临床和非临床分离沙门菌的菌型分布及对抗生素的耐药性研究

目的：探讨沙门菌在腹泻病人粪便、外环境污水和部分动物标本中的菌型分布及其对抗生素的耐药性。方法：采用血清学方法对沙门菌进行分群和分型,采用K—B法进行抗生素耐药性测定。结果：410份临床腹泻病人标本和514份非临床标本共检出沙门菌93株,检出率为10．1％,其菌型分布为：腹泻病人粪便中检出的均为B群鼠伤寒沙门菌(6／93),非临床标本中的菌型主要为C2群纽波特沙门菌(72／93),还有E1群伦敦沙门菌(7／93)、B群鼠伤寒沙门菌(2／93)和未定型(6／93)。87株沙门菌对青霉素的耐药率最高(96．5％),其次为SMZ TMP(73．6％),未发现对新霉素、链霉素、四环素和阿米卡星的耐药株。结论：实验结果可为研究我省沙门菌的菌型分布及其对抗生素的耐药性提供参考;临床上应加强对鼠伤寒沙门菌引起腹泻的监测。     

禽大肠杆菌、肠炎、鼠伤寒、鸡白痢及鸡伤寒沙门菌多重PCR方法的建立及应用

【背景】大肠杆菌病和沙门菌病是最常见的家禽细菌性疾病,给养禽业造成严重经济损失。另外,禽大肠杆菌和沙门菌也是重要的人畜共患病原菌,可通过禽类及其产品传播给人类,对人类健康造成严重威胁。加强禽大肠杆菌和沙门菌的快速鉴别检测,对养禽业和公共卫生都具有重要意义。【目的】建立禽大肠杆菌、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌、鸡白痢沙门菌和鸡伤寒沙门菌的多重PCR检测方法。【方法】通过比较分析确定禽致病性大肠杆菌、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌、鸡白痢沙门菌和鸡伤寒沙门菌的特异靶标基因,设计5对特异性引物,通过条件优化建立多重PCR方法,分析该多重PCR方法的特异性、敏感性及可靠性。【结果】该方法能特异性地鉴定禽致病性大肠杆菌、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌、鸡白痢沙门菌和鸡伤寒沙门菌,每个PCR反应的最低检出限分别为103 CFU细菌和100 pg基因组DNA。临床分离菌株检测显示,多重PCR与传统血清学方法结果一致。【结论】建立的多重PCR方法能够快速鉴别禽致病性大肠杆菌和不同血清型沙门菌,对禽大肠杆菌病和沙门菌病的流行病学调查及临床检测具有重要意义。     

2014—2015年大连市伤寒沙门菌耐药性及分子分型研究

目的 了解大连市伤寒沙门菌的药物敏感情况及同源性特点,为临床用药和疾病预防提供科学指导。方法 选择15种抗生素、运用微量肉汤稀释法对65株伤寒沙门菌进行抗生素敏感试验;采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）法进行聚类分析。结果 65株伤寒沙门菌对阿奇霉素100.00%敏感,对红霉素100.00%耐药,对其他13种药物有不同程度的耐药率（1.54%~73.85%）。发现1株多重耐药菌株。65株菌共产生41种PFGE带型,其中8株菌表现为同一型别。结论 大连地区临床分离伤寒沙门菌耐药形势严峻;聚类分析结果表明其PFGE型别较多,而且其中存在着优势菌株。     

采用伤寒沙门菌替代菌种降低微生物实验教学感染风险

《临床微生物学检验》是医学检验技术专业的专业课之一,其中的实验教学学时占总学时的50%。由于学生实验室生物安全的要求,限制了一些临床常见致病菌种鉴定的教学内容。为保证微生物鉴定菌种的临床实战性,同时又降低学生实验室感染的风险,在肠杆菌科的实验教学中,我们探索采用对人无感染性的鼠伤寒沙门菌种替代相对高感染风险的伤寒沙门菌种,利用两种菌在生物学特性上极为相似甚至相同的特点,既完成了大纲要求的伤寒沙门菌全部实验教学内容,同时又极大地降低了伤寒沙门菌感染的风险,达到教学效果。     

