北京地区G1—G4型人轮状病毒地方株VP7编码基因的序列分析

本文报告了北京地区流行的４个轮状病毒地方株（Ｇ１－Ｇ４）ＶＰ７编码基因的核苷酸序列。４个地方株的该基因核苷酸全长均为１０６２ｂｐ,读码框架在已往的研究一致。地方株和相同血清型的标准株之间ＶＰ７氨基酸序列具有高度同源性（９２－９４％）,而不同血清型间则是较大（６９－８０％）。不同血清型间氨基酸序列的变异主要存在于高变区内,高变区以外的区域在不同血清型轮状病毒间保守。这一序列分析结果进一步从分子水平分     

北京地区G1-G4型人轮状病毒地方株VP7编码基因的序列分析

本文报告了北京地区流行的４个轮状病毒地方株（Ｇ１－Ｇ４）ＶＰ７编码基因的核苷酸序列。４个地方株的该基因核苷酸全长均为１０６２ｂｐ,读码框架和已往的研究一致。地方株和相同血清型的标准株之间ＶＰ７氨基酸序列具有高度同源性（９２％－９４％）,而不同血清型间则变异较大（６９％－８０％）。不同血清型间氨基酸序列的变异主要存在于高变区内,高变区以外的区域在不同血清型轮状病毒间保守。这一序列分析结果进一步从分子水平分析了地方流行毒株的血清型别,揭示了轮状病毒地方流行毒株和标准株之间ＶＰ７序列的变异情况     

在昆虫细胞中表达G2型轮状病毒地方株VP7基因

Ａ组轮状病毒是导致婴幼儿重症腹泻的最主要病毒病原,ＶＰ７是病毒外壳上的主要糖蛋白,它具有中和抗原活性,与病毒的毒力及免疫保护性有关,也是划分病毒血清型的最主要标志之一〔１〕。ＶＰ７基因及其编码蛋白一直是人们研究的主要对象,很多研究工作和诊断试剂都需大...     

G1型A组轮状病毒地方株VP7基因在杆状病毒系统中的表达

Ａ组轮状病毒是导致婴幼儿重症腹泻的最主要病毒病原,每年因轮状病毒腹泻造成的死亡超过１００万人。ＶＰ７是病毒外壳上的主要糖蛋白,具有中和抗原活性,与病毒的毒力及免疫保护性有关。也是划分血清型的主要标志,而对疫苗的研究证明,不同血清型之间的交叉保护作用甚...     

A组轮状病毒G4型地方株VP7基因在杆状病毒系统中的表达

Ａ组轮状病毒是导致婴幼儿重症腹泻的最主要病毒病原,位于病毒外壳上的ＶＰ４和ＶＰ７蛋白具有中和抗原活性,与病毒的毒力及免疫保护性有关。ＶＰ７是外壳上的主要糖蛋白,根据其抗原性的不同,可将Ａ组轮状病毒划分出不同的血清型（Ｇ１～Ｇ１４）［１］,而对疫苗的研...     

人A组轮状病毒北京地方株VP4血清型特异片段编码基因的序列分析

轮状病毒是引起婴幼儿严重腹泻的重要病原,其第四基因编码主要中和抗原VP4,而VP4可裂解为VP8和VP5两个片段。VP8为抗原型特异性片段。克隆并测定了具有代表性的三个轮状病毒北京株VP4编码基因5′端（VPS＋VPS一部分）887个核苷酸序列并据此推导出其氨基酸序列。结果表明,相同血清型的地方株和标准株之间具有高度同源性（92％～966％）,不同血清型间则变异较大（70．5％～71％）。氨基酸最大变异处位于aa84～172,并对胰酶作用位点在致病性中的可能性进行了讨论。     

人A组轮状病毒地方株外壳蛋白VP4的原核表达

目的：制备轮状病毒外壳蛋白VP4。方法：从病人粪便中分离的毒株中提取病毒dsRNA为模板,经RT—PCR获得编码VP4截短蛋白基因片段cDNA(1—1253bp),将VP4基因片段克隆于pGEX-4T-2融合表达载体中,经dot印迹筛出阳性重组子,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)。工程菌经IPTG诱导,11％聚丙烯酰胺凝胶电泳。结果：Western印迹分析表明,工程菌能正确表达VP4蛋白片段,且具有良好的抗原性。结论：为研制轮状病毒重组疫苗、亚单组疫苗、转基因植物口服疫苗做了前期准备。     

