一种简便快速筛选重组子的方法

目的：根据碱裂解法抽提质粒DNA的原理,研究应用快检缓冲液方法挑取重组子克隆,从而获得简单易行,快速方便,节省时间,提高工作效率的筛选重组子的方法。方法：不需抽提质粒,只要将菌落接入快检缓冲液后直接进行普通琼脂凝胶电泳分析,就可以快速筛选出重组子。结果：结果和提取质粒酶切鉴定结果一致。结论：经实验证明用快检缓冲液方法筛选重组子是一种简单易行,快速方便,节省时间,提高工作效率并且可靠的方法。     

PCR快速筛选重组克隆方法的建立

目的：建立一种PCR技术快速筛选重组克隆的方法。方法：用Triton裂解菌落作为模板,以pMD-18T载体多克隆位点设计的引物与目的基因猪β-INF引物设计不同组合,PCR扩增待检重组克隆。结果：PCR技术快速筛选出猪β-INF重组克隆并鉴定了插入方向。结论：在采用PCR方法直接使用细菌菌落参与反应可以快速筛选重组克隆。     

一种快速鉴定重组转化子的方法

对于重组DNA的鉴定往往需要两至三天甚至更长的时间。尤其是对那些既无筛选标志,插入DNA片段又与原载体大小差别甚大的重组转化子的鉴定,更加耗时费力。该研究利用PCR方法,建立了一种从转化子菌落中直接鉴定重组DNA的方法,使这一过程缩短为半天,减少了不必要的人力和物力耗费。     

利用寡核苷酸探针快速筛选重组克隆

提出了利用寡核苷酸探针快速筛选重组克隆的方法,在数小时内即可完成杂交和自显影的过程。以克隆羊β－乳球蛋白基因（ＢＬＧ）第一内含子为例进行了说明。     

重组大肠杆菌碱裂解方法的改进

为了降低质粒DNA的生产成本,对经典碱裂解法中的溶液III进行了改进,以表达溶菌酶基因的pcDNKLYZ重组质粒转化的大肠杆菌DH5α为指示菌,用标准碱裂解和改进碱裂解法提取质粒pcDNKLYZ,以提取的质粒产量和质量为指标,判断优化碱性裂解法的性价比,结果显示,用改进后的碱裂解法裂解重组菌,提取的pcDNKLYZ质粒产量和质量等指标与标准方法接近,而成本仅为标准方法的1/4,可用于重组质粒的大规模制备。     

含小插入片段重组子筛选鉴定方法之探讨

基因工程中,重组ＤＮＡ时,当外源ＤＮＡ很小并与载体相差很大时,其目的重组子的筛选鉴定工作不仅量大,而且常规鉴定方法无法采用。本文针对此类重组子的鉴定方法作了探讨,提出了三级四步筛选鉴定法,即：质粒筛选、重组鉴定、目的重组鉴定和双酶切鉴定。该法不仅有效地解决了国内普通实验条件下含小插入片段重组子的鉴定问题,大大缩小鉴定范围,而且快速省耗的鉴定方法也为ｐＧＥＸ载体系统的更广泛应用提供了新的启示。     

重组体的放射免疫筛选

放射免疫检测是一种简便而十分灵敏的基因文库筛选方法,在某些应用中,优于ＤＮＡ探针杂交筛选技术。但目前国内书刊中有关这一技术的详细操作程序介绍甚少。本文在详细地介绍了ｒｇｔｌｌ表达型文库的抗体筛选基础上,还就实验过程中容易出现的问题及可能原因和具体解决方法进行了详尽的讨论。     

单菌落PCR法直接快速鉴定重组克隆

利用单菌落PCR法直接筛选含有GFP、LTB-ST外源基因的重组克隆,阳性克隆可以扩增出目的条带,和质粒PCR扩增的结果一致。同时,单菌落PCR法也可应用于重组质粒转化后的农杆菌的筛选,单菌落PCR法的扩增结果和农杆菌液扩增的结果一致。结果表明,单菌落PCR法是一个有效简便的鉴定重组阳性克隆的方法。     

一种改良的快速筛选重组DNA噬菌体噬斑的原位杂交技术

报道了一种从表达型噬菌体载体——λgt11构建的基因文库中筛选重组DNA噬菌体噬斑的改良蛋白质-蛋白质原位杂交枝术。此法可使噬菌体在硝酸纤维素薄膜上增殖至原噬斑大小,经适当处理后,即可用特异性抗体探针进行原位筛选,以 获得含目的基因编码的特异抗原蛋白的阳性克隆株。与己报道的筛选方法相比,此法具有简便快速、灵敏可靠的特点;也可试用于由表达型质粒载体构建的基因文库之菌落原位筛选。     

利用碱性磷酸酶初步判定二维电泳中蛋白质磷酸化修饰

磷酸化是蛋白质最重要的翻译后修饰形式之一.以二维电泳为基础的蛋白质组学是发现蛋白磷酸化状态改变的有效途径. 本文介绍了在用于二维电泳的蛋白样品制备过程中,利用小牛肠碱性磷酸酶成功去除蛋白质上磷酸基团的过程. 该技术将去磷酸化作用和蛋白质组学手段联系在一起,为蛋白质磷酸化修饰的初步判定提供了简便、经济、切实可行的方法.     

