用乙脑病毒减毒株单克隆抗体分析乙脑病毒强毒株和减毒株的抗原差别

用乙型脑炎(乙脑)病毒强毒株免疫制备的单克隆抗体(McAb)分析证明强毒株之间的抗原差别,已有研究报道。本实验用乙脑病毒减毒活疫苗2-8株免疫制备的McAb分析强毒株和减毒株之间的抗原差别。 一、乙脑病毒株 2-8株和5-3株均为减毒活疫苗株。SA14株和A2株均为强毒株,SA14株是2-8株和5-3株的母株,A2株是国内实验室标准株。     

麻腮风水痘联合减毒活疫苗病毒滴定方法研究

目的建立并验证MMRV联合减毒活疫苗病毒滴定方法。方法滴定MMRV疫苗中的每种病毒时,首先用特异性抗血清有选择地中和其他病毒成分,再根据每种抗血清与相应病毒的完全中和能力,确定各抗病毒血清的使用浓度。分别用CCID50法(麻、腮、风病毒)和蚀斑法(水痘病毒)检测MMRV疫苗中各病毒的滴度。结果使用该方法对MMRV联合减毒活疫苗进行滴定的实测值与理论值无显著差异,经验证其准确性和可重复性均显示良好。结论建立的MMRV联合减毒活疫苗病毒滴定方法可行。     

氯化镁增强鸡胚细胞对森林脑炎病毒减毒株敏感性的研究

减毒活疫苗的免疫效果与病毒滴度有直接关系,如何提高病毒的滴度,增强其稳定性,是提高减毒活疫苗免疫效果的重要途径之一。本文报告,在鸡胚单层细胞培养森林脑炎(以下简称森脑)病毒减毒株,加有10mM氯化镁可提高     

麻疹减毒活疫苗检定用Vero细胞代次对病毒滴度稳定性试验的影响

目的了解麻疹减毒活疫苗检定用Vero细胞代次的稳定性范围。方法用DMEM培养液将Vero细胞137代连续传至173代,检测其细胞活力,并观察Vero细胞的形态,接种麻疹减毒活疫苗参考品进行病毒滴定及热稳定性试验。结果 170代以下Vero细胞形态良好,细胞活力在85%以上,麻疹减毒活疫苗病毒滴度热稳定性试验的结果:137~169代Vero细胞活力及原麻疹减毒活疫苗病毒滴度热稳定性试验无统计学差异(P>0.05),170代以上代次的Vero细胞活力及原麻疹减毒活疫苗热稳定性试验有明显统计学差异(P<0.01)。结论 169代以下Vero细胞为检定用麻疹减毒活疫苗最佳细胞代次。     

卫星RNA使转基因番茄产生病毒抗性

美国马里兰大学P.B.McGarVey和M.S.Montasser及美国农业部J.M.Kapa报道,转基因番茄植株在表达减毒黄瓜花叶病毒(RNA)卫星CMV序列后对CMV-1病毒的试攻显示出抗性。据作者声称,     

Sabin2型脊髓灰质炎病毒适应人胚肺二倍体细胞不同代次病毒滴度与5′端非编码区变异关系

脊髓灰质炎病毒(Poliovirus)是一类无包膜单股正链RNA病毒,基因组长约7．5kb。其5′端非编码区由约742个核苷酸长,主要与病毒RNA复制、蛋白翻译起始、病毒颗粒的装配及病毒的细胞适应减毒及神经毒力密切相关。我们研究发现,脊髓灰质炎病毒(Sabin株)在人胚肺二倍体细胞(KME17)上致细胞病变较猴肾细胞慢,病毒产量亦明显低于恒河猴肾细胞培养,国内外也有类似的报道。     

TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测甲型肝炎减毒活疫苗病毒含量的研究

目的：建立一种快速定量检测甲型肝炎减毒活疫苗病毒含量的实时荧光定量RT-PCR方法。方法对Gen-Bank中登陆的甲型肝炎减毒活疫苗株（ L-A-1）和其他甲型肝炎病毒基因组全序列比较分析,根据其高度保守的5′端非编码区设计针对甲型肝炎减毒活疫苗株特异性引物与探针,对荧光定量RT-PCR反应条件进行优化,检测该方法的特异性和灵敏性,并对甲型肝炎减毒活疫苗病毒含量进行定量检测。结果该方法对甲型肝炎减毒活疫苗株高度特异,扩增片段为207 bp,不与其他肠道病毒发生非特异性反应。在104 CCID50/管～10-1 CCID50/管之间有良好的扩增曲线,检测的灵敏度可达0．1CCID50～0．01CCID50,比普通RT-PCR高100倍。结论该方法具有快速、灵敏、特异、重复性好等优点,可应用于甲型肝炎减毒活疫苗生产过程中病毒含量滴度测定及指导疫苗成品的配制。     

