用聚焦层析法纯化人巯基蛋白酶抑制肽C-hCRI_c

以肾衰病人尿为材料,通过碱变性、酸变性和热变性除去部分杂质和尿蛋白。然后用羧甲基-木瓜蛋白酶-琼脂糖4B亲和层析,最后用多缓冲剂聚焦层析,把人的巯基蛋白酶抑制肽C(human cysteine proteinase inhibitor C,简称 hCPI_C)和其他的hCPI_C分开,制备得高纯度、高活性的hCPI_C。在SDS-PAGE中为均一条带,每mg蛋白可抑制50单位木瓜蛋白酶活性的50-63％。     

水稻巯基蛋白酶抑制剂的分子修饰与其对稻瘟病菌的抑制作用

水稻巯基蛋白酶抑制剂（ＣＰＩ）经用二硫苏糖醇,对氯汞苯甲酸和碘乙酸修饰后,对木瓜蛋白酶的抑制活性并无改变;用Ｎ－乙基顺丁烯二酰亚胺与ＣＰＩ反应,可以测出ＣＰＩ分子内有１９个巯基被修饰,被修饰后,抑制活性仍无改变,表明水稻ＣＰＩ的抑制活性不需要巯基参与;应用Ｎ－溴代丁二酰亚胺与ＣＰＩ反应,可测出ＣＰＩ分子内有２个Ｔｒｐ被修饰,修饰后,抑制活性全部丧失,表明Ｔｒｐ是保持抑制活性所必需的基团。水稻巯基蛋白酶抑制剂和丝氨酸蛋白酶抑制剂对稻瘟病菌丝体的生长均有抑制作用,但后者的抑制作用比前者更强,若将两种抑制剂混合使用,则对稻瘟病菌丝体的抑制作用非常强烈;当抑制剂加入量达７２μｇ时,即可产生明显的抑制作用。     

水稻巯基蛋白酶抑制剂的纯化及其性质研究

水稻的糠皮和胚经生理盐水浸取、离心后的上清液加热至８０℃处理１０ｍｉｎ,离心获得的上清液调ｐＨ至８．０,得到沉淀。沉淀溶解于０．０１ｍｏｌ／ＬＨＣｌ,经透析冷冻干燥得水稻巯基蛋白酶抑制剂（ＣＰＩ）粗品;粗品再经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ柱线性离子梯度洗脱和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱分子筛层析,即可获得在ＰＡＧＥ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＨＰＬＣ上均为单一蛋白带的ＣＰＩ样品。经上述步骤,ＣＰＩ可被纯化５８倍。经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定其分子量均为１２０００,Ｎ末端氨基酸为Ｐｒｏ,等电点５．６．水稻ＣＰＩ经１００℃处理１０ｍｉｎ后,其抑制活性无任何变化,在ｐＨ２．０～９．０之间,活性也不发生改变,但ｐＨ在９．０以上,其活性逐渐下降,水稻ＣＰＩ对木瓜蛋白酶是一种高亲和性的抑制剂,它对木瓜蛋白酶和无花果蛋白酶有强抑制作用,对菠萝蛋白酶仅有弱抑制作用,但对胰蛋白酶则全无抑制作用;其抑制类型属竞争性抑制剂类型,Ｋ＿ｉ值约３．５×１０￣（－８）ｍｏｌ／Ｌ对木瓜蛋白酶的抑制摩尔比约为１：１。     

嗅神经鞘细胞的培养纯化及体外生长特性

采用原代培养的方法,从2,5月成年大鼠的嗅球分离培养嗅神经鞘细胞（OECs),培养6天后,用阿糖胞苷（Ara-C)抑制,差速贴壁,Forskolin和BPE营养物质处理,根据P75蛋白免疫细胞化学染色和形态学特征分析了所得细胞的纯度,同时对不同培养时期的OECs 的形态进行观察和纯化后的活力测定。实验结果显示：（1）这种纯化方法简单,经济,快捷,所得的OECS纯度可达95％以上,并且随培养时间延长,细胞仍保持较高的纯度。（2）在培养早期2天到5天主要以巨噬细胞状,多极状,不规则状为主,培养中期7天到20天主要以扁平的双极,三极为主。晚期20天以后呈现双极,三极形态,其起上有许多细小的棘突。93）其中以培养早中期细胞的活力较好,培养20天以后,细胞活力较差,本研究为以OECs 作为移植材料对促进神经再生的研究获得丰富的细胞来源奠定了基础。     