伤寒沙门菌野生型与粗糙型菌体蛋白质的双向电泳分析与研究

了解伤寒沙门菌野生型与粗糙型菌株的菌体蛋白质组成特点,探讨伤寒沙门菌粗糙型变异的遗传学基础。分离提取伤寒沙门菌野生型与粗糙型菌株的菌体蛋白质,聚丙烯酰胺凝胶双向电泳(2D-PAGE)和考马斯亮蓝染色,计算机分析与比较两菌株的蛋白质组成特点及其相关性。伤寒沙门菌野生型与粗糙型具有相似的蛋白质电泳图谱,相似系数为78%。多数蛋白质斑点分布于pH 3.0~6.4之间,并且分子量小于30kDa。两菌株的蛋白质电泳图谱之间的主要差异共计36处,多数差异蛋白质的分子量小于20kDa。伤寒沙门菌粗糙型与野生型菌体蛋白质组成的差异显示,粗糙型变异绝不仅仅是O抗原多糖的缺失,也可发生菌体蛋白质组成的改变与缺失。伤寒沙门菌粗糙型保留了同其亲代野生型菌株一致的绝大多数菌体蛋白质组成,在2D-PAGE中形成伤寒沙门菌特征性的基本蛋白质图谱,有助于对粗糙型菌株进行蛋白质分子同源性与变异性的分析与鉴别。     

2014年大连市伤寒沙门菌耐药及 分子分型研究

摘要：目的 了解大连市伤寒沙门菌耐药性及分子分型特点,建立沙门菌分子特征本底信息,为今后防治工作提供科学依据。方法 采用微量肉汤稀释法对46株伤寒沙门菌进行8种抗生素敏感试验;运用脉冲场凝胶电泳（PFGE）方法对46株伤寒沙门菌进行分子分型及聚类分析。结果 46株伤寒沙门菌对萘啶酸（NAL）100%敏感,对氯霉素（CHL）和甲氧苄啶/磺胺甲噁唑（TMP/SMZ）耐药率为4.35%,对庆大霉素（GEN）耐药率为47.83%,发现多重耐药株1株;BioNumerics分析结果显示,46株伤寒沙门菌共产生30种PFGE带型,有7株表现为同一PFGE型别。结论 大连地区存在耐庆大霉素的伤寒沙门菌;PFGE结果表明这些菌株存在遗传多态性,并有优势菌株的存在。     

伤寒沙门菌与甲、乙、丙副伤寒沙门菌质控血清的制备

应用免疫学原理,将伤寒沙门菌O901、H901和甲、乙、丙型副伤寒沙门菌分别制成全菌体抗原,免疫实验兔获取免疫血清。依据伤寒沙门菌和副伤寒沙门菌的抗原成分的异同性,选择适当的吸收菌除去免疫血清中的交叉反应抗体和类属凝集素,而保留其特异性的抗体。通过对诊断菌液的验证试验,证实吸收充分的免疫血清具有质控血清的特性。具备可靠性能的质控血清,适用于伤寒沙门菌与副伤寒沙门菌的菌种检定及其效价检测;亦有利于肥达氏诊断菌液的质量控制。     

6种沙门菌单克隆抗体的制备和效能评价

目的：制备稳定、特异、高亲和性的分别针对甲型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌、丙型副伤寒沙门菌、肠炎沙门菌、伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌的单克隆抗体。方法：用甲醛灭活的菌液抗原免疫BALB／c小鼠,取脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞融合;用灭活的菌液包被酶标板,ELISA筛选阳性克隆株,建立细胞系;选取高效分泌杂交瘤细胞,常规制备腹水并纯化,进行单抗特异性与亲和性评价。结果：筛选得到分泌6种沙门菌相应单克隆抗体的杂交瘤细胞株,获得高亲和性单抗;所有单抗与大部分病原菌（包括7种沙门菌、3株志贺菌、2株李斯特菌、4株致病性大肠杆菌、2株霍乱弧菌）无交叉反应,但由于同类型O抗原的广泛分布,抗乙型副伤寒沙门菌单抗与鼠伤寒沙门菌、抗伤寒沙门菌单抗与肠炎沙门菌有明显的交叉反应。结论：沙门菌单抗的制备,为感染性腹泻的监测、诊断奠定了基础。     

鼠伤寒沙门菌外膜蛋白与耐药性关系的分析

目的分析鼠伤寒沙门菌外膜蛋白(OMP)与耐药性的关系。方法用消除剂丫啶橙消除耐药性,盲传测其遗传稳定性,采用超声波物理裂解法制备鼠伤寒沙门菌外膜蛋白标本,用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDA-PAGE)检测外膜蛋白,用紫外分光光度计测其吸光值,计算浓度。结果抗性消除表型能稳定遗传,耐药鼠伤寒沙门菌与敏感鼠伤寒沙门菌都含有6条主要的外膜蛋白条带,两者相比,发现耐药菌的外膜蛋白在约57、53、30 kDa处减弱或缺失,总的蛋白浓度也低于后者。结论鼠伤寒沙门菌耐药性与外膜蛋白的减弱或缺失有关。     