立谷热减毒活疫苗候选株的选育及其弱毒的分子机制

<正>1930年Daubuey等首次从绵羊中分离出立谷热(RVF)病毒,为该病的防治提供了前提。几十年来有关RVF疫苗的研究工作一直在进行之中,兽用灭活疫苗和减毒活疫苗早已应用于流行区的预防接种,人用灭活疫苗也正在进行扩大人群观察。1949年Smithburn等发现RVF病毒Ent株经小鼠脑内连续传170代后对很多实验动物的毒力明显减弱,但同时也伴有对神经组织的亲和力增强,而且对家畜可致畸和引起流产等,故有些学者预言发展人用RVF减毒活疫苗是比较困难的。但近年来有关这方面研究已有较成功的报道,     

一种广泛可及的委内瑞拉马脑炎病毒复制子颗粒疫苗平台的开发

人兽共患病病毒在动物宿主中成群体传播.而且能够在人群中出现,造成对公共健康产生不利影响的传染性疾病,在疾病暴发与新现的背景下,可便携的、安全且有效的疫苗平台被广泛需求.在此工作中,研究者报道了对甲病毒属复制子疫苗平台的生成与鉴定,这是基于非选择介质———减毒委内瑞拉马脑炎(VEE)病毒疫苗而完成的,所用毒株为3526(VRP3526).     

风疹病毒814株生物学性状研究

风疹病毒(RV)引起儿童出疹性疾病,更严重的是致胎儿畸型。自从报道风疹病毒分离成功之后,各家相继建立了许多风疹病毒株,并对其生物学性状作过许多报道。近几年国内也有分离病毒成功的报道,但是国内尚未见到对风疹病毒株生物学性状研究的报告。我们采用原代兔肾细胞分离长春地区风疹病毒数株,并对其中的RV-814株生物学性状进行了部分比较实验观察,以便为今后制备减毒风疹活疫苗奠定基础。     

A型流感病毒持续感染细胞系来源的IVpi-189病毒生物学性状的初步研究

为明确E61-24-P15 A型重组流感病毒的第189代传代子病毒(IVpi-189)是否具备流感病毒温度敏感减毒活疫苗候选株的特点,将IVpi-189病毒感染MDCK细胞,并于不同培养温度条件下培养,观察其致细胞病变效应,病毒合成、释放情况,以及不同温度条件下病毒存活时间。结果显示32℃培养温度下,IVpi-189病毒具有等同于亲代野生病毒株的诱导细胞病变能力,而当培养温度上调至38℃,IVpi-189病毒致细胞病变效果出现缓慢且程度明显减轻。空斑形成单位实验发现IVpi-189病毒在38℃培养条件下增殖能力明显下降,其原因与病毒灭活速度及子病毒释放无关,但与感染细胞病毒合成能力下降有关。上述实验结果初步证实流感病毒持续感染细胞系来源的IVpi-189病毒具有温度敏感减毒活疫苗的生物学特性,在许可培养温度条件下具有良好的增殖能力,而在非许可培养温度下,病毒增殖活性受到明显抑制。本研究为流感病毒减毒活疫苗的开发研制提供实验佐证。     

登革热Ⅳ型病毒在地鼠肾细胞培养内减毒的研究

本文报道登革热Ⅳ型病毒Ban18株通过原代地鼠肾细胞连续传代后的适应和减毒过程。 Ban18原株对原代地鼠肾细胞无病变或仅有极轻微病变,对乳小白鼠及断乳鼠的脑内毒力高达LD_(50)为Log6—7。通过连续传20—70代后,病变逐渐加重,出现时间缩短,二天即可达到细胞完全破坏。培养液内的病毒含量也随之提高达10~6—10~7/ml TCID_(50)。但随着传代代数增加,病毒对乳小白鼠的嗜神经毒力逐渐降低,脑内接种后仅个别发病或完全不致死。脑组织病理变化也较原株明显减轻,接种树鼩不产生病毒血症。以上结果符合弱毒株的减毒指标,是一株有希望的活疫苗毒株。     

反向遗传学在呼吸道合胞病毒减毒活疫苗研究中的应用

人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus, RSV)是引起婴幼儿下呼吸道感染的最重要的病毒病原,减毒RSV活疫苗能模拟自然感染充分活化机体固有免疫系统,并诱导产生体液免疫和细胞免疫,不会产生疾病增强作用,经黏膜途径应用,能突破母传抗体的干扰,因而受到广泛关注,反向遗传学(reverse genetics)在减轻野生型RSV毒力和增强其免疫原性等方面具有传统减毒技术不可比拟的优势,所以综述了反向遗传学在RSV减毒活疫苗研究中的应用。     

