大鳞副泥鳅仔稚鱼生长与消化酶活性变化

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大鳞副泥鳅肠道黏液细胞及消化酶活性分布特征研究

采用阿利新兰-碘酸雪夫氏反应(AB-PAS)染色法及酶学方法研究了大鳞副泥鳅成熟个体肠道各段黏液细胞分布及消化酶活性。结果表明, 大鳞副泥鳅肠道黏液细胞分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ 4种类型。前肠至后肠, 黏液细胞数量逐渐减少。前肠主要分布Ⅲ和Ⅳ混合型黏液细胞, 后肠则以Ⅱ和Ⅳ型酸性黏液细胞为主。肠道胰蛋白酶活性显著高于淀粉酶和脂肪酶。且后肠消化酶活性显著低于前肠和中肠。根据黏液细胞及消化酶活性分布特点, 表明大鳞副泥鳅属于杂食性鱼类, 前肠为其主要的消化吸收场所, 后肠中性黏液细胞的数量较少以及消化酶活性较低, 表明其对食物的消化吸收功能较弱, 与其为辅助呼吸功能的特点相关。     

大鳞副泥鳅雄核单倍体的早期发育

目前,有关鱼类雄核发育的研究已见于川鲽(Platichthys flesus)、马苏大麻哈鱼(Oncorhynchus masou)、虹鳟(Oncorhynchus mykiss)、红点溪鳟(Salvelinus fontinalis)、鲤鱼(Cyprnus carpio)、尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)、泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)、斑马鱼(Danio rerio)等(Purdom,1969;Arai et al., 1979; Scheerer et al., 1991; May et al., 1988; Bongers et al., 1994;Grunina et al., 1990; Meyers, 1995; Masaoka et al., 1995; 赵振山等,1998;Corley-Smith et al., 1996).     

大鳞副泥鳅雄核发育单倍体胚胎发育的研究

雄核发育（ａｎｄｒｏｇｅｎｅｓｉｓ）系指卵子只依靠雄性原核进行发育的生殖方式。尽管已有川鲽（Ｐｌａｔｉｃｈｔｈｙｓｆｌｅｓｕｓ）（Ｐｕｒｄｏｍ,１９６９）、马苏大麻哈鱼（Ｏｎｃｏｈｙｃｈｕｓｍａｓｏｕ）（Ａｒａｉ等,１９７９）、虹鳟（Ｓａｌｍｏｇａ...     

人工诱导泥鳅与大鳞副泥鳅雄核发育单倍体子代的RAPD分析

用３０个经过筛选的随机引物对３组泥鳅雄核发育单倍体、２组大鳞副尼鳅雄核发育单倍体及其相应亲本进行了ＲＡＰＤ分析。结果表明,雄核发育倍体子代与其父本的ＲＡＰＤ谱带相似率为９７．０％－９７．８％,与母本相似率为３０．３％－５９．５％,子代中的非亲本谱眩为０－０．０２９,极少母本特异谱带。这一结果说明雄性发育鱼类单倍体的遗传信息主要来自父本,且存在着个体差异,雄核发育子代存在ＤＮＡ变异和母本ＤＮＡ非特异带,但并非其必要条件。     

大鳞副泥鳅精子结构研究

用光学显微镜和透射电子显微镜对大鳞副泥鳅精子的结构进行研究。结果表明,大鳞副泥鳅的精子主要分为头部、中段和尾部;头部无顶体,在光学显微镜下近圆形,在透射电子显微镜下纵切亦近圆形,主要由细胞核组成,核内染色质致密,核内有核空泡,核外可见清晰核膜,核外可见细胞质,细胞质很少且紧贴细胞核,细胞质外是质膜,质膜在细胞质外呈波浪状;头部后端有一较浅的植入窝,约占核的1/4,植入窝的长轴几乎与细胞核的长轴平行,植入窝内有中心粒复合体;精子的中片与头部无明显分割,位于头部的后方,由中心粒复合体和袖套组成,袖套两边不对称,中心粒复合体由近端中心粒和远端中心粒组成,近端中心粒与远端中心粒之间呈一钝角;精子尾部无侧鳍,可分为主段和末段,尾部主段具有典型的＂9＋2＂的轴丝结构。精子头长为（1.79±0.28）μm,中片长为（1.86±0.42）μm,尾长为（28.06±2.78）μm,全长为（31.65±2.82）μm。     

PCR扩增泥鳅和大鳞副泥鳅SRY盒基因

以特异扩增人ＳＲＹ基因保守区的一对引物,研究了泥鳅和大鳞副泥鳅基因组中ＳＲＹ盒基因的扩增。结果表明,该引物可以在泥鳅中扩增出四条带,其长度分别为２００,５５０、９４０和１０００ｂｐ。在大鳞副泥鳞中扩增出三条带,大小为２００,５５０和９００ｂｐ。经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交显示出二者的阳性带为２００和５５０ｂｐ。阳性带在雌雄个体间和两个物种间无差异。     