SA11株轮状病毒VP7基因的克隆及表达

采用RT PCR方法 ,从提取的SA1 1株轮状病毒总RNA中扩增出VP7基因片段 ,进行鉴定后 ,将该片段克隆于真核表达载体pEF1 HisC dhfr,构建成重组质粒pEF1 HisC dhfr VP7,然后用质脂体法转染COS 7细胞 ,进行真核系统的表达 .获得了长 981bp的PCR片段 ,序列分析结果与已知VP7序列相同 .表达后经细胞超声破碎 ,Westernblot检测表达产物 ,在相对分子质量 38× 1 0 3 处有表达条带 ,表达蛋白主要存在于上清中 .因此 ,获得了VP7基因 ,并在COS 7细胞中获得了表达 ,表达蛋白质免疫Balb c小鼠 ,获得了具有特异性结合活性的抗体     

长春地区轮状病毒流行株VP7基因的遗传变异

A组轮状病毒是引起婴幼儿秋冬季病毒性腹泻的主要病原.目前没有有效的治疗药物,应用安全而有效的疫苗是控制重症腹泻的首要措施.对当地A组轮状病毒流行株的主要中和抗原VP7的编码基因进行遗传变异分析,可以为疫苗的应用和开发提供有益的指导.利用ELISA方法对长春地区1999～2005年的腹泻患儿标本检测A组轮状病毒,RT-PCR方法对阳性标本进行G血清分型,发现长春地区2001年以后流行的轮状病毒以G3型血清为主.选取1999～2005年的G3型轮状病毒标本31份,对其VP7基因进行扩增、克隆、测序,经过计算机分析比对,31株G3型轮状病毒VP7基因核苷酸序列没有显著差异.同一流行季节的毒株具有较相似的遗传变异特征.在2003年轮状病毒流行季节内,有6株G3型分离株的VP7基因在碱基1 038位置上出现一个碱基缺失.毒株发生在A、B、C三个高变区的碱基突变,位点相同或者位置临近.2002年以后毒株的基因突变增加,非高变区的碱基变异增加,这可能有助于维持G3型轮状病毒成为流行株.有规律的变异多发生在高变区,但是非高变区的非连续性变异的增加值得引起注意.     

G9型人A组轮状病毒LL52696与LL52727株的主要基因及其编码蛋白特征的分析

人A组轮状病毒(Human rotavirus,HRV)是引起世界范围婴幼儿重症腹泻的最主要病原,也是导致发展中国家婴幼儿死亡的主要病因之一[1-3],世界卫生组织统计每年大约引起611 000婴儿和儿童死亡,特别是发展中国家[4].HRV感染广泛,且改善营养状况和卫生条件对HRV发病危险影响不大,因此在发达国家和发展中国家HRV感染率接近.HRV引起的腹泻至今无特效药,发展疫苗对控制HRV感染的作用就显得特别突出.     

Longitudinal analysis of VP7 gene of group A human rotavirus G2P[4] strains circulating in the pre‐vaccine era in Sapporo,Japan from 1991 to 2011

Sequence analysis of the VP7 gene in 23 group A human rotavirus G2P[4] strains obtained during 1991–2011, that is, the pre‐vaccine era, in Sapporo, Japan showed considerable genetic diversity, mainly in variable regions. Recent G2P[4] epidemic strains were located in sublineage IVa with a distinctive substitution of D96N. This study provides background data on the genetic variability of G2P[4] rotavirus‐VP7 gene prior to the widespread use of rotavirus vaccines in Japan.     

Genetic variation in the VP4 and NSP4 genes of human rotavirus serotype 3 (G3 type) isolated in China and Japan

Sequence analyses of the VP4 and NSP4 genes were performed on twenty human isolates of serotype G3 rotavirus obtained from China and Japan. One isolate from China, CHW17, possessed P[4] genotype VP4 and KUN group NSP4 genes which are associated with G2. One isolate (02/92) from Japan, which was shown to have a wider spacing between RNA segments 10 and 11 by RNA polyacrylamide gel electrophoretic analysis like AU-1, possessed P[9] genotype VP4 and AU-1 group NSP4 genes. The other isolates had P[8] genotype VP4 and Wa group NSP4 genes. While the nucleotide sequence conservation among the G3 VP7 genes was more than 79% (Wen et al, Arch. Virol., 1997, 142: 1481-1489), the conservation of VP4 and NSP4 genes in the same genotypes or groups was more than 85%.     

