三种方法检测梅毒螺旋体抗体的比较

应用ELISA法、TRUST法和TPPA法分别检测梅毒患者血清标本中梅毒螺旋体IgG抗体,比较3种方法的敏感性和特异性,选择一种适合于梅毒螺旋体抗体检测的高敏感性和高特异性的血清学检测方法。     

梅毒实验室检测方法的研究进展

梅毒是由梅毒螺旋体引起的一种严重危害人类健康的性传播疾病,选择敏感性高、特异性强的检测方法对于梅毒的确证和临床指导应用均具有很重要的意义。当前,有多种梅毒实验室检测方法,其中直接检测法在近十年的临床诊断中仍被经常使用,血清学检测法仍然是目前梅毒实验室诊断的主要方法,以各类PCR技术为代表的梅毒分子生物学检测方法因其具有高度的特异性和敏感性已被广泛应用于临床检验。对梅毒实验室检测技术中直接法、血清学检测法及PCR检测法三类方法的研究进展进行了综述。     

一步聚合酶链反应法快速鉴定并区分巴通体种

鉴于巴通体分离培养的困难及血清学方法敏感性和特异性不高,前人已经建立了其他的检测方法,包括多步聚合酶链反应(PCR)扩增法、PCR-RFLP、PCR-序列分析等,但其操作步骤均较繁琐、复杂.本文作者建立了一步PCR法用于与医学相关的巴通体6个种的鉴定.     

肾综合征出血热早期诊断方法的比较

应用免疫-PCR方法和ELISA法对比检测96份肾综合征出血热(HFRS)患者血清标本中特异性IgM抗体,结果免疫-PCR方法的阳性检出率高于ELISA法,表明免疫-PCR方法是一种可用于HFRS早期诊断的高敏感性的血清学检测方法。     

064一种对乙型肝炎病毒快速基因分型的聚合酶链反应

根据基因组的差别,目前可以将全世界范围内的乙型肝炎病毒(HBV)分成A～F 6个基因型.鉴于HBV的基因型有典型的地域分布特点及不同基因型HBV可能在血清学反应、致病性、治疗反应等方面存在差异,进行HBV的基因分型对于弄清病毒传播和疾病发生具有重要意义.目前用于HBV基因分型的方法主要有种系发生分析和限制性片段长度多态性分析,但是这些方法存在不适合大规模基因分型工作和敏感性、特异性不足等方面的缺点.本文介绍了一种使用类型特异的引物进行聚合酶链反应(PCR)的简单、快速、特异的HBV基因分型方法.     

细小病毒B19感染检测方法的研究进展

本文综述了细小病毒Ｂ１９感染检测方法的研究进展。病毒分离目前仍处于实验研究阶段;电镜及免疫组化法检测阳性率不高,限制了其使用;血清学方法多用重组抗原进行,血清中病毒特异性ＩｇＭ阳性可做为近期感染的指标,但由于与风疹病毒的交叉反应,该方法与病毒ＤＮＡ检测结合使用结果更为可靠;核酸杂交法敏感性高,可用于常规诊断和流行病学调查,但易出现假阳性,特别是同位素探针,敌目前多倾向于用非放射性标记探针;ＰＣＲ法     

结核分枝杆菌Rv3871抗原优势肽段的克隆表达及抗原性鉴定

目的:为了提高结核病诊断试剂的特异性和敏感性,克隆表达结核分枝杆菌H37Rv株RD1区Rv3871抗原优势肽段,并应用ELISA法对其抗原性进行初步鉴定。方法:利用Biosun生物信息学软件对Rv3871抗原进行表位分析,通过PCR从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增Rv3871抗原优势肽段编码基因,在大肠杆菌HB101中进行表达,采用间接ELISA法初步评价其抗原性。结果:Rv3871-1肽段检测的敏感性为32.5%(13/40),特异性为97.2%(35/36);Rv3871-2敏感性为45%(18/40),特异性为100%;Rv3871-3敏感性为37.5%(15/40),特异性为91.6%。结论:结核分枝杆菌RD1区Rv3871抗原优势肽段Rv3871-2有较高的特异性和敏感性,有望作为候选抗原用于结核病患者的血清学检测。     

A族乙型溶血性链球菌emm基因测序分型的研究进展

emm测序分型是根据编码M蛋白的emm基因高变区核苷酸序列特异性将A族乙型溶血性链球菌分型的分子生物学技术。与传统血清学分型比较,具有准确,快速的特点,实验室间可方便,快捷地通过网络进行资料比较。在多价疫苗的构建和效能检测上将有很好的发展前景。     