大鳞副泥鳅雌雄个体的形态分析

本文利用数理统计手段研究南四湖大鳞副泥鳅雌雄个体形态差异,结果表明大鳞副泥鳅雌雄个体形态整体差异不显著,但体长/吻腹长指标差异显著;1龄鱼、3龄鱼雌性个体体长、体重大于雄性个体,2龄鱼则呈相反趋势;t检验表明,仅3龄鱼雌雄个体间体长、体重差异显著。     

南四湖泥鳅和大鳞副泥鳅随机扩增多态DNA分析初报

采用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对南四湖的泥鳅（Misgurnus anguillicaudatus）和大鳞副泥鳅（Paramisgurnus dabryanus）进行了初步分析。共用10个10bp的OPG组寡核苷酸片段作为引物,筛选出结果好的5个引物,从泥鳅4个体基因组DNA中扩增出142个片段,共有片段12个,特有片段5个;从大鳞副泥鳅3个体基因组DNA中扩增出101个片段,共有片段18个,特有片段5个,在总扩增出的243个片段中,共有片段仅4个。所有扩增片段大小介于0.2-3kb之间。用PoPGen32软件计算出个体间的遗传距离,依此进行UPGMA聚类得到的分子系统树与形态分类学的结果一致,这7个体被聚成2大类,正对应着形态学的2个种：泥鳅和大鳞副泥鳅。     

鳜鱼消化道黏液细胞和6种酶的组织化学定位

采用阿利新蓝-过碘酸雪夫氏(AB-PAS)染色和酶组织化学方法对鳜鱼消化道各部位黏液细胞和6种酶的分布与定位进行了研究。结果显示,黏液细胞可为分为4种类型,食道黏液细胞多数为Ⅲ型和Ⅳ型,未见Ⅰ型和Ⅱ型;胃贲门和胃幽门黏膜上皮仅有Ⅰ型黏液细胞;胃体黏膜上皮则以Ⅲ型细胞为主;幽门盲囊中主要为Ⅱ型细胞;前肠和中肠中Ⅳ型黏液细胞最多,Ⅰ型最少;后肠黏液细胞则以Ⅳ型和Ⅱ型为主。酸性磷酸酶(ACP)主要分布于幽门盲囊和前肠的黏膜上皮;碱性磷酸酶(ALP)主要分布于食道、幽门盲囊和整个肠道黏膜上皮;非特异性酯酶(NSE)主要分布于胃幽门、中肠和后肠黏膜上皮;过氧化物酶(POX)在胃幽门黏膜上皮中活性较高;琥珀酸脱氢酶(SDH)主要分布于胃腺中;腺苷三磷酸酶(ATPase)在消化道各部位均有较多分布。鳜鱼消化道黏液细胞和酶的分布型与其它动物有相似之处,也有其一定的特异性,与消化道不同部位的消化吸收机能相适应。     

大鳞副泥鳅中Sox 9基因保守区的序列分析

应用特异于ＨＭＧ－ｂｏｘ区域的兼并引物,扩增了大鳞副泥鳅的Ｓｏｘ基因。在扩增产物中发现３条大小分别为２２０ｂｐ、５５０ｂｐ和１５００ｂｐ的扩增带。经克隆和ＤＮＡ序列分析,从片段５５０ｂｐ扩增带中得到一个新的基因片段,其可能编码的蛋白质氨基酸序列与人、鸡、小鼠的Ｓｏｘ９基因相似性最高,达到９４％;其与ＨＳＯＸ１０、ＭＳｏｘ１０、ＨＳＲＹ、ＭＳｒｙ的相似性分别为８７％、５５％、４０％和４７％。     

具有内含子的大鳞副泥鳅Sox8基因(英文)

鱼类在脊椎动物系统进化过程中起着承先启后的作用,其性别决定具有原始性、多样性和可塑性。深入研究鱼类的性别决定和分化具有重大的理论意义。Ｓｏｘ基因家族是九十年代发现的一个新的基因家族,其中的许多成员都与性别决定和分化具有直接的关系。大鳞副泥鳅是一种常见的小型鱼类,属于鲤形目鳅科,是少数具有异形性染色体中的一种。本文根据已发表的Ｓｏｘ蛋白质的序列资料,选择在不同物种中保守程度最高的区段设计兼并引物。该组引物可以特异扩增 Ｓｏｘ基因的 ＨＭＧ盒区。以大鳞副泥鳅基因组 ＤＮＡ为模板,在扩增产物中有三条主带,其大小分别为２２０ｂｐ,５５０ｂｐ和１５００ｂｐ,另有一条相当弱的带,大小为７００ｂｐ（Ｆｉｇ．１）。雌雄个体中扩增结果一致。经克隆和ＤＮＡ序列分析,从５５０ｂｐ扩增带中得到一新的基因片段,长５００ｂｐ,编码５３个氨基酸;其余部分长３４０ｂｐ,可能为一内含子,且符合“ＧＴ…ＡＧ”规律（Ｆｉｇ．２）。其可能编码的蛋白质氨基酸序列与小鼠的 Ｓｏｘ８, ９, １０,ＳＲＹ基因的相似性分别为 ９６％, ９４％, ９０％和 ４７％;与人类 Ｓｏｘ ８, ９, １０, ＳＲＹ基因的相似性分别为６４％, ９４％, ５８％和４０％（Ｆｉｇ．３）。     

