矮丛蓝莓叶片的愈伤组织诱导及植株再生

以矮丛蓝莓'Blomidon'品种的试管苗叶片为外植体,研究不同培养基、激素、转接时间以及转接方式对愈伤组织诱导及植株再生的影响.结果表明:WPM1/2为适宜的培养基;添加0.5 mg·L~(-1) CPPU+1.0 mg·L~(-1) ZT+0.5 mg·L~(-1) TDZ和0.5 mg·L~(-1) CPPU+0.5 mg·L~(-1) ZT+1.0 mg·L~(-1) TDZ诱导愈伤率较高达100%;ZT、CPPU与生长素IAA、IBA的配比诱导愈伤率效果不佳;添加ZT诱导的愈伤组织适合20 d后转接,CPPU诱导的愈伤组织适合50 d后转接;转接方式均以固体培养为宜.矮丛蓝莓'Blomidon'最适宜培养基为WPM1/2+0.5 mg·L~(-1) CPPU+1.0 mg·L~(-1) ZT+0.5 mg·L~(-1) TDZ,其诱导愈伤组织50 d后转接平均分化芽数最多达10.26个.     

轮叶党参的组织培养及植株再生研究

以轮叶党参为材料,研究了不同外植体、激素组合、培养基及光照条件对愈伤组织诱导及植株再生的影响.结果表明,叶片是轮叶党参组织培养较为合适的外植体.外植体在添加0.5 mg·L~(-1) 2,4-D+1.0 mg·L~(-1) 6-BA+0.5 mg·L~(-1) KT的MS培养基上愈伤组织诱导率最高可达100%;愈伤组织转移到附加0.75 mg·L~(-1) 6-BA+0.5 mg·L~(-1) NAA的MS培养基进行继代培养,增殖后的愈伤组织转移到附加0.5 mg·L~(-1) 6-BA+0.2 mg·L~(-1) NAA的1/2MS分化培养基进行分化,其分化率达89.4%;将分化出的芽转接到附加0.2 mg·L~(-1) IAA+0.2 mg·L~(-1) NAA的1/2MS培养基,生根率达92.5%.暗培养诱导出愈伤组织后转到16 h·d~(-1)光照条件下,愈伤组织增殖倍数和分化率显著提高,再生苗健壮,长势强.     

藏药匙叶翼首草高频组织培养再生体系优化研究

以匙叶翼首草种子为材料,探索种子最佳消毒方法,对影响无菌苗外植体愈伤组织诱导、增殖及植株再生的因素进行了研究。结果表明:(1)剥去外种皮的种子,经75%乙醇1min+0.1%HgCl_27min+50%多菌灵500倍液30min消毒后,在1/2 MS培养基中的发芽率达60.67%,无污染。(2)无菌苗的叶片和茎段都适宜诱导愈伤组织,在培养基MS+5.0mg·L~(-1) 6-BA+2.0mg·L~(-1) 2,4-D中可在10d内诱导出生长旺盛的愈伤组织,愈伤诱导率分别为84.00%、97.33%。(3)适宜的愈伤组织增殖培养基为MS+3.0mg·L~(-1) 6-BA+2.0mg·L~(-1) IAA,培养20d的叶片和茎段愈伤组织的生长率分别为74.37%、70.52%。(4)适宜的丛生芽诱导培养基为MS+3.0mg·L~(-1) 6-BA+2.0mg·L~(-1) IAA+250mg·L~(-1) L-脯氨酸+150mg·L~(-1)水解酪蛋白,30d后茎段和叶片的丛生芽发生率分别达到100%、94.44%。(5)再生苗在1/2 MS+0.5mg·L~(-1) NAA培养基中生根培养30d,生根率为100%。匙叶翼首草高效稳定的再生体系为保护其野生资源和工厂化育苗提供了有效途径。     