多杀性巴氏杆菌分子分型方法简述

多杀性巴氏杆菌是一种能感染多种动物甚至是人的重要革兰氏阴性病原菌。目前临床上用于多杀性巴氏杆菌诊断的分型方法主要包括血清学分型方法和分子分型方法。其中血清学分型方法主要基于免疫学实验技术建立,操作过程繁琐,技术要求高,工作量大,不适用于临床上大规模快速开展多杀性巴氏杆菌流行病学调查的需要;而基于分子生物学手段建立的分子分型方法相对于传统的血清学分型方法而言具有快速、简单、灵敏、灵活等特点,特别是某些分子分型方法与传统的分型方法形成了较为精确的对应关系,因而在临床上得到了广泛的应用。目前适用于临床上开展多杀性巴氏杆菌分离鉴定的分子分型方法主要包括多重PCR方法及多位点序列分型法(MLST),其中多重PCR方法又包括基于荚膜编码区及脂多糖外核编码簇建立的PCR方法。本文将重点就这3种常用的多杀性巴氏杆菌分子分型方法进行综述,介绍其建立原理、实现手段以及各自的优缺点,为临床上开展多杀性巴氏杆菌的流行病学调查特别是分子流行病学调查提供参考。     

多重连接探针扩增技术在临床病原体检测中的应用

真菌等临床病原体的诊断、基因分型和耐药性检测对于临床诊治十分重要。多重连接探针扩增是一个可以同时定量检测多个基因序列的,简单、有效、快速的方法。其步骤包括待测DNA变性、半探针与待测DNA杂交,半探针的连接、PCR法扩增、凝胶电泳或者毛细管电泳鉴定扩增产物。MLPA已经在临床微生物诊断和研究中有了一定的应用,虽然尚处于起步阶段,但因其操作简便,反应快速,高通量,高敏感性和特异性的特点,拥有良好的应用前景。     

胶体金法与TPPA法检测梅毒特异性抗体的对比研究

目的 :探讨梅毒螺旋体特异性抗体胶体金法 (TPAb)在临床工作中的应用。方法 :以梅毒累旋体明胶凝集试验 (TPPA)为“金标准” ,同时用TPAb法检测梅毒高危人群的血清。结果 :两种方法经 χ2 检验P >0 0 5 ,差异没有显著性 ,Kappa值为 0 86 ,TPAb法其敏感性 88 9% ,特异性 97 8% ,准确性 93%。结论 :TPAb法可推荐用于血清学梅毒特异性抗体检查 ,有助于临床梅毒的快速诊断     

Immuno-PCR法诊断早期梅毒的方法学建立及其应用

目的建立Immuno-PCR法诊断早期梅毒的方法学,评价其灵敏度、特异性、重复性及其临床应用。方法利用基因重组TpN47抗原免疫新西兰兔,制备抗体并用Weston blotting检测;利用抗TpN47抗体作为捕获抗体与血清中TpN47抗原结合,通过链霉亲和素、生物素化抗体、生物素化DNA和PCR扩增等建立Immuno-PCR法检测梅毒螺旋体抗原TpN47体系;评价该方法的灵敏度、特异性和重复性;收集200例临床标本通过Immuno-PCR法、ELISA、TPPA和TURST法进行临床应用比较。结果 Weston blotting结果显示TpN47抗体阳性;Immuno-PCR比ELISA法敏感性强103倍,比TPPA、TURST强105倍;特异性高,重复性好。临床标本中Immuno-PCR法敏感性和特异性分别为86.00%（P〈0.05）和100.00%,ELISA法为71.00%和98.00%,TPPA法为65.00%和100.00%,TRUST法为68.00%和95.00%。结论 Immuno-PCR法检测梅毒螺旋体TpN47抗原敏感性高,特异性强,重复性好,可作为梅毒螺旋体感染的早期诊断方法 。     

甲源性念珠菌的菌种鉴定、药敏分析及与基因分型的关系研究

目的研究甲源性念珠菌的菌种分类和药敏结果,并对咪康唑敏感性不同的白念珠菌和近平滑念珠菌株的基因型进行聚类分析。方法采用ROSCO抗真菌药敏纸片对念珠菌菌株进行药敏分析;ERIC-PCR指纹法分别比较白念珠菌及近平滑念珠菌的咪康唑敏感株,中敏株及耐药株的基因型,并对其聚类分析。结果白念珠菌和近平滑念珠菌对咪康唑的敏感性分别为42%和32%。而对咪康唑敏感性不同的白念珠菌以及近平滑念珠菌的ERIC-PCR指纹图谱未见特异性条带。结论 ERIC-PCR指纹法可用于不同念珠菌菌株的基因分型;但其念珠菌的基因分型与咪康唑耐药无一定相关性。     

淋病奈瑟菌分型的研究进展

淋病奈瑟菌(淋球菌)分型可追溯细菌的来源,了解其地域分布和流行情况,对淋病的防治具有重要意义.常用的淋球菌分型方法有营养、血清学、营养/血清学双重、植物凝集素、基因、耐药谱和质粒分型等.本文就当前的分型概况予以介绍.     