百合巯基蛋白酶抑制剂的纯化及部分性质研究

百合的鳞茎中含有一种对木瓜蛋白酶有强抑制作用的巯基蛋白酶抑制剂．百合的鳞茎经浸取加热处理,木瓜蛋白酶偶联的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ柱亲和层析和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００分子筛层析,可获得在ＰＡＧＥ和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ均为单一蛋白带的百合巯基蛋白酶抑制剂（ＣＰＩ）．此ＣＰＩ为单链蛋白,含有０．３０７％的中性糖;Ｎ端氨基酸为Ｉｌｅ;ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得亚基分子量为１２０００;ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００测得分子量为１２５００．百合ＣＰＩ在１００℃内和ｐＨ２～１２范围内非常稳定;对木瓜蛋白酶的抑制属竞争性抑制类型,其Ｋｉ值为１．１５×１０~（－９）ｍｏｌ／Ｌ,对木瓜蛋白酶的抑制摩尔比为８．５：１．     

tRNA体外抑制L929细胞生长的作用观察

目的:探讨tRNA对不同哺乳动物细胞生长的影响.方法:L929细胞、NIH3T3细胞、MCF-7细胞和PC12细胞接种96孔板,37℃,5% CO2细胞培养箱中培养4 h后,直接加入酵母tRNA,继续培养一定时间后采用MTT法检测细胞生长情况;将200 μg/ml酵母tRNA加入至L929细胞中,在不同时间点观察细胞形态并收集细胞进行细胞流式分析.结果:tRNA对L929细胞有特异的抑制作用,并且表现出一定的剂量依赖性;tRNA处理后L929细胞与正常细胞相比,形态明显变大,而且突起增长;流式细胞仪分析进一步发现tRNA使细胞阻滞于S期.结论:tRNA的这种细胞生长的抑制效应可能是通过其一些小的降解片段发挥的,提示tRNA或者其降解片段可能具有调控L929细胞增殖的重要作用.     

中缝核提取液对体外培养的中脑黑质神经元存活和生长的影响

中脑黑质是中缝核５－ＨＴ神经元最早期的靶组织之一。为了分析神经元对其靶细胞的作用是受某种特异性蛋白或神经营养因子的影响,本文用中缝核提取液作用于体外培养的中脑黑质神经元,证明了该提取液能促进中脑黑质神经元的存活和生长,其活性部分是分子量大于３０ｋＤ的组份,经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳,呈现一条主带,分子量在４３ｋＤ左右。     

重组成骨生长肽对骨折愈合影响的实验研究

目的成骨生长肽(osteogenic growthpeptide,OGP)是具有促进成骨和刺激造血等多方面作用的14肽。本实验旨在研究重组OGP(rOGP)的促成骨活性。方法一、检验动物模型骨折后不同时期血清Ca、P、AKP(碱性磷酸酶)水平;二、作骨折断端病理切片;以观察rOGP对骨折愈合的影响。结果．rOCP具有降低血清Ca,升高血清P、AKP及加速骨折愈合的作用,且其促成骨效果明显优于目前临床常用的促成骨生物制剂骨宁注射液。结论     

马铃薯蛋白酶抑制因子特性的研究

本文研究了马铃薯蛋白酶抑制因子的稳定性及其对胰蛋白酶和胰凝乳蛋白梅的抑制能力,结果表明：该抑制因子对胰蛋白酶活性的抑制作用较弱,最大抑制程度为65％;对胰凝乳蛋白酶活性的抑制作用较强,抑制程度最高可达95％以上,并且,它对pH及温度的变化均具有较强的稳定性。     

长春新碱PEG-PE胶束的制备及其对乳腺癌细胞生长的抑制

为提高长春新碱(VCR)的抗肿瘤活性并降低其毒副作用,利用聚乙二醇衍生化磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)聚合物胶束作为载体制备了包载VCR的PEG-PE胶束(VCR胶束),对其理化性质和体外抗肿瘤活性进行研究.采用透射电镜观察胶束的外观形态,动态光散射法测定粒径和粒度分布,HPLC法测定包封率和体外释放度,MTT法测定VCR胶束及游离VCR对MCF-7细胞的毒性.透射电镜负染照片显示,VCR胶束呈不规则的球状结构,粒度分布窄而均一,平均粒径在(11.1±0.1)nm;VCR能有效被PEG-PE胶束包载,VCR与PEG-PE的摩尔比在1∶2～1∶10的范围内包载量均大于95%;体外释放度和耐稀释试验结果表明,VCR胶束在HBS和血清(pH7.0)两种释放介质中稳定,释放符合一级动力学释药模型;体外细胞毒试验表明,VCR胶束能显著提高VCR对MCF-7细胞生长的抑制作用.制得的VCR纳米胶束具有良好的稳定性、较高包封率和显著提高VCR的抗肿瘤活性,表明PEG-PE胶束将是VCR的一个高效输送载体.     