鼠伤寒沙门菌rtsB基因缺失株的构建及其生物学特性

【背景】鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium)是一种重要的人畜共患病原菌,严重危害养殖业及人类健康。调控蛋白在病原菌的生存及感染过程中发挥重要作用。【目的】构建鼠伤寒沙门菌调控基因rtsB缺失株和互补株,分析调控蛋白RstB对鼠伤寒沙门菌生物学特性和致病性的影响。【方法】利用Red同源重组的方法构建鼠伤寒沙门菌SAT52的rtsB基因缺失株,并利用互补质粒构建互补株。然后比较分析野生株SAT52、缺失株?rtsB和互补株C?rtsB的生长特性、运动性、生物被膜形成能力、黏附入侵能力、胞内存活能力及致病性的差异。【结果】缺失rtsB基因不影响SAT52的生长速度,但导致运动能力增强,生物被膜形成能力减弱。细胞感染试验结果表明,rtsB基因有助于鼠伤寒沙门菌对Hela细胞的黏附入侵及RAW264.7细胞内的存活。动物试验结果表明rtsB基因缺失显著降低鼠伤寒沙门菌的致病力。【结论】rtsB基因在鼠伤寒沙门菌感染过程中发挥重要作用,可为阐释鼠伤寒沙门菌的致病机制提供参考。     

Characterization of Salmonella enterica serovar Enteritidis isolates recovered from blood and stool specimens in Thailand

ABSTRACT: BACKGROUND: Bacteremia due to Salmonella spp. is a life-threatening condition and is commonly associated with immune compromise. A 2009 observational study estimated risk factors for the ten most common non-typhoidal Salmonella (NTS) serovars isolated from Thai patients between 2002-2007. In this study, 60.8% of Salmonella enterica serovar Enteritidis isolates (n = 1517) were recovered from blood specimens and infection with Salmonella serovar Enteritidis was a statistically significant risk factor for bacteremia when compared to other NTS serovars. Based on this information, we characterized a subset of isolates collected in 2008 to determine if specific clones were recovered from blood or stool specimens at a higher rate. Twenty blood isolates and 20 stool isolates were selected for antimicrobial resistance testing (MIC), phage typing, PFGE, and MLVA. Result Eight antibiogrammes, seven MLVA types, 14 XbaI/BlnI PFGE pattern combinations, and 11 phage types were observed indicating considerable diversity among the 40 isolates characterized. Composite analysis based on PFGE and MLVA data revealed 22 genotypes. Seven of the genotypes containing two or more isolates were from both stool and blood specimens originating from various months and zones. Additionally, those genotypes were all further discriminated by phage type and/or antibiogramme. Ninety percent of the isolates were ciprofloxacin resistant. CONCLUSIONS: The increased percentage of bloodstream infections as described in the 2009 observational study could not be attributed to a single clone. Future efforts should focus on assessing the immune status of bacteriaemic patients and identifying prevention and control measures, including attribution studies characterizing non-clinical (animal, food, and environmental) isolates.     

2016-2019年辽宁省肠炎沙门菌分离株分子分型及其耐药性

目的 分析辽宁省肠炎沙门菌分离株的分子分型特征及耐药情况,为辽宁省肠炎沙门菌的分子流行病学及防控措施提供参考依据。 方法 采用PFGE分子分型方法对辽宁省2016-2019年肠炎沙门菌分离株进行分子分型,应用BioNumerics 7.6软件对酶切片段进行聚类分析,明确菌株的特征及同源性;采用最低抑菌浓度(MIC)法测定菌株对14种药物敏感性。 结果 共获得49株肠炎沙门菌,分子分型结果证明其呈17种PFGE带型,相似度区间为77.4%～100.0%,有2种优势带型;对萘啶酸的耐药率最高,达89.80%,其次氨苄西林的耐药率为69.39%,对3种以上抗生素的耐药率为55.10%。 结论 辽宁省肠炎沙门菌PFGE分子分型具有独特的优势带型,存在带型较多的特点;肠炎沙门菌分离株多重耐药状况比较严重,对萘啶酸的耐药率最高。     