免疫荧光法检测原核和真核细胞中表达的轮状病毒外壳蛋白VP4

目的：用免疫荧光法快速检测原核和真核细胞中表达的轮状病毒（RV）外壳蛋白VP4。方法：以抗VP4的抗体为一抗、FITC标记的羊抗豚鼠IgG为二抗,用免疫荧光方法检测在大肠杆菌BL21（DE3）中重组表达的同源RVVP4;检测SA11或Wa株RV感染MA104细胞后不同时间段病毒VP4的合成及其在感染细胞中的分布情况。结果：用免疫荧光法可直接检测到原核细胞中表达的外源蛋白,也可检测到病毒蛋白在真核细胞中的分布情况。结论：免疫荧光法可特异、方便、快速地检测RV VP4在原核和真核细胞中的表达;来源于RV TB—Chen株的VP4抗体可特异性识别同源病毒VP4,交叉识别SA11或Wa株的VP4。     

Expression and immunoreactivity of a human group a rotavirus Vp4

Rotavirus capsid protein Vp4 plays an important role in the virus adhering and entering the cells. In this study, a Vp4 gene cloned from a rotavirus strain TB-Chen was highly expressed in E. coli BL21 (DE3). The results of the Western blot showed that the protein possesses specific immuno-reactivities and can be specifically recognized by guinea pig antibodies against rotavirus strain SA11 or Wa. Some Vp4 dimers were formed during renaturation. These data obtained from this study provide a strong basis for further study on the structure and function of the Vp4.      

Characterization of bovine rotavirus VP6 and VP7 as glycoproteins using monoclonal antibodies

Bovine rotavirus proteins were analysed by a panel of monoclonal antibodies. Glycosylated epitopes were identified on both inner and outer capsid proteins (VP6 and VP7 respectively). VP7 possessed a periodate insensitive epitope which was, however, sensitive to endoglycosidase H, mixed glycosidases and to protease treatment. This epitope was not detected on viruses grown in the presence of 2-deoxy-D-glucose or tunicamycin. An epitope was detected on VP6 which was sensitive to periodate oxidation. The blotted protein reacted with a glycan assay kit; yet the epitope was not affected by endoglycosidase H and was found on viruses grown in the presence of 2-deoxy-D-glucose or tunicamycin. These results suggest that VP7 and VP6 epitopes are carbohydrate dependent. The VP7 epitope contains an N-linked carbohydrate moiety in contrast to the VP6 epitope which appears to contain O-linked glycosyl units.     

轮状病毒VP4*高聚体的制备及其免疫保护性评价

在前期工作中发现,截短的轮状病毒VP4~*蛋白(aa26–476)在大肠杆菌中能够以可溶形式表达,且在小鼠模型中具有较高的免疫原性和免疫保护性。本研究通过颗粒化进一步提高VP4~*蛋白的免疫保护性。通过37℃水浴加热处理24h使VP4~*蛋白多聚化,通过高效液相色谱、透射电镜、分析超离等分析VP4~*蛋白颗粒化程度,通过酶联免疫吸附试验分析颗粒化对VP4~*蛋白与中和抗体反应性的影响;通过差示量热法分析VP4~*高聚体的热稳定性;最后,通过小鼠母传抗体模型研究颗粒化对VP4~*免疫原性和免疫保护性的影响。结果表明,VP4~*蛋白高聚体结构均一,并且相比三聚体,具有更高热稳定性和中和抗体结合活性;在内毒素20 EU/mg的条件下,与铝佐剂混合,刺激小鼠产生更高滴度的中和抗体;对轮状病毒导致的腹泻具有更高的免疫保护性。综上所述,VP4~*高聚体的研究为轮状病毒基因工程亚单位疫苗的研制提供了更广阔的思路。     

Two Distinct Clusterings of the VP8* Gene of Rotaviruses Possessing the AU-1 Gene 4 Allele

A phylogenetic tree constructed by the unweighted pair group method with arithmetic means (UPGMA) for the VP8* gene from 13 human and two feline rotavirus strains possessing the AU-1 gene 4 allele revealed that these strains could be classified into two clusters which did not correspond with the year of isolation or the host species from which they originated. Nine of 10 human strains and one feline strain isolated in Japan formed one cluster, whereas three human strains from Italy and one feline strain from Australia formed the other. Human strain K8 from Japan was distantly related to the Australo-European clustering.     

G5型人A组轮状病毒LL36755株的VP4、VP6和NSP4编码基因的分子特征

最近在亚洲首次发现并报道了感染人的G5型人A组轮状病毒LL36755株,为进一步探讨其进化来源,克隆了G5型人A组轮状病毒LL36755株的VP4、VP6、NSP4编码基因,并分析其基因序列的分子特征。结果发现卢龙株LL36755为罕见的G5P[6]型,其VP6的亚群为SGⅡ型,NSP4的基因型为B型。系统进化树分析表明,卢龙株LL36755的VP7、VP4编码基因与猪来源的毒株关系密切,而VP6、NSP4编码基因与人来源的毒株紧密相联系。可以推断新的人腹泻A组轮状病毒LL36755株是猪的VP7,VP4编码基因与人的VP6,NSP4编码基因的自然重组;而且该毒株不是G5的原型,很可能是人类轮状病毒与猪轮状病毒毒株的自然重组后逐步进化而来。