大鳞副泥鳅的胚胎发育及鱼种培养

大鳞副泥鳅的胚胎发育分为4个阶段共52个发育期。鱼卵受精后饲养50天即成为鱼种。本文比较了不同水温、不同放养密度以及在天然和人工饲料培养下的发育状况,为鱼种生产提供了实验数据。     

消化道组织块黏液细胞的组织化学染色

目的：探索中华蟾蜍、黑斑蛙消化道组织块黏液细胞的组织化学染色。方法：利用阿辛蓝-过碘酸Schiff（AB-PAS）反应,对消化道组织块黏液细胞进行染色和观察。结果：对消化道壁较薄的组织块（食管、小肠、大肠）,采用3％乙酸3min、1％阿尔新蓝30min、3％乙酸3min、3％过碘酸氧化10min、Schiff反应20min染色,即可达到良好染色效果;对消化道壁较厚的组织块（胃）,则应采用3％乙酸9min、1％阿尔新蓝70min、3％乙酸9min、3％过碘酸氧化30min、Schiff反应60min染色,将能达到良好染色效果。结论：经过染色可将黏液细胞分为四个类型：Ⅰ型红色,PAS染色阳性,AB染色阴性;Ⅱ型蓝色,PAS染色阴性,AB染色阳性;Ⅲ型紫红色,PAS染色强阳性,AB染色弱阳性;Ⅳ型蓝紫色,PAS染色弱阳性,AB染色强阳性。     

两种泥鳅中Sox基因的检出(英文)

性别决定基因ＳＲＹ都具有一个高度保守的基因序列──ＨＭＧ－ｂｏｘ,编码Ｓｏｘ蛋白,在胚胎发育过程中起重要作用。本文利用两种引物检测了泥鳅和大鳞副泥鳅的Ｓｏｘ基因。第一对引物特异扩增人类ＳＲＹ基因的保守区。在扩增泥鳅的基因组ＤＮＡ时可见长度分别为２００、５５０、９４０和１０００ｂｐ的四条扩增带。在大鳞副泥鳅中可以扩增出２００、５５０、９００ｂｐ三条带（Ｆｉｇ．１）。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交表明２００和５５０ｂｐ两条带可以和ＳＲＹ基因探针杂交（Ｆｉｇ．２）。第二对引物是兼并引物,可以特异扩增Ｓｏｘ基因的ＨＭＧ－ｂｏｘ区域。以基因组ＤＮＡ为模板可以在大鳞副泥鳅中扩增出２２０、５５０、７００和１５００ｂｐ四条带（Ｆｉｇ．３）;而在泥鳅中则为２２０、５３０、５７０和１５００ｂｐ四条带（Ｆｉｇ．４）。ＰＣＲ产物的长度差异被认为是由于部分Ｓｏｘ基因的ＨＭＧ－ｂｏｘ区域中存在着内含子。没有发现性别特异扩增带。以上结果说明哺乳动物与性决定有关的组分在脊椎动物中是广泛存在的。但这些组分在鱼类中是否与性决定有关,或仅是哺乳动物性决定因子的进化前体尚不得而知。无论如何广泛深入研究鱼类的Ｓｏｘ基因对于揭示性决定系统和因子的进化方式是十分     

两种泥鳅中PdSox8和PdSox9的RFLP分析

以α-32P-dCTP标记的大鳞副泥鳅的PdSox8和PdSox9基因片段为探针,研究了二者在泥鳅和大鳞副泥鳅中的限制性片段长度多态性。结果表明两种探针在6尾大鳞副泥鳅（3♀3 ♂）和6尾泥鳅（3♀3 ♂）的经EcoRI和HindIII完全酶切的基因组DNA中检测到了较丰富的阳性杂交带,并讨论了其产生的可能原因。未发现性特异杂交带。Abstract：With the α-32 P-dCTP-labeled PdSox8 and PdSox9 fragments of Paramisgurnus dabryanus as probes, the Restricted Fragment Length Polymorphism(RFLP) were analyzed in two species of loaches P. dabryanus and Misgurnus anguillicaudatus. The results showed that the plentiful positive bands were observed in the genomic DNA of 6 individuals(3♀3♂) of P. dabryanus and 6 individuals(3♀3♂) M.anguillicaudatus, which were digested thoroughly by EcoRI and HindIII. The possible reasons were discussed. No sex-specific band was observed.