一种产邻苯二酚菌株高通量筛选方法

目的：对产邻苯二酚菌株进行筛选。方法：采用前期筛得的产邻苯二酚菌为出发菌株,通过硫酸二乙酯诱变的方法使该菌株突变,同时建立96孔板培养和酶标仪检测方法对产邻苯二酚菌株进行高通量筛选。结果：硫酸二乙酯的终浓度为0.1%,诱变时间为8 min的条件下,突变菌致死率为84.5%,突变效果最好。筛选培养基中吸光值（495nm）和富集培养基中菌液浊度值（OD630）的加和值较大的突变菌株产邻苯二酚能力高。通过诱变和筛选得到的菌株,产邻苯二酚浓度可达0.87mg/ml,比出发菌株的提高了262.5%。经过形态学和生理生化反应,初步鉴定该菌株属于假单胞菌属（Pseudomonas sp.）。结论：硫酸二乙酯诱变和96孔板筛选的方法能以高通量方式快速筛选出产邻苯二酚菌株。     

Refractoriness of erythrocytes infected with Plasmodium falciparum gametocytes to lysis by sorbitol

Unlike erythrocytes infected with mature asexual parasites of Plasmodium falciparum, those infected with gametoeytes are not lysed by 5% sorbitol solutions. This observation was used to devise a method for producing synchronized cultures of gametocytes, free of asexual stage parasites. The refractoriness to sorbitol suggests that the major anion transport pathway, which appears in the membrane of erythrocytes infected with asexual stage parasites, is not present in cells infected with gametocytes.     

棉花BAC文库快速筛选法

目的:构建棉花细菌人工染色体(Bacterial Artificial Chromosome,BAC)文库的快速筛选法,以期从BAC文库中大量、快速、高效筛选出特定BAC克隆,为从事基因组测序、分离和分析特定基因、构建物理图谱及基因图位克隆等生物学技术研究奠定基础。方法:构建了整板、行、列的三维混合池,以菌液PCR为基础,从BAC文库中筛选出含有特定DNA片段的BAC单克隆。结果:从BAC文库的3 456个克隆中,共筛选出16个阳性单克隆,涉及13条染色体、11个SSR标记。结论:该文构建的棉花BAC文库筛选体系,筛选快速、准确,适合从BAC文库中大量筛选BAC单克隆。结合当前的多种BAC文库筛选方法进行探讨,根据不同的实验目的选择更合适的筛选方法和操作步骤。     

Refractoriness of erythrocytes infected with Plasmodium falciparum gametocytes to lysis by sorbitol

Unlike erythrocytes infected with mature asexual parasites of Plasmodium falciparum, those infected with gametoeytes are not lysed by 5% sorbitol solutions. This observation was used to devise a method for producing synchronized cultures of gametocytes, free of asexual stage parasites. The refractoriness to sorbitol suggests that the major anion transport pathway, which appears in the membrane of erythrocytes infected with asexual stage parasites, is not present in cells infected with gametocytes.     

Immobilized Metal Affinity Electrophoresis: A Novel Method of Capturing Phosphoproteins by Electrophoresis

An immobilized metal affinity electrophoresis (IMAEP) method is described here. In this method, metal ions are immobilized in a native polyacrylamide gel to capture phosphoproteins. The capture of phosphoproteins by IMAEP is demonstrated with immobilized metals like iron, aluminum, manganese, or titanium. In the case studies, phosphoproteins α-casein, β-casein, and phosvitin are successfully extracted from a protein mixture by IMAEP.     

快速可靠的双链PCR产物直接测序法

利用T7DNA聚合酶在低温下仍具较高活性的特点,在热变性后低温下进行测序反应,使用该方法对多种PCR产物进行序列分析均取得较好的结果．     

A mass balance study to assess the extent of contaminant removal achieved in the operations for the primary recovery of plasmid DNA from Escherichia coli cells

Mass balances were performed on an alkaline lysis operation for the primary recovery of supercoiled plasmid DNA as part of a process for plasmid gene preparation. Escherichia coli DH5alpha/pSVbeta was cultured in defined medium by fed-batch fermentation and harvested at the end of the exponential phase. Alkaline lysis of the recombinant cells was performed at fixed shear rates ranging between 46 and 461 s(-1), with neutralization 100 and 300 s after the initiation of the lysis. Mass balance calculations were used to optimize the operating conditions for carrying out the alkaline lysis operation. The results indicated that a plasmid yield of 75% and purity with respect to total DNA of 60% were achievable during the primary recovery operation. The influences of key contaminants, including the soluble proteins and the suspended solids, as they bear on the subsequent purification operations, were evaluated and discussed.