丹参不同愈伤组织诱导及遗传转化体系优化

为了获得满足不同目的组织培养材料和稳定高效的遗传转化体系,该研究以丹参叶片和茎段为外植体,采用含不同浓度的植物激素(植物生长物质)的Murashige Skoog(MS)培养基,探索诱导丹参产生不同愈伤的条件;采用正交法考察浸染时间、共培养时间、筛选压等对农杆菌介导的丹参遗传转化体系的影响,并根据出芽率及转化阳性率优化丹参遗传转化体系。结果表明:(1)能较快诱导丹参叶片产生愈伤的是MS+0.5mg·L~(-1)6-BA+0.5 mg·L~(-1)2,4-D;诱导茎较快产生愈伤的是MS+0.1mg·L~(-1)NAA+0.5 mg·L~(-1)6-BA;1 mg·L~(-1)反式玉米素(ZR)可能有利于诱导产生含有丹参酮的愈伤组织;1.0 mg·L~(-1)2,4-D较易诱导丹参愈伤组织生根。(2)以卡那霉素为筛选剂时农杆菌GV3101介导的丹参遗传转化的条件为浸染5 min、共培养1 d、卡那霉素30 mg·L~(-1)筛选,经PCR鉴定转基因阳性率为60%;而用10 mg·L~(-1)链霉素筛选阳性率达70%。该研究结果确定了丹参不同愈伤组织诱导条件,明确了以卡那霉素为筛选剂时农杆菌GV3101介导的丹参遗传转化的条件,换用10 mg·L~(-1)链霉素筛选时体系更加稳定、更易操作、更易重复。     

濒危中药材太白米组织培养及总黄酮含量测定

以太白米(Notholirion bulbuliferum)地下小鳞茎为外植体,通过在MS基本培养基添加不同浓度2,4-D、KT、TDZ和NAA,研究不同植物生长调节剂对太白米愈伤组织诱导的影响.结果显示,4种植物生长调节剂在不同水平上对愈伤组织诱导有显著作用(2,4-D、TDZ,P<0.01;NAA、KT,P<0.05),诱导愈伤组织的最佳激素组合是0.5 mg·L~(-1) 2,4-D+0.5 mg·L~(-1) NAA+0.2 mg·L~(-1) KT+0.1 mg·L~(-1) TDZ,愈伤组织在该培养基上继代培养有不定芽分化,如用相同浓度ZT代替KT则分化的不定芽增多.HPLC分析显示野生小鳞茎、愈伤组织和不定芽中总黄酮含量无显著差异,分别为干重的13.3%、11.4%和11.9%.     

塔杨松散型均质胚性愈伤组织培养体系

为了获得塔杨(Populus×canadensis Moench‘Tower’)松散型、均质、胚性愈伤组织(LHEC),以塔杨试管苗叶片为外植体,通过不同浓度激素(BA、KT、2,4-D)、蔗糖和无机盐处理,建立了松散型愈伤组织(LC)诱导—继代培养—胚性愈伤诱导的高效体系。结果显示:塔杨叶片在低蔗糖和低无机盐(1/4MS+2 mg·L~(-1)2,4-D+1mg·L~(-1)BA+10 g·L~(-1))的培养基上培养可以诱导出完全的LC(诱导率100%)。LC在继代培养基(MS+2.0mg·L~(-1)2,4-D+2.0 mg·L~(-1)BA+Vc100 mg·L~(-1)+30 g·L~(-1))上进行2~3次转接后,再转移到LHEC培养基(MS+0.5 mg·L~(-1)2,4-D+3 mg·L~(-1)BA+Vc100 mg·L~(-1)+40 g·L~(-1)蔗糖)上培养4~5周(每7天转接1次),即可诱导出具有许多球状体(原胚状体)的松散型胚性愈伤组织。此外,适当的2,4-D与BA浓度比例,可以使LC保持细胞的松散特性、不形成根、无褐变,生长快;含有30 g·L~(-1)蔗糖的培养基利于LC生长和LHEC的形成;维生素C能较好的抑制继代培养中的褐变;BA有利于形成LC,而KT有利于紧密型愈伤组织的形成,同时BA处理的愈伤组织生长较KT处理的快;当2,4-D浓度为0.5~1 mg·L~(-1)时,随着BA浓度的增加,LHEC的数量也随之增加,当BA为3 mg·L~(-1)时,LHEC数量达到最大值100%。本文还对影响愈伤组织胚性化的主要因素进行了讨论。提出的各项建议对均质胚性愈伤组织LHEC的培养有重要的指导意义。     