k阿片肽受体激活对培养心肌细胞生长抑制的影响

目的：通过体外培养乳鼠心肌细胞,观察k阿片肽受体激活对心肌细胞生长的影响。方法：对培养乳鼠心肌细胞分组给48h,用结晶 染色法测定心肌细胞的增殖程度,用Lowry's法测心肌细胞的蛋白质含量。结果：k阿片肽受体激动剂U50,488H（0．1μmol/L-10μmol/L）对培养心肌细胞的增殖程度和蛋白质含量均有抑制作用并呈剂量依赖性;k阿片肽受体拮抗剂nor-binaltorphimine（nor-BNI)1μmol/L）对U50,488H（1μmol/L）的这些抑制效应具有相应的拮抗作用。结论：阿片肽对心肌细胞生长具有负性调节作用,这种作用是通过激活k阿片肽受体发挥的。     

细胞外基质对体外培养心肌细胞铺展作用的影响

本研究用分离的新生大鼠心肌细胞,观察不同的细胞外基质,在培养不同时间对心肌细胞铺展的影响。结果表明,不同的细胞外基质影响心肌细胞铺展,在培养8小时即出现差别,48小时差异明显,其中FN促进心肌细胞铺展,而FN的片段延缓心肌细胞的铺展。     

添加化学试剂对红豆杉培养细胞生长的影响

添加活性炭（ＡＣ）、抗坏血酸（Ｖｃ）、植酸（ＰＡ）于红豆杉细胞中进行培养,发现０．１％ＡＣ、０．０１％ＰＡ、高浓度的Ｖｃ对红豆杉细胞生长有促进作用,其过氧化物酶活性强,鲜重比大,而多酚氧化酶活性弱,褐变强度小,褐变等级低。     

白血病抑制因子对胚泡金属蛋白酶表达的影响

为了探讨白血病抑制因子 (LIF) 对胚泡着床作用的机理,胚泡经与LIF及其特异性抗体培养后,通过RT-PCR及免疫印迹技术,分析了LIF与着床前小鼠胚泡的基质金属蛋白酶9(MMP9)表达和分泌之间的关系.结果显示：LIF可明显诱导胚泡MMP9的分泌和基因表达; 经LIF特异性抗体封闭后,胚泡MMP9的分泌及基因表达下降,且下降趋势随着LIF被封闭时间延长而减弱,对MMPs组织抑制因子1(TIMP1)的影响则不明显.说明LIF可能通过诱导MMP9的分泌及基因表达来影响胚泡对子宫内膜细胞外基质的水解,促进着床.     

HAI-1过表达对SW620细胞体外生长和运动能力的影响

肝细胞生长因子激活因子抑制因子1(hepatocyte growth factor activator inhibitor type 1,HAI-1)能有效抑制肝细胞生长因子激活因子(hepatocyte growth factor activator,HGFA)和丝氨酸蛋白酶Matriptase的活性,并可通过对HGFA和Matriptase活性的调控参与HGF／c—Met信号传导途径。为了解HAI-1在肿瘤细胞的生长和运动中的作用,本研究将人HAI-1基因全长cDNA克隆至pcDNA3．1( )表达载体,并转染人肠癌SW620细胞,用Western blot验证了转染细胞中HAI-1的表达情况,并分别利用生长曲线、软琼脂集落形成、穿膜运动和扩散运动测定等方法检测了HAI-1过表达对SW620细胞生长和运动能力的影响。生长曲线和软琼脂集落形成测定都显示出HAI-1转染细胞与对照组相比差异不十分明显。穿膜运动和扩散运动测定则均显示了HAI-1过表达对细胞运动能力有明显的抑制。因此,HAI-1的过表达虽然在体外对肿瘤细胞生长影响较小,但可以抑制肿瘤细胞的运动迁移能力。