安徽猪源非伤寒沙门菌耐药及多重耐药性的监测研究

目的了解安徽地区猪源非伤寒沙门菌分离株的多重耐药状况及耐药程度。方法应用标准K-B纸片法对100株沙门菌进行耐药检测,并分析其多重耐药性。结果分属B、E1、E4和F四个血清群的100株非伤寒沙门菌总耐药率为72%,其中B群耐药率为82.35%,E1群为44.44%,E4群为84.62%,F群为100%;72株耐药菌株中有52株为耐3种以上抗生素的多重耐药,其中B群多重耐药率为64.29%,E1群为75%,E4群为45.45%,F群为100%;多重耐药谱是强力霉素—四环素—卡那霉素—氯霉素。结论安徽地区猪源非伤寒沙门菌分离株的多重耐药程度严重,该地区养猪业在使用抗生素方面存在严重问题,应加强对抗生素合理使用的管理以及食品卫生的监督工作。     

杭州地区多重耐药沙门氏菌的耐药特征

【背景】沙门氏菌是重要的食源性致病菌,其多重耐药现象不容忽视。【目的】分析杭州地区临床来源多重耐药沙门氏菌的耐药特征和感染状况。【方法】利用微量肉汤稀释法对339株沙门氏菌进行14类28种药物的最低抑菌浓度(Minimum Inhibitory Concentration,MIC)测定,对同时耐3类或3类以上药物的多种耐药株进行耐药特征、血清型分布等分析,并对其进行Xba I酶切及脉冲场凝胶电泳(Pulse Field Gel Electrophoresis,PFGE)。【结果】从339株沙门氏菌中检出234株多重耐药株,多重耐药率达69.03%,近3年数据比较结果显示差异无统计学意义(χ²=0.117,P=0.943);以同时耐4-8类药物的菌株多见,合计占总菌株数的56.93%(193/339);大部分多重耐药沙门氏菌(199/234,85.04%)同时耐5-13种药物;菌株的耐药模式较为分散,相对优势的耐药谱为AMP-AMS-NAl-STR-SUL(10株,4.27%)和AMP-STR-TET-MIN-DOX-SUL(7株,2.99%);鼠伤寒单相变种和德尔卑血清型的多重耐药现象较为突出,其多重耐药率分别为97.06%(66/68)和100%(11/11);234株多重耐药沙门氏菌分为162个PFGE带型,相似度为44.2%-100%,其带型呈散在多态性;PFGE带型相同的菌株,其耐药类别和耐药谱不一定相同,PFGE带型不同的菌株,其耐药类别和耐药谱也可能相同。【结论】杭州地区临床来源沙门氏菌多重耐药现象普遍,但耐药谱分散,耐药表型呈多样性,而且PFGE带型呈散在多态性,与耐药表型也不存在对应关系。其基因组特征和主要食物来源有待于进一步研究。     

2018-2022年佛山地区小儿沙门氏菌感染的临床特征和耐药性分析

摘要 目的：分析2018-2022年佛山地区小儿沙门氏菌感染的临床特征和耐药性,为小儿沙门氏菌感染的临床防治提供依据。方法：对2018年1月1日至2022年12月31日期间佛山市妇幼保健院收集的小儿沙门氏菌感染病例186例进行回顾性分析,分析患儿一般资料、小儿沙门氏菌感染的时间分布特征、临床特征、血清型分布及耐药性。结果：186例小儿沙门氏菌感染患儿年龄分布,1~3岁构成比最高,占37.63%,>6岁构成比最低,占1.61%。2018年发病33例,2019年发病19例,2020年发病39例,2021年发病44例,2022年发病51例,沙门氏菌感染病例数总体呈现上升趋势;一年四季均有沙门氏菌感染病例,夏秋两季发病率最高,分别占43.55%、30.11%。发热、腹泻、解粘液便为主要症状,分别占90.32%、74.73%和63.98%。血清型B群最高,为118例,占63.44%。通过对分离出的191株沙门氏菌药物敏感性试验分析,只有3株（1.57%）对所检测抗菌药物均不耐药,耐3类或3类以上的多重耐药沙门氏菌有157株（82.20%）,庆大霉素、头孢唑啉、头孢替坦耐药率均为100%。不同年份沙门氏菌对左氧氟沙星、环丙沙星、四环素的耐药率差异有统计学意义（P<0.05）。结论：近年来佛山地区小儿沙门氏菌感染呈上升趋势,1~3岁儿童是主要群体,夏季和秋季是发病的高峰季节,主要血清型是B群,儿童感染后以发热、腹泻、解粘液便为主要症状,沙门氏菌的耐药性较为严重,应引起相关部门重视。     

Multilocus sequence typing supports the hypothesis that cow- and human-associated Salmonella isolates represent distinct and overlapping populations