射干真叶、花蕾诱导愈伤组织的研究

目的:建立射干愈伤组织的诱导体系。方法:采用MS培养基为基本培养基,研究不同浓度激素配比及不同AgNO_3浓度对射干真叶、花蕾诱导愈伤组织的影响,并利用显微技术鉴定其愈伤组织类型。结果:射干无菌苗真叶愈伤组织诱导的最佳培养基为:MS+2,4-D 1. 0 mg·L~(-1)+6-BA 1. 5 mg·L~(-1)+NAA 1. 0mg·L~(-1)+AgNO_315mg·L~(-1),花蕾愈伤组织诱导的最佳培养基为:MS+2,4-D 1. 0 mg·L~(-1)+6-BA 1. 0 mg·L~(-1)+NAA 1. 0 mg·L~(-1),诱导率均高于60%,其中2,4-D对射干愈伤组织诱导至关重要,AgNO_3对射干真叶胚性愈伤组织的形成有一定的影响。结论:花蕾是射干愈伤组织诱导较理想的外植体材料,获得的高效愈伤组织诱导条件将为后续射干细胞悬浮体系的成功构建奠定基础。     

胡杨杂种叶片组培技术研究

目的:优化胡杨杂种叶片组培技术进而为其遗传转化研究奠定基础。方法:以胡杨杂种叶片为外植体,以WPM为基本培养基,研究不同植物生长调节剂对叶片诱导愈伤组织、愈伤组织诱导不定芽、以及不定芽进一步诱导不定根的作用效果。结果:胡杨杂种叶片最佳脱菌方式:0.1%HgCl_2脱菌5 min;叶片诱导愈伤组织的最适培养基为WPM+0.4 mg·L~(-1)6-BA+0.4 mg·L~(-1)NAA,诱导率可达100%;愈伤组织诱导不定芽的最适培养基为WPM+0.5 mg·L~(-1)6-BA+0.2 mg·L~(-1)NAA,诱导率可达100%;诱导不定根的最适培养基为1/2WPM+2.0 mg·L~(-1)IBA+0.02 mg·L~(-1)NAA+0.2 mg·L~(-1)GA_3,生根率可达100%。以上3种培养基均需添加30 g·L~(-1)蔗糖,30 g·L~(-1)琼脂,pH调至5.8。结论:本研究建立了以胡杨杂种叶片为外植体的组培技术,为后序进行胡杨杂种批量化生产及其遗传转化研究提供重要参考。     

澳洲鸽子石斛组织培养快速繁殖研究

以澳洲鸽子石斛(Dendrobium kingianum Bidwill)幼嫩假鳞茎为外植体进行组织培养和快速繁殖研究。结果表明:采用合适的消毒方式,外植体消毒成功率可达92.5%。MS培养基添加5.0 mg·L~(-1) 6-BA适合用于不定芽的诱导和前期增殖,MS培养基+0.5 mg·L~(-1) NAA+2.0 mg·L~(-1) KT的增殖倍数最高,为6.96。丛生芽诱导出愈伤组织的最佳培养基为MS+0.25 mg·L~(-1) 2,4-D,诱导率为80%;愈伤组织分化的最佳培养为MS+1.0 mg·L~(-1) 6-BA,愈伤组织分化芽数为381.99个·g~(-1)。MS+2.0 mg·L~(-1) IBA+10%香蕉泥+1 g·L~(-1)活性炭最适合于生根壮苗培养;试管苗在兰石:泥碳土(1:1)的混合基质中移栽3个月后,成活率达100%,且生长速度快,基质成本较低,适合澳洲鸽子石斛试管苗的商业化栽培。     