轮状病毒减毒活疫苗(Rotarix~(TM))作为攻毒模型的初步研究

正轮状病毒仍是引起脱水腹泻的最常见病因,在发展中国家尤为典型。这些国家的儿童为免疫攻毒试验研究提供了一个契机,可以迅速评估可能提高保护力的新型候选疫苗。本文作者评估了轮状病毒减毒活疫苗(RotarixTM)作为减毒活病毒攻毒试剂的效果。作者共纳入22名在6周龄和10周龄时接受两剂标准剂量的RotarixTM的赞比亚婴儿,进行了一项开放标签的探索性研究。第一剂疫苗为初免剂,第28天的第二剂疫苗为减毒活病毒攻毒剂。     

以减毒沙门氏菌为载体山羊痘病毒P32基因真核表达载体的构建与鉴定

目的：构建以减毒沙门氏菌为载体山羊痘病毒P32基因真核表达载体。方法：以pMD-18T-P32/LD为模板,通过聚合酶链反应（PCR）扩增出山羊痘病毒P32基因片段,定向插入真核表达载体pVAX1中,再重组表达质粒pVAX1-P32/LD。转入DH5α,再转入减毒鼠伤寒沙门氏菌,通过双酶切、PCR及插入片段序列测序对质粒进行鉴定。结果：携带山羊痘病毒P32基因片段的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗S7207/pVAX1-P32/LD已成功构建。结论：为山羊痘基因工程疫苗的研制及诊断方法的建立奠定了基础。     

离心、超滤技术在甲型肝炎减毒活疫苗生产工艺中的应用

采用离心和超滤技术进行甲型肝炎减毒活疫苗生产 ,达到提高病毒的收获率。将含有甲型肝炎病毒的细胞收获液离心 ,上清进行超滤浓缩 ,回收病毒 ,病毒回收效果好。实验证明 ,该方法适合规模化生产。     

反向遗传学技术在流感病毒减毒活疫苗研究中的应用进展

流感病毒是一种威胁人类健康的重要病原体,具有季节流行性,可以引起暴发性感染,对公共卫生及经济带来打击。接种疫苗是目前保护人类免受流感病毒感染的最佳医疗干预措施。安全性与有效性的平衡是疫苗研发追求的目标,减毒活疫苗则能够实现两者平衡,有望在预防免疫中发挥巨大作用。随着反向遗传学技术的成熟,其在流感病毒减毒活疫苗的研发中也发挥着越来越大的作用,使减毒病毒株的构建更加简便,减毒方法更加多元。本文主要就反向遗传学技术在流感病毒减毒活疫苗研发中的应用进行简要综述。     

预防呼吸道及肠道病毒性疾病的活疫苗

<正> 与灭活疫苗和亚单位疫苗相比,活疫苗的显著优点是能诱导更有效的局部粘膜免疫力及更持续的免疫反应能力。而活疫苗的最大缺点则是遗传不稳定使得减毒特性丧失的可能性。目前,应用以下5种策略使这种可能性减小到最小程度,同时又不致于影响减毒与免疫原性之间的平衡,这种平衡是所有活疫苗株所必需具备的。 一、用琴纳(Tennel)法研制活疫苗株 这种方法是用与人病毒抗原相关的动物病毒株作为疫苗,免疫接种于人体以预防人病毒引起的疾病。通常,在其自然宿主上适应力很好的动物病毒接种于人体后,它们的繁殖能力不是太强,因此对人来说是减毒的。目前,人们将传统的琴纳法与现代病毒遗传学、分子生物学及免疫学技术相结合,研制     

脊髓灰质炎疫苗衍生株-消灭脊髓灰质炎的新障碍

口服脊髓灰质炎减毒活疫苗（OPV）或接触了服苗者后,极个别人可发生疫苗相关脊髓灰质炎（VAPP）,尤其是近10年来,国内外均报道了小规模的VAPP暴发流行,监测发现,这些VAPP病人的发生与OPV疫苗出现基因突变或基因重组,以致疫苗病毒恢复其毒力有关,本文就目前VAPP发生情况,OPV疫苗基因的变化如基因突变或重组的类型和机制。如何预防和控制OPV疫苗衍生病毒的发生等方面的进展作了介绍。     

Sabin2型脊髓灰质炎病毒适应人胚肺二倍体细胞不同代次病毒滴度与5'端非编码区变异关系

脊髓灰质炎病毒(Poliovirus)是一类无包膜单股正链RNA病毒,基因组长约7.5kb.其5'端非编码区由约742个核苷酸长,主要与病毒RNA复制、蛋白翻译起始、病毒颗粒的装配及病毒的细胞适应减毒及神经毒力密切相关[1].