流感病毒的检测和分型技术研究进展

近年来,病毒性流感的不断流行和暴发已引起世界范围的广泛关注。为了更好地对流感病毒进行检测和分型,我们对目前流感病毒常用的血清学检测和分型方法、免疫荧光法、PCR方法、多重RT-PCR法、实时RT-PCR法、依赖核酸序列的扩增法、环介导等温扩增法、焦磷酸测序法、基因芯片技术分别进行了描述,并阐述了其优缺点。     

PCR-CE检测溶脲脲原体生物群的实验研究

建立了一种通用引物-PCR-CE检测溶脲脲原体2个生物群的方法,对这个方法进行了敏感性、特异性及重复性的研究,并与通用引物-PCR-琼脂糖凝胶电泳法进行了比较。研究表明,通用引物-PCR-CE法敏感性高,特异性强,重复性好,在区分溶脲脲原体2个生物群能力上要优于通用引物-PCR-琼脂糖电泳法。     

不动杆菌属的分型研究

本文综述了用于不动杆菌属的１２种分型方法,认为生物分型和抗菌谱分型简便易行,细胞包膜蛋白图谱分型特异性较强,质粒分型不太稳定,脂肪酸分型敏感性差,血清分型和酯酶分型尚需进一步研究,分子生物学分型具有广阔的前景。目前主张联合分型。     

三种检测婴幼儿腹泻A组轮状病毒的方法学评价

目的对婴幼儿腹泻A组轮状病毒的三种不同检测方法进行评价。方法同时采用胶体金、琼脂糖凝胶电泳、逆转录PCR（RT-PCR）对浙江萧山医院1周320份腹泻患儿的标本进行轮状病毒检测,然后进行方法学比较。结果三种方法的阳性检出率分别为36．3％、48．1％和42．8％,经卡方检验三种方法的检出率之间差异均存在统计学意义（P〈0．05）;以琼脂糖凝胶电泳为检测的最终标准,RT-PCR的敏感性为88．9％,特异性达100％;胶体金法的敏感性71．4％,特异性达96．4％。结论胶体金法检测轮状病毒的敏感性和特异性能够满足临床上对轮状病毒快速筛检的要求;PT-PCR法的敏感性和特异性均最高,既可用于临床检测,又是轮状病毒血清G、基因P分型的重要手段,在对无菌体液和环境样本中轮状病毒的检测具有不可比拟的优势。     

非洲猪瘟病毒间接ELISA抗体检测方法的建立

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是一种急性、热性、高度接触性动物传染病,其病原为非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV),临床上以高热、网状内皮系统出血和高死亡率为特征,易感猪群病死率高达100%。为了建立一种基于合成肽技术的非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)抗体血清学检测方法。本研究根据ASFV p30、p54和p72三种重要抗原设计3条合成肽,以此为包被抗原建立了ASFV间接ELISA抗体检测方法,并验证其敏感性、特异性、稳定性以及与进口试剂盒的符合率。结果显示,建立的间接ELISA方法的敏感性为91.4%,特异性为98.1%,批内和批间变异系数分别为3.7%～10.1%和4.7%～14.9%。与进口试剂盒比较,符合率为92.9%。结果表明该方法检测结果准确性高、且稳定性好,可检测ASFV特异性抗体。     

汉坦病毒核壳蛋白重组抗原的制备和基因分型的研究

根据HFRSV汉滩型(HTN)代表株76-118和汉城型(SEO)代表株R22基因资料,设计了两组引物,用电脑软件分析证明设计符合引物标准.以一组引物克隆全长S基因片段和N端的部分S基因片段,并使它们在T7系统进行融合表达和非融合表达.非融合表达产量虽不及融合表达高,但生物活性好.以非融合表达的两个S基因片段产物作间接ELISA的包被抗原,其工作浓度均达1:10 000.用另一组引物建立了逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),检测我国不同地区由8种主要宿主分离的37个HFRSV毒株,2个阳性标准对照毒株和5个阴性对照标本,并与cELISA法比较,二者阳性检出率分别为100%和84.6%,符合率为84.6%,但前者比后者敏感性高15.4%.对其中20个毒株的PCR扩增产物先后用RsaⅠ和HindⅢ作二级酶切,建立了逆转录-聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析(RT-PCR-RFLP)分型法.被定为HTN型的9株,SEO型的8株,余3株未能定型.此20个毒株曾用血清学方法分型,仅11株分型成功,与RT-PCR-RFLP法结果符合.分型成功率RT-PCR-RFLP法比血清法高30%.