红花草莓的组织培养与快繁技术研究

以红花草莓叶片为外植体,通过筛选诱导愈伤组织、不定芽及壮苗、生根的培养基,建立一套实用且易推广的红花草莓组培快繁技术体系。结果表明:在愈伤组织的诱导过程中TDZ的诱导效果优于6-BA,TDZ与NAA配合使用效果优于与IBA的组合。6-BA浓度为0.5 mg·L~(-1)时不定芽诱导率高达86.6%。低浓度的6-BA和8 g·L~(-1)的琼脂更有利于壮苗培养,NAA比IBA更有利诱导生根。综上述,最适红花草莓愈伤组织的诱导培养基为MS+1.0 mg·L~(-1)TDZ+0.5 mg·L~(-1)NAA+30 g·L~(-1)蔗糖+7 g·L~(-1)琼脂;最适不定芽分化的培养基为MS+0.5 mg·L~(-1)6-BA+0.1 mg·L~(-1)NAA+30 g·L~(-1)蔗糖+7 g·L~(-1)琼脂;最适壮苗培养基为MS+0.1 mg·L~(-1)6-BA+0.1 mg·L~(-1)NAA+30 g·L~(-1)蔗糖+8g·L~(-1)琼脂;最适生根培养基为MS+0.5mg·L~(-1)NAA+30 g·L~(-1)蔗糖+8 g·L~(-1)琼脂。试管苗移栽生长20 d后,成活率高达93%,且后期草莓苗生长壮健。此体系的建立为优质红花草莓种苗大规模生产提供了科学依据和技术支持。     

石蒜愈伤组织的诱导及其继代培养

以石蒜鳞茎为外植体,研究了不同激素组合、鳞茎不同部位和不同生长时期等因素对石蒜愈伤组织诱导的影响及其继代培养。结果表明：MS＋2,4-D 1 mg·L~（-1）＋6-BA 1 mg·L~（-1）激素组合能较好的诱导出石蒜愈伤组织,诱导率达61.13%;外植体的选择是石蒜愈伤组织诱导的关键因素,内层鳞茎诱导愈伤组织的效果最好;在一个生长周期中,9、10月的鳞茎作为外植体诱导愈伤组织最佳;MS＋2,4-D 0.5 mg·L~（-1）＋KT 0.5 mg·L~（-1）是愈伤组织较好的继代培养基,继代周期为24～27 d。     

诺丽叶片的离体再生

以诺丽(Morinda citrifolia)叶片为外植体,在添加不同激素种类和浓度的MS培养基上进行离体培养,建立两种离体再生模式:模式Ⅰ为先脱分化愈伤组织,再分化不定根和不定芽;模式Ⅱ为直接培养生根后分化不定芽。结果表明:在模式Ⅰ中,诱导诺丽叶片产生愈伤组织的最优培养基为MS+0.1 mg·L~(-1)6-BA+2.0mg·L~(-1)2,4-D;诱导叶片愈伤组织再分化出不定根和不定芽的最优培养基为MS+1.0 mg·L~(-1)6-BA+0.4 mg·L~(-1) NAA或MS+2.0 mg·L~(-1)6-BA+0.4 mg·L~(-1) NAA,其中MS+1.0 mg·L~(-1)6-BA+0.4 mg·L~(-1) NAA生根时间最早为10 d左右,根系较发达,而MS+2.0 mg·L~(-1)6-BA+0.4 mg·L~(-1) NAA生根时间在15 d左右,根系发达。在模式Ⅱ中,诱导叶片直接生根长芽的培养基为MS+1.0 mg·L~(-1)6-BA+0.4 mg·L~(-1) NAA。将模式Ⅰ和模式Ⅱ中,完成诺丽叶片离体再生的苗切下后接种到MS+0.2 mg·L~(-1) NAA培养基中诱导生根,15 d左右分化出不定根,45 d获得完整植株。该研究结果为后续的遗传转化和基因改良研究奠定了基础。     

