。0.7%氟蚁腙饵剂处理0、1、2和3 d后,工蚁死亡率分别为7.50%、48.06%、86.04%和96.74%;聚集率分别为88.52%、83.89%、77.79%和0;抓附率分别为64.32%、33.88%、27.30%和0;正常行走率为86.30%、79.72%、61.27%和55.56%,行走速率分别为1.83 cm/s、1.50 cm/s、0.56 cm/s和0.27 cm/s。与饲喂氟蚁腙饵剂与空白饵料或糖水混合物相比,单独饲喂氟蚁腙饵剂,短时间内会产生更高的死亡率,但最终死亡率无显著性差异。本研究可为氟蚁腙饵剂控制红火蚁提供可行性参考,为氟蚁腙科学合理防治红火蚁技术提供数据支持。     

Sp1真核表达载体的构建及对USP22基因转录活性的影响

目的 克隆人sp1基因,构建真核表细胞达载体pVAX-Sp1,研究其对USP22基因转录活性的影响.方法 Trizol试剂快速提取人肝癌细胞株HepG2总RNA,经RT-PCR扩增Sp1基因序列,与pVAX1真核表达载体连接;测序、酶切鉴定重组载体;pVAX1-Sp1与含USP22启动子的萤光素酶报告质粒共转染HepG2细胞,双萤光素酶报告系统检测萤光素酶活性表达.结果 测序及酶切结果显示重组质粒pVAX1-Sp1构建成功;高表达sp1可使USP22启动子的转录活性降低（P＜0.01）.结论 成功构建了sp1真核表达质粒,sp1对USP22启动子具有转录抑制作用.     

尖吻蝮蛇(Agkistrodon acutus)蛇毒出血毒素Ⅰ的萤光光谱、萤光淬灭以及和出血活性的关系

根据徐洵等人的分离方法,我们从皖南山区尖吻蝮蛇蛇毒中得到出血毒素Ⅰ(AaH-1),它的萤光激发峰在284nm,发射峰在350nm,表现出Trp残基的萤光光谱。AaH-1的萤光强度和峰位随pH值的升高而增强且红移,在pH5～6萤光强度出现跃增,活性从无到有。pH7～9萤光强度稳定,出血活性的变化规律与此相似。升温到50℃以上其萤光强度急骤下降,并失活。一定浓度的SDS,EDTA均使AaH-1的萤光强度下降,出血活性也减弱。表明能改变AaH-1的pH环境、构象或使之变性的因素都能使它的萤光强度和出血活性同时发生相应的改变。AaH-1的萤光能分别被Ⅰ~-和丙烯酰胺碰撞淬灭,从萤光峰位和丙烯酰胺淬灭常数,可见Trp残基处于这些淬灭剂可以作用的位置。NBS能氧化AaH-1的Trp残基的吲哚环,而使Trp残基的萤光淬灭,致使AaH-1的活性也相应地减弱,说明Trp残基与出血活性有关。     

古尼虫草核苷类成分的高效液相色谱分析

以已知核苷为标样,并以冬虫夏草做对比,利用反相高效液相色谱法对古尼虫草及其发酵菌丝体的核苷类化学成分进行了分析,结果表明古尼虫草和冬虫夏草主要含有7种标样核苷中的腺苷、胞苷、尿苷,其含量相当,而古尼虫草发酵菌丝体中腺苷和尿苷的含量是古尼虫草子座或僵虫体的2～3倍。     

古尼虫草核苷类成分的高效液相色谱分析*

以已知核苷为标样,并以冬虫夏草做对比,利用反相高效液相色谱法对古尼虫草及其发酵菌丝体的核苷类化学成分进行了分析,结果表明古尼虫草和冬虫夏草主要含有7种标样核苷中的腺苷、胞苷、尿苷,其含量相当,而古尼虫草发酵菌丝体中腺苷和尿苷的含量是古尼虫草子座或僵虫体的2~3倍。