A collection of 179 human and 156 bovine clinical Salmonella isolates obtained from across New York state over the course of 1 year was characterized using serotyping and a multilocus sequence typing (MLST) scheme based on the sequencing of three genes (fimA, manB, and mdh). The 335 isolates were differentiated into 52 serotypes and 72 sequence types (STs). Analyses of bovine isolates collected on different farms over time indicated that specific subtypes can persist over time on a given farm; in particular, a number of farms showed evidence for the persistence of a specific Salmonella enterica serotype Newport sequence type. Serotypes and STs were not randomly distributed among human and bovine isolates, and selected serotypes and STs were associated exclusively with either human or bovine sources. A number of common STs were geographically widespread. For example, ST6, which includes isolates representing serotype Typhimurium as well as the emerging serotype 4,5,12:i:-, was found among human and bovine isolates in a number of counties in New York state. Phylogenetic analyses supported the possibility that serotype 4,5,12:i:- is closely related to Salmonella serotype Typhimurium. Salmonella serotype Newport was found to represent two distinct evolutionary lineages that differ in their frequencies among human and bovine isolates. A number of Salmonella isolates carried two copies of manB (33 isolates) or showed small deletion events in fimA (nine isolates); these duplication and deletion events may provide mechanisms for the rapid diversification of Salmonella surface molecules. We conclude that the combined use of an economical three-gene MLST scheme and serotyping can provide considerable new insights into the evolution and transmission of Salmonella.     

食源性相关腹泻肠炎沙门菌感染抗菌药物敏感性

目的 了解食源性相关腹泻非伤寒沙门菌感染的菌种分布及其对抗菌药物敏感性,为控制该类细菌的感染及传播提供技术支持。方法 对2015‒2017年本系统2家社区卫生服务中心就诊的食源性相关腹泻患者粪便（或肛拭子）标本采用直接分离与增菌分离相结合的方法常规培养分离获得42株沙门菌;采用血清凝集法进行快速血清分型,并自动化生化鉴定及抗菌药物敏感性试验;通过现况调查进行流行病学危险因素分析。结果 自动化生化鉴定结果能够覆盖常规血清学快速鉴定结果,同属沙门菌群;42株沙门菌以肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌和斯坦利沙门菌为主,其中肠炎沙门菌占全部菌株的23.81%,鼠伤寒沙门菌占19.06%,斯坦利沙门菌占14.29%;其中肠炎沙门菌可对氟喹诺酮类、三四代头孢菌素类与碳青霉烯类等敏感（敏感率可达97.00%以上）,而对氨基糖苷类可产生双向耐药。通过现况调查,发现患者有腹痛、腹泻等胃肠道症状,可伴有发热,所有患者48 h内有可疑食物暴露史,无水源性案例,均为散发。结论 菌种鉴定应以常规快速血清学凝集结果为准,自动化生化鉴定仅供参考,并将鉴定菌种与药敏报告相关联,可根据药敏结果合理选用敏感抗菌药物;应对社区居民开展针对性的健康宣教。     

Conjugative plasmids of Salmonella strains resistant to antibiotics

Plasmid DNA profile and conjugative R-plasmids were detected in Salmonella clinical isolates. The study revealed that drug resistance of Salmonella clinical strains of different serovars was determined by R-plasmids with a mol. wt. of 60-90 kD, carrying a certain spectrum of resistance to antibiotics. 9 types of conjugative plasmids, differing in their mol. wt. and resistance markers, were detected.     

Lack of clonal relationship between non-typhi Salmonella strain types from humans and those isolated from animals living in close contact

Antibiogram patterns and chromosomal DNA typing were used to compare 151 non-typhoidal Salmonella spp. (NTS) isolated from patients and 78 from animals, environmental or food specimens obtained within or near the homes of patients with invasive salmonellosis. The majority of NTS from humans (137; 90.7%) were Salmonella enterica serotype Typhimurium (S. Typhimurium) and S. Enteritidis. Chicken specimens and feeds produced (24; 52.2%) S. Enteritidis, while S. Agona was the predominant (20; 77%) serovar among pigs and dairy cows. The majority (97; 64.2%) of NTS from humans were multidrug resistant, while NTS from cows, pigs, beef carcass swabs and sewers were fully susceptible to all antibiotics tested. Pulsed-field gel electrophoresis patterns of XbaI-digested genomic DNA of NTS from the humans and the chickens were different. However, S. Enteritidis from chickens, and S. Braenderup and S. Agona from cows and pigs were clustered together in one group. There was no significant relatedness between NTS isolates from humans and those from animals, food or the environment in close contact to humans.