无芒雀麦组织培养再生体系的建立

以无芒雀麦(Bromus inermis)的成熟种子为外植体,建立其组织培养再生体系,筛选最适愈伤组织诱导、分化及再生植株生根培养基,为之后的转基因实验奠定基础。结果表明:MS+1 mg·L~(-1) 2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)+0.5 mg·L~(-1) 6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)为最佳愈伤组织诱导培养基,诱导率为68.7%;MS+2 mg·L~(-1)萘乙酸(NAA)+1 mg·L~(-1) 6-BA为最佳分化培养基,分化率高达100%;不添加任何植物生长调节物质的1/2MS培养基为最佳生根培养基;组培苗移栽至蛭石与珍珠岩3:1(V/V)的基质中,30 d后成活率可达70%~80%。     

绿花百合胚性愈伤组织诱导与植株再生研究

建立绿花百合(Lilium fargesii Franch.)胚性愈伤组织诱导体系,为保护和合理利用这一重要植物资源提供高效、稳定的再生技术途径。以绿花百合鳞片为外植体,通过正交实验研究不同激素种类及其质量浓度对绿花百合胚性愈伤组织诱导、胚状体和小鳞茎分化及植株再生的影响。结果表明:较适宜诱导胚性愈伤组织的培养基为MS+6-BA 0.5 mg·L~(-1)+NAA 0.5 mg·L~(-1)+2,4-D 0.1 mg·L~(-1),出愈率达89.29%,小鳞茎发生系数亦达4.7;胚性愈伤组织增殖及小鳞茎发生培养基为MS+6-BA 1.0 mg·L~(-1)+2,4-D 0.1 mg·L~(-1),繁殖倍数5.0/35 d;根的诱导则在1/2MS+NAA 0.2 mg·L~(-1)的培养基上进行,生根率达100%,幼苗移栽至排水良好的沙土中,保温保湿培养35 d后,成活率可达90%以上。本研究为保持绿花百合优良品种特性、种苗繁育提供了有效途径,也为保护其野生资源,发展人工栽培和利用胚状体进行无性育种奠定了基础。     

羊草成熟胚诱导愈伤组织及植株再生系统的优化

羊草(Leymuschinensis)为异源四倍体禾本科牧草,利用成熟胚诱导愈伤组织获得再生植株的效率极低,难以运用遗传转化方法进行品种改良。我们以羊草成熟胚为外植体,使用适宜羊草愈伤组织生长的新型培养基配方,筛选诱导愈伤组织、不定芽分化及生根阶段的最适植物激素浓度、光照和温度条件,从而优化羊草成熟胚的组织培养方案。研究结果表明,羊草成熟胚诱导阶段2,4-D的最适浓度为2.0mg·L~(-1),变温暗培养,诱导率可达74.1%;分化阶段6-BA和NAA的最适浓度均为1.0 mg·L~(-1),分化率可达57.1%;生根阶段NAA的最适浓度为0.25 mg·L~(-1),移栽后成活率为100%。     

藏药山茛菪组织培养技术研究

以田间栽培两年生山莨菪幼芽(休眠芽)、带叶柄幼叶为外植体,通过器官培养分化芽的途径达到快速繁殖的目的。MS基本培养基附加NAA0～1.0mg·L~(-1)+6-BA2.0～3.0mg·L~(-1)+ZT0～3.0mg·L~(-1),适于丛生芽的诱导与增殖;附加2,4-D2.0mg·L~(-1)+NAA0.2mg·L~(-1)+6-BA0.2mg·L~(-1),适于愈伤组织的诱导与继代培养,诱导率高达93.2%;1/2MS培养基附加NAA1.0mg·L~(-1)+3.0%的蔗糖,适于生根诱导,生根率为100%。     

褐纹报春苣苔组织培养与快速繁殖

褐纹报春苣苔(Primulina glandaceistriata)是一种极具观赏价值的喀斯特地区野生花卉,目前尚未有褐纹报春苣苔组培快繁的研究报道。该研究以褐纹报春苣苔的叶片为外植体,通过两种途径建立其组培快繁体系。结果表明:适宜的不定芽诱导培养基为MS+6-BA 2.0 mg·L~(-1)+NAA 0.10 mg·L~(-1),适宜的不定芽增殖培养基为MS+ZT 2.0 mg·L~(-1)+NAA 0.10 mg·L~(-1)+活性炭0.05 g·L~(-1),增殖系数为11.09;适宜的愈伤组织诱导培养基为MS+TDZ 2.0 mg·L~(-1)+NAA 0.10 mg·L~(-1),适宜的愈伤组织分化培养基为MS+ZT 1.0 mg·L~(-1)+NAA 0.10mg·L~(-1),分化系数为12.46;适宜的生根培养基为1/2MS+IBA 0.1 mg·L~(-1)+活性炭0.05 g·L~(-1)或1/2MS+IBA0.5 mg·L~(-1)+活性炭0.05 g·L~(-1),生根率为100%。该研究结果成功建立了褐纹报春苣苔的组培快繁体系,为今后褐纹报春苣苔的种苗繁殖和遗传转化提供了技术支持。     

盘龙参组织培养与快繁研究

以野生花卉植物盘龙参Spiranthes sinensis的芽、花序为外植体,探讨不同消毒处理及植物生长调节剂对盘龙参组织培养的影响,建立组织培养快繁体系。结果显示,以0.1%升汞消毒6 min处理效果较好;丛生芽形成、花序愈伤组织诱导最适合的培养基组合为1/2MS+6-BA 2.5 mg·L~(-1)+NAA 0.25 mg·L~(-1);最佳增殖培养基组合为1/2MS+6-BA 2.0 mg·L~(-1)+NAA 0.75 mg·L~(-1);最佳生根培养基为1/2MS+NAA 1.25 mg·L~(-1)。     

火炬松(Pinus taeda L.)合子胚愈伤组织的器官发生和植株再生

以火炬松(Pinus taeda L.)的成熟合子胚为外植体在附加NAA和BA的TE培养基上诱导产生了淡黄色、疏松、有光泽的颗粒状愈伤组织。经过愈伤组织的保持和增殖培养及不定芽原基的诱导培养后,进行了不同激素、低温处理和蔗糖浓度对不定芽分化的影响实验。结果表明,在附加0.5 mg·L~(-1)IBA和2 mg·L~(-1)BA的TE培养基上,愈伤组织上的不定芽分化频率最高达62.15%。不定芽分化的最佳低温处理时间是5—6周,最佳蔗糖浓度是25—30 g·L~(-1)。不定芽经伸长培养后取高于1cm的小苗用于生根。在附加IBA、BA和GA_3的TE培养基上不定芽的生很频率最高达46%。     

非洲菊未授粉胚珠的离体诱导和植株再生

通过不同培养基及培养条件的筛选,离体诱导12个品种的非洲菊未授粉胚珠的结果表明:MS中的大量元素 Heller中的微量元素 1/2铁盐 0.2mg·L~(-1)6-BA 0.1mg·L~(-1)IAA较适宜于非洲菊未授粉胚珠愈伤组织的诱导和芽的再生,8个品种中以品种‘E19’诱导愈伤组织的诱导率最高(为23.1%);5个品种可再生形成不定芽,再生率为4.8%-19.6%。用根尖染色体鉴定法鉴定再生的23个植株的倍性的结果显示,21.7%为二倍体,43.5%为单倍体,34.8%为混倍体.